2018屆高考生物一輪復(fù)習(xí) 考點(diǎn)加強(qiáng)課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計(jì)數(shù)學(xué)案

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1、 考點(diǎn)加強(qiáng)課7 微生物的篩選、鑒定、分離與計(jì)數(shù) 從近五年全國(guó)卷高考看，《生物技術(shù)實(shí)踐》專題的命題絕大多數(shù)立足于微生物培養(yǎng)、應(yīng)用、分離、計(jì)數(shù)等。答題過程中須明確所有操作都要圍繞著“目的”進(jìn)行： （1）如果實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖欠蛛x某種特定的目標(biāo)微生物；關(guān)鍵點(diǎn)在于如何依據(jù)該微生物某方面特點(diǎn)制備特定選擇培養(yǎng)基； （2）如果是測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量，則必須明確可能會(huì)引發(fā)數(shù)量變化誤差的操作（稀釋時(shí)的倍數(shù)、接種過程的無菌操作）備考時(shí)務(wù)必強(qiáng)化“選擇”與“鑒定”的界定及實(shí)驗(yàn)方案制定，同時(shí)必須熟練把握計(jì)數(shù)方法及公式套用等。 【例證】 （2014·全國(guó)卷Ⅰ）植物秸稈中的纖維素可被某些微生物分解?；卮鹣铝袉栴}。

2、 （1）分解秸稈中纖維素的微生物能分泌纖維素酶，該酶是由3種組分組成的復(fù)合酶，其中的葡萄糖苷酶可將　　　　分解成　　　　。 （2）在含纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅（CR）時(shí)，CR可與纖維素形成　　　　色復(fù)合物。用含有CR的該種培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌時(shí)，培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以該菌的菌落為中心的　　　　。 （3）為從富含纖維素的土壤中分離獲得纖維素分解菌的單菌落，某同學(xué)設(shè)計(jì)了甲、乙兩種培養(yǎng)基（成分見下表）： 酵母膏 無機(jī)鹽 淀粉 纖維素粉 瓊脂 CR溶液 水 培養(yǎng)基甲 ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ 培養(yǎng)基乙 ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ 注：“＋”表示有

3、，“－”表示無。 據(jù)表判斷，培養(yǎng)基甲　　　　（填“能”或“不能”）用于分離和鑒別纖維素分解菌，原因是　　　　　　　　　　；培養(yǎng)基乙　　　?。ㄌ睢澳堋被颉安荒堋保┯糜诜蛛x和鑒別纖維素分解菌，原因是_____________________________。 解析?。?）纖維素是一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素能被土壤中某些微生物分解利用，如下圖： （2）剛果紅可與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物無法形成，出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，我們可以通過觀察是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。 （3）分離和鑒別纖維素分解菌的

4、培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基，且需以纖維素為唯一碳源。 答案　（1）纖維二糖　葡萄糖?。?）紅　透明圈 （3）不能　液體培養(yǎng)基不能用于分離單菌落　不能　培養(yǎng)基中沒有纖維素，不會(huì)形成CR—纖維素紅色復(fù)合物，即使出現(xiàn)單菌落也不能確定其為纖維素分解菌 1.分離微生物的原理與措施 （1）原理：自然環(huán)境中的微生物是混雜在一起的，因此分離獲得純培養(yǎng)物應(yīng)首先采用的方法是將單個(gè)的細(xì)胞與其他細(xì)胞分離，再給細(xì)胞提供合適的營(yíng)養(yǎng)和條件，使其生長(zhǎng)成為可見的群體。 （2）常用措施 ①接種過程中盡量使細(xì)胞分散開來，如平板劃線法、稀釋涂布平板法。 ②運(yùn)用選擇培養(yǎng)基的作用特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中添加某種特定的物質(zhì)，抑制不需要的

