細(xì)胞的換液與傳代培養(yǎng).ppt

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1、細(xì)胞的換液與傳代培養(yǎng),細(xì)胞系cell line：原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代后即成。 有限細(xì)胞系finite cell line: 不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限。 連續(xù)細(xì)胞系continuous cell line：可連續(xù)傳代的細(xì)胞系，即已建成的細(xì)胞系。 細(xì)胞株cell strain：通過(guò)選擇法和克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)和標(biāo)志的培養(yǎng)物。,有關(guān)概念,一、傳代培養(yǎng)（passage）,無(wú)論是否稀釋，將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，也稱再培養(yǎng)（subculture）,二、單層培養(yǎng)細(xì)胞的一般傳代步驟:,倒出舊液,,PBS洗滌,,胰蛋白酶消化,傾出消化液,,,加入培養(yǎng)液,,吹散細(xì)

2、胞,,計(jì)數(shù),,稀釋,,培養(yǎng),1.pH值下降（紅變黃色）； 2.細(xì)胞濃度； 3.細(xì)胞類(lèi)型； 4.細(xì)胞形態(tài)學(xué)；細(xì)胞核四周充滿顆粒，細(xì)胞質(zhì)呈空泡化，細(xì)胞變圓，或出現(xiàn)細(xì)胞與底物脫離時(shí)。,動(dòng)物 細(xì)胞傳代培養(yǎng),三、原代培養(yǎng)物需要換液和傳代(subculture)的指標(biāo),四、細(xì)胞傳代方法,動(dòng)物 細(xì)胞傳代培養(yǎng),1懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代 直接傳代法：靜置數(shù)分鐘，懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除l2一23，然后加入等量的新鮮培養(yǎng)基用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。 離心法傳代：離心（1000轉(zhuǎn)/分）去上清，沉淀物加新培養(yǎng)液后再混勻傳代。原代細(xì)胞傳代按1：2接種，細(xì)胞系傳代按1：3-4接種。,動(dòng)物 細(xì)胞傳代培養(yǎng),2半懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞傳代（Hela細(xì)胞） 此類(lèi)細(xì)胞部分呈現(xiàn)貼壁生長(zhǎng)現(xiàn)象，但貼壁不牢，可用直接吹打法使細(xì)胞從瓶壁脫落下來(lái)，進(jìn)行傳代。 3貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代 采用酶消化法傳代。常用的消化液有0.1-0.25的胰蛋白酶液。,五、消化法傳代培養(yǎng)的步驟,動(dòng)物 細(xì)胞傳代培養(yǎng),,看細(xì)胞傳代小視頻,排序并挑出毛病,