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1、Ames試 驗(yàn) ， 即 污 染 物 致 突 變 性 檢 測(cè) ，也 稱 為 鼠 傷 寒 沙 門(mén) 氏 菌 回 復(fù) 突 變 試 驗(yàn) 污 染 物 對(duì) 人 體 的 潛 在 危 害 ， 引 起 人 們的 普 遍 關(guān) 注 。 世 界 上 已 發(fā) 展 了 百 余 種短 期 快 速 測(cè) 試 法 ， 檢 測(cè) 污 染 物 的 遺 傳毒 性 效 應(yīng) 。 B.N.Ames等 經(jīng) 十 余 年 努 力 ，于 1975年 建 立 并 不 斷 發(fā) 展 完 善 的 沙 門(mén)氏 菌 回 復(fù) 突 變 試 驗(yàn) （ 亦 稱 Ames試 驗(yàn) ）已 被 世 界 各 國(guó) 廣 為 采 用 。 原理：檢測(cè)受試物誘發(fā)鼠傷寒沙門(mén)氏菌組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變
2、株(his-)回復(fù)突變成野生型(his+)的能力。即組氨酸突變菌(his-) 在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上不能生長(zhǎng)；回復(fù)突變成野生型(his+)，可在不含組氨酸的最低營(yíng)養(yǎng)平皿上生長(zhǎng)。 是應(yīng)用最廣泛的檢測(cè)基因突變的體外試驗(yàn)。 Ames試 驗(yàn) u標(biāo) 準(zhǔn) 試 驗(yàn) 菌 株 (配 套 菌 株 )： 有 四 種 TA98、 TA97 ： 檢 測(cè) 移 碼 突 變 TA100： 檢 測(cè) 堿 基 置 換 突 變 TA102： 對(duì) 醛 、 過(guò) 氧 化 物 及 DNA交 聯(lián) 劑 較 敏 感 u這 四 個(gè) 試 驗(yàn) 菌 株 除 了 含 有 his-突 變 ， 還 有 一 些 附 加 突變 ， 以 提 高 敏 感 性 A
3、mes試 驗(yàn) 不 加 S9 混 合 液 得 到 陽(yáng) 性 結(jié) 果 ， 說(shuō) 明 受 試 物 是直 接 致 突 變 物 加 S9 混 合 液 才 得 到 陽(yáng) 性 結(jié) 果 ， 說(shuō) 明 該 受 試 物是 間 接 致 突 變 物 Ames試 驗(yàn) 常規(guī)方法： 斑點(diǎn)試驗(yàn) 平板摻入試驗(yàn) 斑點(diǎn)試驗(yàn)：1、吸取測(cè)試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml0.4mlS9混合液，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。2、用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時(shí)做溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，分別貼放于平板上相應(yīng)位置。3、平
4、皿倒置于37溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長(zhǎng)出密集菌落圈，為陽(yáng)性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性。 平板摻入試驗(yàn)：1、將一定量樣液和0.1ml測(cè)試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml0.4ml S9混合液，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。2、同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每種處理做3個(gè)平行。試樣通常設(shè)4個(gè)5個(gè)劑量。選擇劑量范圍開(kāi)始應(yīng)大些，有陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應(yīng)關(guān)系。培養(yǎng)同上。3、同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對(duì)照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值2，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，背景正常，則判為致突變陽(yáng)性。 鼠 傷 寒 沙 門(mén) 氏 菌野 生 型
5、（ his ） 鼠 傷 寒 沙 門(mén) 氏 菌 突 變 型 （ his ） 正 向 突 變回 復(fù) 突 變受 試 物試 驗(yàn) 菌 種(his-)S9 試 驗(yàn) 菌 種(his-)S9 Ames試 驗(yàn) 原 理 結(jié) 果 判 斷 : 只 要 在 一 種 試 驗(yàn) 菌 株 得 到 陽(yáng) 性 結(jié) 果 ， 即 認(rèn) 為受 試 物 是 致 突 變 物 僅 當(dāng) 四 種 試 驗(yàn) 菌 株 均 得 到 陰 性 結(jié) 果 ， 才 認(rèn) 為受 試 物 是 非 致 突 變 物 Ames試 驗(yàn) 應(yīng)用1斑點(diǎn)試驗(yàn)只局限于能在瓊脂上擴(kuò)散的化學(xué)物質(zhì)，大多數(shù)多環(huán)芳烴和難溶于水的化學(xué)物質(zhì)均不適宜用此法。此法敏感性較差，主要是一種定性試驗(yàn)，適用于快速篩選大量受試化合物。2平板摻入試驗(yàn)可定量測(cè)試樣品致突變性的強(qiáng)弱。此法較斑點(diǎn)試驗(yàn)敏感，獲陽(yáng)性結(jié)果所需的劑量較低。點(diǎn)試獲陽(yáng)性結(jié)果的濃度用于摻入試驗(yàn)（每皿0.1ml），往往出現(xiàn)抑（殺）菌作用。3致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣，培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至72h。 應(yīng)用4揮發(fā)性的液體和氣體試樣，可用干燥器內(nèi)試驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)試。5目前，Ames試驗(yàn)作為檢測(cè)環(huán)境誘變劑的一組試驗(yàn)中的首選試驗(yàn)，廣泛應(yīng)用于致突變化學(xué)物的初篩。但是，與今天快信息、高效率的社會(huì)要求相比，該試驗(yàn)程序還嫌繁瑣，方法不夠簡(jiǎn)便，有待于創(chuàng)建新的更為快速靈敏、簡(jiǎn)單易行的環(huán)境誘變劑短期生物測(cè)試法。
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