5、微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所需微生物的生長(zhǎng)。 2.選擇培養(yǎng)基四種常見制備方法或?qū)嵗? 下面是篩選抗鏈霉素大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)步驟及相關(guān)圖解。 實(shí)驗(yàn)步驟： ①把大量對(duì)鏈霉素敏感的大腸桿菌接種在不含鏈霉素的培養(yǎng)基1的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。 ②待其長(zhǎng)出密集的小菌落后，用影印法接種到不含鏈霉素的培養(yǎng)基2上，隨即再影印到含有鏈霉素的培養(yǎng)基3上，進(jìn)行培養(yǎng)。 ③在培養(yǎng)基3上出現(xiàn)了個(gè)別抗鏈霉素的菌落，將其挑選出。 請(qǐng)回答： （1）配制培養(yǎng)基時(shí)除了滿足基本的營(yíng)養(yǎng)條件外，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、　　　　、　　　　的要求。 （2）從功能上看，含有鏈霉素的培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基。若在培養(yǎng)基中加入伊

6、紅和美藍(lán)，則培養(yǎng)皿中長(zhǎng)出的菌落顏色為　　　　。由圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為_________________________________________。 （3）對(duì)2和3進(jìn)行比較，在2上找到與3上相應(yīng)的菌落，挑取其中一個(gè)菌落接種到　　　　（填“含鏈霉素”或“不含鏈霉素”）的培養(yǎng)基上，如果有較多的菌落出現(xiàn)，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之　　　?。ㄌ睢扒啊被颉昂蟆保?。 （4）3中的菌落比1、2中的菌落少很多，這說明了基因突變具有　　　　的特點(diǎn)。 解析?。?）配制培養(yǎng)基時(shí)在提供幾種基本營(yíng)養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，還需滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。（2）鏈霉素是抗生

7、素，對(duì)大腸桿菌具有選擇作用。在伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基上.大腸桿菌菌落顏色為黑色。由題圖可知，1號(hào)培養(yǎng)基接種的方法為稀釋涂布平板法。（3）培養(yǎng)基2和培養(yǎng)基3上相同的菌落，是具有相同性狀的大腸桿菌形成的，將培養(yǎng)基2中一個(gè)相應(yīng)菌落接種到含鏈霉素的培養(yǎng)基上，若出現(xiàn)較多的菌落，則說明該抗性基因突變發(fā)生在該菌接觸鏈霉素之前。（4）抗鏈霉素性狀是大腸桿菌基因突變后獲得的性狀.3號(hào)培養(yǎng)皿中的菌落比1號(hào)、2號(hào)中的菌落少很多，這說明了基因突變頻率很低。 答案?。?）pH　氧氣 （2）選擇　黑色　稀釋涂布平板法 （3）含鏈霉素　前 （4）頻率低/低頻性 影印法接種的具體過程是：將待測(cè)的濃縮菌懸液涂在合適的平

8、板上，等其長(zhǎng)好后作為母平板（每個(gè)平板上的菌落控制在30～300個(gè)）；用一小塊滅菌的絲絨固定在直徑較平板略小的圓柱形木塊上，構(gòu)成印章（即接種工具）；然后把長(zhǎng)有菌落的母平板倒置在絲絨的印章上，輕輕印一下；再把此印章在另一含有選擇培養(yǎng)基的平板上輕輕印一下，經(jīng)培養(yǎng)后，選擇培養(yǎng)基平板上長(zhǎng)出的菌落與母平板上的菌落位置對(duì)應(yīng)，比較影印平板與母平板上菌落生長(zhǎng)情況，即可從相應(yīng)位置的母平板上選出待測(cè)的突變型菌落。影印法最初是為證明微生物的抗藥性突變是自發(fā)的、與相應(yīng)的環(huán)境因素?zé)o關(guān)而設(shè)計(jì)的接種方法，目前已廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)缺陷型微生物的篩選以及抗藥性菌株篩選等研究工作中。　　　 【例證】 （2014·全國(guó)卷Ⅱ，3

9、9）為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某研究小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： （1）該小組采用稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時(shí)間，這樣做的目的是 ___________________________________________________________________； 然后，將1 mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1 mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培養(yǎng)后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為　　　　　　　　。 （2）該小組采用平板劃線法分離

10、水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過　　　　滅菌。在第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是________________________________________________。 （3）示意圖A和B中，　　　　表示的是用稀釋涂布平板法接種培養(yǎng)后得到的結(jié)果。 （4）該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培養(yǎng)，另一部分進(jìn)行振蕩培養(yǎng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中　　　　的含量，同時(shí)可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高　　　　的利用率。 解析?。?）在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空

