《實(shí)驗(yàn)植物組織中過氧化氫酶的活力測定》由會員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《實(shí)驗(yàn)植物組織中過氧化氫酶的活力測定（10頁珍藏版）》請?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、實(shí)驗(yàn)七、植物組織中過氧化氫酶活力測定,高錳酸鉀滴定法,一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.掌握酶活力測定的方法 2.了解過氧化氫酶在生物體中的作用原理,二、實(shí)驗(yàn)原理,過氧化氫酶（CAT）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。 R(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3++OH) R(Fe3+OH)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O2,據(jù)此，可根據(jù)H2O2的消耗量或O2的生成量測定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過量）的H2O2溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的H2O2，即可求出消耗
2、的H2O2的量。 5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4 =5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4,三、材料、試劑與器具,1.材料：小麥葉片 2.試劑 （1）10% H2SO4； （2）0.2mol/L磷酸緩沖液pH7.8； （3）0.02mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液：稱取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液標(biāo)定； （4）0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大約等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標(biāo)準(zhǔn)0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性條件下）進(jìn)行標(biāo)定； （5）0.1
3、mol/L草酸：稱取優(yōu)級純H2C2O4 2H2O 12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1L。,3.器具 （1）恒溫水??； （2）研缽；三角瓶50ml4；酸式滴定管（10ml）；容量瓶25ml1等,四、實(shí)驗(yàn)步驟,1.酶液提取 取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將緩沖洗液轉(zhuǎn)入容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000rpm離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。,2.反應(yīng) 取50ml三角瓶4個（兩個測定兩個對照），測定瓶中加入酶液2.5ml，對照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同
4、時(shí)計(jì)時(shí)，于30恒溫水浴中保溫10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。 3.滴定 用0.02mol/L KMn4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定H2O2，至出現(xiàn)粉紅色（在30S內(nèi)不消失）為終點(diǎn)。,五、計(jì)算,酶活力用每克鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的毫克數(shù)表示 酶活(mgH2O2/gmin)= 式中： A對照KMnO4滴定毫升數(shù)； B酶反應(yīng)后KMnO4滴定毫升數(shù)； VT酶液總量（ml）； V1反應(yīng)所用酶液量（ml）； F W樣品鮮重（g）； 1.71ml 0.1mol/L的KMnO4相當(dāng)于1.7mg H2O2,六、研討題,1.影響過氧化氫酶活力測定的因素有哪些? 2.過氧化氫酶與哪些生化過程有關(guān)? 3.過氧化氫酶的活力測定還有另外一種方法，即紫外吸收法，原理是H2O2在240nm波長下有強(qiáng)烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活力。請你查閱資料設(shè)計(jì)一個應(yīng)用該方法測定過氧化氫酶活力的實(shí)驗(yàn)。,
實(shí)驗(yàn)植物組織中過氧化氫酶的活力測定
