甘肅省武威市高中生物 第2章 微生物的培養(yǎng)與應用 2.2 土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)課件 新人教版選修1 .ppt

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1、土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù),一、研究思路,1、PCR技術及提示,2、實驗室微生物的篩選原理（P21）,3、選擇培養(yǎng)基（閱讀配方）,（一） 篩 選 菌 株,人為提供有利于目的菌株的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。,在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。,能分解尿素的細菌的篩選 閱讀教材22頁第一大段相關內容，并思考回答下列問題：,1.在培養(yǎng)基的配方中，為微生物的生長提供碳源和氮源的分別是是什么物質？,碳源是葡萄糖，氮源是尿素。,2.分析該配方的培養(yǎng)基對微生物是否具有篩選作用？如果有，又是如何進行篩選

2、的？,有篩選作用。尿素是培養(yǎng)基中的唯一氮源，因此，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長。,答：不一定，有些微生物可以利用其他微生物的代謝產物生長繁殖，因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是所需要的微生物，還需要進一步的驗證。,？,3.只要能夠在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物是否就是所需要的微生物？,統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是： 當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關鍵。為了保證結果準確，通常將幾個稀釋度下的菌液都涂布在平板上，培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)。,（二） 統(tǒng)計菌落數(shù)目,思考題,1.想一

3、想，如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？,答：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算。,實例分析,第一同學只涂布了一個平板，沒有設置重復組，因此結果不具有說服力。 第二位同學考慮到設置重復組的問題，涂布了三個平板，但是其中1個平板的計數(shù)結果與2個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將3個平板的計數(shù)值用來求平均值。,實例啟示,1、在實驗設計時，一定要涂布至少3個平板作為重復組，才能增強實驗的說服力和準確性 2、在分析實驗結果時，一定要考慮所設置的重復組的結果是否一致，結果不一致，意味著操作有誤，

4、需要重新實驗。,微生物數(shù)量測定方法,1、稀釋涂布平板法間接技術方法 （注：菌落數(shù)往往比活菌數(shù) ）,2、顯微鏡計數(shù)直接計數(shù),（三）設置對照（資料分析）,1、設置對照的目的 2、對照實驗概念,資料分析,A同學的結果與其他同學不同，可能的解釋有兩種。 一是由于土樣不同； 二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。,究竟是哪個原因，可以通過實驗來證明。,另一種方案： 將A同學配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否受到污染。,實驗方案有兩種,一種方案： 可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行實 驗，如果結果與A同學一致，則證明A無誤；如果結果不同，則證明A同學存在操作失誤或培養(yǎng)基

5、的配制有問題。,四、實驗設計,實驗的具體操作步驟如下: 資料一.土壤取樣 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土3 cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。,實驗名稱：土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù),（實驗案例 ）,,在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)目應明顯多于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目，因此，牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基可以作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。,制備培養(yǎng)基： 準備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。,將10 g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中，充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉移至盛有9 mL的生理鹽水的無菌大試管中，依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由10710

6、3稀釋度的順序分別吸取0.1 mL進行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。,資料 二.樣品的稀釋,由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為103107。,為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？,答：這是因為土壤中各類微生物的數(shù)量是不同的，例如在干旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數(shù)約為2 185萬，放線菌數(shù)約為477萬，霉菌數(shù)約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養(yǎng)的條件。,思

7、考題,將涂布好的培養(yǎng)皿放在30 溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌落產生。 比較牛肉膏培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。 挑選選擇培養(yǎng)基中不同形態(tài)的菌落接入含酚紅培養(yǎng)基的斜面中，觀察能否產生如課本中圖2-10的顏色反應。如果有則說明該選擇培養(yǎng)基中確實含有能分解尿素的細菌。,資料三.微生物的培養(yǎng)與觀察,5.細菌的計數(shù),當菌落數(shù)目穩(wěn)定時，選取菌落數(shù)在30300的平板進行計數(shù)。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重復計數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。,五、操作提示,,無菌操作,做好標記,規(guī)劃時間,六、課題成果與評價,（一）培養(yǎng)物中是否

8、有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落,對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。,如果學生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結果應該接近。如果結果相差太遠，需要進一步分析產生差異的原因。,（二）樣品的稀釋操作是否成功,如果得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。,（三）重復組的結果是否一致,2提示：反芻動物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準

9、備選擇培養(yǎng)基外，還應參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設計。,課后練習P26,伊紅美藍培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基，可以用來檢測自來水中的大腸桿菌是否超標，因為的代謝產物與伊紅美藍結合，使菌落呈深紫色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落顯示出來，并沒有促進大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長。,例如：鑒別大腸桿菌培養(yǎng)基,大腸桿菌呈 黑色中心 ,有或無金屬光澤,大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)上典型特征,本課題知識小結:,1.尿素是尿素分解菌的氮源，因此在配制培養(yǎng)基時2 A、葡萄糖在培養(yǎng)基中越多越好 B、尿素分解菌有固氮能力，故培養(yǎng)基中只需無機氮 C、尿素在培養(yǎng)基中越少越好 D、尿素分解菌無固氮能力，故培養(yǎng)基中的尿素為化合態(tài)氮,,多思多得！,2.下列屬于菌落特征的是（ ）2 菌落的形狀 菌落的大小 菌落的多少 隆起程度 顏色 有無莢膜 A. B. C. D.,,