11、白平板先行培養(yǎng)一段時(shí)間，檢測(cè)培養(yǎng)基平板滅菌是否合格；每升水樣中的活菌數(shù)為：（39＋38＋37）/3＝38，再除以0.1乘以100，得到1毫升中的菌數(shù)，再乘以1000就是1升中的菌數(shù)，故為3.8×107。 （2）用平板劃線法應(yīng)先將接種環(huán)灼燒滅菌再劃線。第二次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端開始劃線，達(dá)到稀釋的目的，使得最后能夠得到單個(gè)菌落。 （3）根據(jù)圖示可知，B為稀釋涂布平板法接種后培養(yǎng)得到的菌落。 （4）振蕩的作用相當(dāng)于攪拌，可以提高培養(yǎng)液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高了營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用率，因此振蕩培養(yǎng)的細(xì)菌比靜置培養(yǎng)的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。 答案?。?）檢測(cè)培養(yǎng)基

12、平板滅菌是否合格　3.8×107 （2）灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落 （3）B?。?）溶解氧　營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 微生物計(jì)數(shù)的方法專項(xiàng)歸納 1.間接計(jì)數(shù)法（也叫活菌計(jì)數(shù)法） 常用的是稀釋涂布平板法。 （1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少個(gè)活菌。 （2）操作：①設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。將待測(cè)樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，選擇三個(gè)稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布于整個(gè)平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)，計(jì)算菌落數(shù)。為

13、使結(jié)果接近真實(shí)值，可將同一稀釋度的樣液加到三個(gè)或三個(gè)以上的平板上，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)。 ②為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為30～300個(gè)的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠(yuǎn)，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。 ③計(jì)算公式：每克樣品中的細(xì)菌數(shù)＝（C/V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mL），M代表稀釋倍數(shù)。 [提醒] 此種方法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。 2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法 （1）原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血球計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容

14、積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細(xì)菌的死活。計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個(gè)特定面積（1 mm2）和高（0.1 mm）的計(jì)數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(gè)（或16個(gè)）中格，每個(gè)中格進(jìn)一步劃分成16個(gè)（或25個(gè)）小格，但計(jì)數(shù)室都是由400個(gè)小格組成的。 （2）操作：將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再將稀釋的樣品滴在計(jì)數(shù)板上，稍等片刻，待細(xì)菌全部沉降到計(jì)數(shù)室底部再在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)4～5個(gè)中格中的細(xì)菌數(shù)，并求出每個(gè)小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。 （3）計(jì)算公式：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)＝每小格平均細(xì)菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。 3.濾膜法

15、 以測(cè)定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目為例，將已知體積的水過濾后，將濾膜放于伊紅—美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，在該培養(yǎng)基上，大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。 （2017·吉林松原模擬）研究人員用有機(jī)化合物X、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基成功地從土壤中篩選出能高效降解有機(jī)化合物X的細(xì)菌（目的菌）。下圖是從土壤中篩選出該細(xì)菌的過程示意圖，下表是分離純化的結(jié)果。請(qǐng)回答下列問題： 記錄項(xiàng)目：透明圈直徑/菌落直徑 菌落編號(hào) 1 2 3 48小時(shí) 1.6 2.8 3.0 72小時(shí) 2.2 1.2 5.0 96小時(shí) 2.3

16、1.2 4.2 （1）培養(yǎng)基中的有機(jī)化合物X主要為目的菌提供　　　　等營(yíng)養(yǎng)要素。從土壤中富集能有效降解有機(jī)化合物X的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選用　　　?。ㄌ睢肮腆w”或“液體”）培養(yǎng)基。 （2）配制成10倍稀釋液時(shí)，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有 　　　　mL無菌水的試管中，并依次配制102～1010的梯度稀釋液。 （3）在分離、純化過程中，圖中②③過程接種的方法分別為　　　　、　　　　。在倒平板前，應(yīng)對(duì)玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌，滅菌方法是　　　　。 （4）分析菌種的分離純化結(jié)果，應(yīng)選擇　　　　號(hào)菌落進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn)，原因是 ________________________________

17、___________________________________。 解析?。?）篩選微生物用選擇培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中的有機(jī)化合物X主要為目的菌提供碳源、氮源等營(yíng)養(yǎng)要素，不能降解有機(jī)化合物X的微生物不能生存。從土壤中富集能有效降解有機(jī)化合物X的細(xì)菌時(shí)，應(yīng)選用液體培養(yǎng)基，有利于富集培養(yǎng)。（2）配制成10倍稀釋液時(shí)，用無菌移液管從富集液中吸取1 mL，移入盛有9 mL無菌水的試管中，并依次配制102～1010的梯度稀釋液。（3）在分離、純化過程中，微生物接種方法常用稀釋涂布平板法、平板劃線法。在倒平板前，對(duì)玻璃器皿和培養(yǎng)基滅菌的方法是高壓蒸汽滅菌法。（4）由于目的菌能有效降解有機(jī)化合物X產(chǎn)生透明

18、圈，透明圈直徑/菌落直徑越大，說明降解有機(jī)化合物X的能力越強(qiáng)，因此應(yīng)選擇3號(hào)菌落進(jìn)行擴(kuò)大生產(chǎn)。 答案?。?）碳源（或碳源、氮源）　液體?。?）9　（3）稀釋涂布平板法　平板劃線法　高壓蒸汽滅菌法?。?）3　透明圈直徑/菌落直徑越大，降解有機(jī)化合物X的能力越強(qiáng) 隨堂·真題&預(yù)測(cè) 1.（2014·四川理綜，節(jié)選）有機(jī)農(nóng)藥苯磺隆是一種除草劑，長(zhǎng)期使用會(huì)污染環(huán)境。研究發(fā)現(xiàn)，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解。分離降解苯磺隆的菌株和探索其降解機(jī)制的實(shí)驗(yàn)過程如圖甲、乙所示。 （1）微生物生長(zhǎng)繁殖所需的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)有碳源、水、　　　　四類，該實(shí)驗(yàn)所用的選擇培養(yǎng)基只能以苯磺隆作為唯一碳源，其原因是__

19、______________________________。 （2）與微生物培養(yǎng)基相比，植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基常需添加生長(zhǎng)素和　　　　，這些植物激素一般需要事先單獨(dú)配制成　　　　保存?zhèn)溆谩? （3）為探究苯磺隆的降解機(jī)制，將該菌種的培養(yǎng)液過濾離心，取上清液做圖乙所示實(shí)驗(yàn)。該實(shí)驗(yàn)的假設(shè)是　　　　　　　　　　　　，該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是否合理？為什么？　　　　　　　　　　　　　　　　　　。 解析　（1）微生物生長(zhǎng)所需要的主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括：碳源、氮源、水和無機(jī)鹽。使用選擇培養(yǎng)基是因?yàn)樗窃试S特定的微生物生長(zhǎng)和增殖，同時(shí)又能抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)和增殖的培養(yǎng)基，該實(shí)驗(yàn)所用培養(yǎng)基只有能利用苯磺隆的微生物才

20、能正常生長(zhǎng)和增殖。 （2）植物組織培養(yǎng)常需要添加的植物激素有生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，調(diào)整二者的比例可以誘導(dǎo)脫分化和再分化。MS培養(yǎng)基的成分一般先分別配制成母液備用。 （3）題中實(shí)驗(yàn)為將該菌種的培養(yǎng)液過濾后離心，取上清液加入蛋白酶處理后，測(cè)得其對(duì)苯磺隆的降解率，意為假設(shè)目的菌種能產(chǎn)生降解苯磺隆的蛋白質(zhì)，若用蛋白酶處理后，可使該蛋白質(zhì)分解，苯磺隆降解率下降，則假設(shè)成立。但由于缺乏空白對(duì)照，不能比較蛋白酶處理是否降低苯磺隆降解率，該實(shí)驗(yàn)不能得出相應(yīng)結(jié)論。 答案?。?）氮源和無機(jī)鹽　只有能利用苯磺隆的微生物能正常生長(zhǎng)和繁殖 （2）細(xì)胞分裂素　母液 （3）目的菌株能分泌降解苯磺隆的蛋白質(zhì)　不合理，

21、缺少空白對(duì)照 2.（2019·高考預(yù)測(cè)）纖維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素?；卮鹣铝袉栴}： （1）在篩選纖維素分解菌的過程中，通常用　　　　染色法，這種方法能夠通過顏色反應(yīng)直接對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行篩選。甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于　　　　。 A.③ B.①② C.②③ D.①②③ （2）乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，與分離醋酸菌相比，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營(yíng)養(yǎng)不同，最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是_______________________________。該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目___________________

22、_______________________。 （3）丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過程中，為了抵制外界酸和堿對(duì)酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加　　　　。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對(duì)照？ ________________________________。 解析?。?）剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。（2）牛胃是一個(gè)厭氧環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌相比培養(yǎng)條件有所不同。因是活菌計(jì)數(shù)法，所以當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上只觀察到一個(gè)菌落，所以菌落數(shù)目比實(shí)際的少。（3）探究最適溫

23、度可設(shè)置一系列的溫度梯度進(jìn)行相互對(duì)照，其他無關(guān)變量要保持相同且適宜。 答案　（1）剛果紅　A?。?）保證無氧環(huán)境　少（低） （3）緩沖溶液　設(shè)置一系列的溫度梯度進(jìn)行相互對(duì)照 （時(shí)間：30分鐘　滿分：100分） 1.（2017·河南十所名校聯(lián)考，23）如圖表示研究者從土壤中篩選分解尿素的細(xì)菌并計(jì)數(shù)的相關(guān)實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)據(jù)圖回答下列問題： （1）進(jìn)行過程①和②的目的分別是　　　　和　　　　；圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是　　　　。 （2）進(jìn)行培養(yǎng)基配制和滅菌時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是____________________。 倒平板時(shí)，待平板冷卻凝固后，應(yīng)將平板倒過來放置，

24、并用記號(hào)筆在皿底上標(biāo)明培養(yǎng)微生物名稱、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、制作者姓名、培養(yǎng)日期及　　　　等信息。純化菌種時(shí)為了得到單一菌落，常采用的接種方法是　　　　和　　　　。 （3）在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入　　　　。培養(yǎng)后，若出現(xiàn)　　　　色就可以鑒定其中含有能夠分解尿素的細(xì)菌。 （4）研究者可以通過觀察培養(yǎng)形成的菌落的　　　　、隆起程度等特征，來判斷培養(yǎng)基上是否感染了其他細(xì)菌。在實(shí)驗(yàn)中，研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止 ____________________________________________。 解析?。?）根據(jù)圖示過程

25、可知，①和②的目的分別是選擇培養(yǎng)、增加分解尿素細(xì)菌的數(shù)量。圖中弧線箭頭上“？”的具體操作是挑出分解尿素細(xì)菌的菌落。 （2）配制培養(yǎng)基和滅菌時(shí)，應(yīng)該是先調(diào)pH，再進(jìn)行滅菌。培養(yǎng)基的種類、培養(yǎng)日期、平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度、培養(yǎng)微生物名稱及制作者姓名等信息要用記號(hào)筆在皿底上標(biāo)明。純化菌種時(shí)為了得到單一菌落，常采用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。（3）分解尿素的細(xì)菌鑒定時(shí)應(yīng)該加入酚紅指示劑，培養(yǎng)過程中pH升高，酚紅指示劑會(huì)變?yōu)榧t色，原因是細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，使培養(yǎng)基的堿性增強(qiáng)，出現(xiàn)紅色說明含有能夠分解尿素的細(xì)菌。（4）可以根據(jù)菌落特征來判斷不同的細(xì)菌，菌落特征一般體現(xiàn)在形狀、大小、

26、顏色和隆起程度。實(shí)驗(yàn)中，研究者每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，并選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目。 答案?。?）選擇培養(yǎng)　增加分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量　挑出菌落 （2）先調(diào)節(jié)pH后滅菌　培養(yǎng)基種類　平板劃線法　稀釋涂布平板法（后兩空位置可顛倒）（3）酚紅指示劑　紅 （4）形狀、大小、顏色　因培養(yǎng)時(shí)間不足導(dǎo)致遺漏細(xì)菌數(shù)目 2.（2017·河南十所名校聯(lián)考，37）微生物的培養(yǎng)在生物科學(xué)史和現(xiàn)代生物工程中都是極其重要的基礎(chǔ)技術(shù)。下圖1是某學(xué)生重復(fù)艾弗里證明DNA是遺傳物質(zhì)實(shí)驗(yàn)的其中一組實(shí)驗(yàn)；下圖2是基因工程中運(yùn)用影印法將培養(yǎng)基A上的菌落按原來方向印在培養(yǎng)基

27、B上，以檢測(cè)重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌的示意圖。請(qǐng)據(jù)圖回答下列相關(guān)問題： （1）圖1、圖2的培養(yǎng)結(jié)果顯示，兩實(shí)驗(yàn)中使用的都是　　　?。ㄌ钗锢頎顟B(tài)）培養(yǎng)基。 （2）在配制圖2中的培養(yǎng)基時(shí)，除考慮營(yíng)養(yǎng)、pH、滲透壓等條件外，還要考慮在培養(yǎng)基A和B中加入　　　?。ㄌ睢跋嗤被颉安煌保┓N類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，下列選項(xiàng)不需要的是　　　?。ㄌ钚蛱?hào)）。 ①酒精燈　 ②接種環(huán)　 ③高壓蒸汽滅菌鍋　 ④培養(yǎng)皿 （3）培養(yǎng)基滅菌是避免雜菌污染的有效手段之一，適用于圖1、圖2所示培養(yǎng)基的滅菌方法是________________________________________

28、_________； 接種前還需檢測(cè)滅菌效果，方法是將　　　　置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。 （4）實(shí)驗(yàn)證明，上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中R型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要設(shè)法提高圖1中S型菌的　　　??；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N。兩實(shí)驗(yàn)都不能用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種，而應(yīng)采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，理由是___________________________。接種培養(yǎng)4天后，可通過觀察　　　　的形態(tài)特征來識(shí)別R型菌和大腸桿菌。 解析　本題考查微生物的培養(yǎng)與分離的知識(shí)，旨在考查考生的理解能力和獲取信息的能

29、力。（1）從圖1、圖2可以看出，兩實(shí)驗(yàn)中使用的都是固體培養(yǎng)基。 （2）要檢測(cè)重組質(zhì)粒是否導(dǎo)入大腸桿菌，檢測(cè)的依據(jù)一般是重組質(zhì)粒的抗性發(fā)生了改變，因此在培養(yǎng)基A和培養(yǎng)基B中應(yīng)加入不同種類的抗生素。在配制含瓊脂的培養(yǎng)基和倒平板的過程中，不需要接種環(huán)。（3）對(duì)培養(yǎng)基滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法，接種前需要檢測(cè)滅菌效果，其方法是進(jìn)行空白對(duì)照，將未接種的培養(yǎng)基置于恒溫箱中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間，觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。（4）上述兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中R型菌和大腸桿菌的轉(zhuǎn)化率都很低，為獲得圖1、圖2所示的培養(yǎng)結(jié)果，一是要提高圖1中S型菌的DNA純度；二是要使用恰當(dāng)?shù)姆椒ń臃N，不選用平板劃線法和稀釋涂布平板法，

30、而采用不加稀釋的涂布平板法接種R型菌和大腸桿菌，是因?yàn)檫@兩種方法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落。識(shí)別不同類型的細(xì)菌，一般可通過觀察菌落的特征來加以區(qū)分。 答案　（1）固體?。?）不同?、凇。?）高壓蒸汽滅菌法　未接種的培養(yǎng)基　 （4）DNA純度　平板劃線法和稀釋涂布平板法都可能因稀釋后菌種數(shù)量極少而無法觀察到轉(zhuǎn)化成功的菌落　菌落 3.（2017·開封市三模，37）有些細(xì)菌可分解原油，從而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同學(xué)欲從受原油污染的土壤中篩選出高效降解原油的菌株?；卮饐栴}： （1）在篩選過程中，應(yīng)將土壤樣品稀釋液接種于以　　　　為唯一碳源的固體培養(yǎng)基上，從功

31、能上講，這種培養(yǎng)基屬于　　　　培養(yǎng)基。 （2）制備培養(yǎng)基時(shí)需采取　　　　方法滅菌，目的是______________________。 （3）純化菌種時(shí)，為了得到單菌落，常采用的接種方法有兩種，下面兩圖是兩種接種方法接種后培養(yǎng)的效果圖解。獲得圖A效果的接種方法是______________________________， 獲得圖B效果的接種方法是___________________________________?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)某一培養(yǎng)基上的菌落連成一片，最可能的原因是____________________________。 （4）在進(jìn)行分離該菌實(shí)驗(yàn)時(shí)，某同學(xué)從培養(yǎng)基上篩選出大約15

32、0個(gè)菌落，而其他同學(xué)只選擇出大約50個(gè)菌落。該同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生的原因可能有 　　　?。ㄌ钚蛱?hào)） ①由于土樣不同?、谟捎谂囵B(yǎng)基污染　③由于操作失誤?、軟]有設(shè)置對(duì)照 答案?。?）原油　選擇?。?）高壓蒸汽滅菌　殺死微生物及芽孢?。?）稀釋涂布平板法　平板劃線法　菌液濃度過高（或培養(yǎng)過程被雜菌污染，或用接種針劃下一區(qū)域前接種針沒有滅菌導(dǎo)致菌液沒有稀釋開等）?。?）①②③ 4.（2017·安陽市二模，37）“口嚼酒”因日本著名動(dòng)畫電影導(dǎo)演新海誠(chéng)的新作《你的名字》而引起人們的關(guān)注。世界上有些地方很早就有口嚼酒的記載。請(qǐng)回答下列相關(guān)問題： （1）口嚼酒的做法是：首先需要將米煮熟，然后放入口中咀

33、嚼一段時(shí)間，直至米粒變?yōu)楹隣睿賹⑵渫氯胩刂迫萜髦?，令其發(fā)酵，經(jīng)過幾天便成為甜酸味的酒。上述的制作過程中，“咀嚼”可能具有兩個(gè)作用，分別是 　　　　　　　　　　　　和　　　　　　　　　　　　。參與口嚼酒形成初期的微生物主要是來自空氣中的　　　　，末期形成酸味，可能是因?yàn)槊芊獠粐?yán)，產(chǎn)生了　　　　等物質(zhì)。 （2）口嚼酒是一種自釀酒，不僅品質(zhì)不高，而且衛(wèi)生條件難以把握，會(huì)有雜菌滋生的危險(xiǎn)。某生物興趣小組想探究口嚼酒制作過程中會(huì)滋生哪些微生物，進(jìn)行了進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)步驟如下： ①制作口嚼酒。 ②制作培養(yǎng)基：計(jì)算→稱量→溶化→　　　　→倒平板。 ③接種：每天同一

34、時(shí)間將口嚼酒液體搖勻后按照?qǐng)D1和圖2的方法進(jìn)行操作，該方法是　　　　。并在每天接種的培養(yǎng)皿上注明培養(yǎng)日期，最后將所有培養(yǎng)基放在相同且適宜的環(huán)境下培養(yǎng)。 ④經(jīng)過一段適宜的時(shí)間后，觀察不同培養(yǎng)基上的菌落數(shù)和菌落的形態(tài)，并進(jìn)行品種鑒定。圖3是三個(gè)不同時(shí)間獲得的培養(yǎng)基，其時(shí)間先后為　　　?。ㄌ钭帜福? 上述實(shí)驗(yàn)在時(shí)間上形成前后對(duì)照，但是還需要設(shè)置一個(gè)空白對(duì)照，目的是_______________________________________________________。 （3）興趣小組成員在實(shí)驗(yàn)后期看到培養(yǎng)基上長(zhǎng)滿了許多雜菌菌落，若他們采用圖4的方法對(duì)雜菌中的目的菌進(jìn)行純化，則在　　　　（填數(shù)字）區(qū)最可能獲得純凈的目的菌。 答案?。?）增大酶與米飯的接觸面積，有利于發(fā)酵　使唾液淀粉酶將米飯中的淀粉分解成麥芽糖　酵母菌　醋酸?。?）②滅菌（或高壓蒸汽滅菌）　③稀釋涂布平板法?、蹷、C、A　檢驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌是否合格?。?）5 13