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1、
同位素標記法在高中生物實驗中的應用歸納
(2016全國卷Ⅰ)在有關DNA分子的研究中,常用32P來標記DNA分子。用α、β和γ表示ATP或dATP(d表示脫氧)上三個磷酸基團所處的位置(A—Pα~Pβ~Pγ或dA—Pα~Pβ~Pγ)?;卮鹣铝袉栴}:
(1)某種酶可以催化ATP的一個磷酸基團轉移到DNA末端上,同時產生ADP。若要用該酶把32P標記到DNA末端上,那么帶有32P的磷酸基團應在ATP的________(填“α”“β”或“γ”)位上。
(2)若用帶有32P的dATP作為DNA生物合成的原料,將32P標記到新合成的DNA分子上,則帶有32P的磷酸基團應在dAT
2、P的________(填“α”“β”或“γ”)位上。
(3)將一個某種噬菌體DNA分子的兩條鏈用32P進行標記,并使其感染大腸桿菌,在不含有32P的培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時間。若得到的所有噬菌體雙鏈DNA分子都裝配成噬菌體(n個)并釋放,則其中含有32P的噬菌體所占比例為2/n,原因是_________________________
_____________________________________________________。
[審題指導] (1)弄清ATP中帶有32P的磷酸基團的三個位置A—Pα~Pβ~Pγ。(2)弄清兩個實驗的目的,一個是讓某種酶催化ATP的一個磷酸基團轉移
3、到DNA末端上,另一個是用帶有32P的dATP作為DNA合成的原料。(3)根據DNA分子半保留復制的特點解釋含有32P的噬菌體所占比例為2/n的原因。
[解析] (1)根據題干信息可知,該酶能將ATP水解成ADP和磷酸基團(Pγ),同時將Pγ基團轉移到DNA末端上。因此需將32P標記到ATP的γ位上。(2)DNA生物合成的原料為脫氧核苷酸。將dATP兩個高能磷酸鍵都水解后的產物為dA—Pα(腺嘌呤脫氧核苷酸),該產物為合成DNA的原料。因此需將32P標記到dATP的α位上。(3)一個含有32P標記的噬菌體雙鏈DNA分子經半保留復制后,標記的兩條單鏈只能分配到兩個噬菌體的雙鏈DNA分子中,因此
4、在得到的n個噬菌體中只有2個帶有標記。
[答案] (1)γ (2)α (3)一個含有32P標記的噬菌體雙鏈DNA分子經半保留復制后,標記的兩條單鏈只能分配到兩個噬菌體的雙鏈DNA分子中,因此在得到的n個噬菌體中只有2個帶有標記
1.同位素標記法在高中生物學實驗中的應用
(1)探究光合作用中元素(原子)的轉移:①美國科學家魯賓和卡門用18O分別標記H2O和CO2,證明光合作用釋放的氧氣全部來自水。②卡爾文等用14C標記的CO2供小球藻進行光合作用,追蹤檢測其放射性,探明了CO2中的碳在光合作用中轉化成有機物中碳的途徑。
(2)證明DNA是遺傳物質:赫爾希和蔡斯分別用放射性同位素標記蛋
5、白質和DNA的特征元素,即用32P標記噬菌體的DNA,用35S標記噬菌體的蛋白質,證明DNA是噬菌體的遺傳物質。
(3)研究分泌蛋白的合成和運輸:用3H標記亮氨酸,研究分泌蛋白在細胞中的合成、運輸與分泌途徑,證明分泌蛋白在附著于內質網上的核糖體中合成之后,按照內質網→高爾基體→細胞膜的方向運輸,從而證明了細胞內的各種生物膜在功能上是緊密聯(lián)系的。
(4)證明DNA分子進行半保留復制:用含有15N標記的NH4Cl培養(yǎng)液培養(yǎng)大腸桿菌,讓大腸桿菌繁殖幾代,再將大腸桿菌轉移到含14N的普通培養(yǎng)液中培養(yǎng),然后在不同時刻收集大腸桿菌并提取DNA,再通過密度梯度離心來區(qū)別親代與子代DNA,從而證明DNA的
6、復制是以半保留的方式進行的。
(5)研究生長素的極性運輸:證明植物生長素的極性運輸時,用同位素14C標記莖形態(tài)學上端的生長素(吲哚乙酸),可在莖的形態(tài)學下端檢測到放射性同位素14C,而標記莖形態(tài)學下端的生長素,在莖的形態(tài)學上端檢測不到放射性同位素14C,說明植物生長素只能從形態(tài)學上端運輸到形態(tài)學下端。
2.與熒光標記法的區(qū)別
(1)常用的熒光蛋白有綠色和紅色兩種
①綠色熒光蛋白(GFP)常用的是來源于發(fā)光水母的一種功能獨特的蛋白質,藍光或近紫外光照射,發(fā)射綠色熒光。
②紅色熒光蛋白來源于珊瑚蟲,是一種與綠色熒光蛋白同源的熒光蛋白,在紫外光的照射下可發(fā)射紅色熒光。
(2)人教版教材中
7、用到的熒光標記法
①《必修1》P67“細胞融合實驗”:這一實驗很有力地證明了細胞膜的結構特點是具有一定的流動性。
②《必修2》P30“基因在染色體上的實驗證據”:通過現代分子生物學技術,運用熒光標記的手段,可以很直觀地觀察到某一基因在染色體上的位置。
1.(2016全國卷Ⅲ)在前人進行的下列研究中,采用的核心技術相同(或相似)的一組是( )
①證明光合作用所釋放的氧氣來自水
②用紫外線等處理青霉菌選育高產青霉素菌株
③用T2噬菌體侵染大腸桿菌證明DNA是遺傳物質
④用甲基綠和吡羅紅對細胞染色,觀察核酸的分布
A.①② B.①③
C.②④ D.③④
B
8、[①③采用的是同位素標記法,其中①是為兩組植物分別提供HO和CO2、H2O和C18O2檢測產生氧氣的標記情況,③是分別用32P和35S標記的噬菌體侵染大腸桿菌,檢測子代噬菌體的標記情況;②采用的是誘變技術,④采用的是混合染色技術。故采用的核心技術相同(或相似)的是①和③,B項符合題意。]
2.(2019濰坊期中)物理學和化學方法可用于生物學的研究。下列有關敘述錯誤的是( )
A.沃森和克里克利用X射線衍射法研究并推算出了DNA的雙螺旋結構
B.科學家通過熒光標記的人、鼠細胞融合實驗證明了細胞膜具有流動性
C.赫爾希和蔡斯利用放射性同位素標記和離心技術證明DNA是遺傳物質
D.科學家
9、運用同位素示蹤和離心技術證實了DNA的半保留復制
A [在遺傳物質的研究歷史上,沃森和克里克以威爾金斯和其同事富蘭克林提供的DNA衍射圖譜的有關數據為基礎,推算出DNA分子呈螺旋結構。]
3.(2019成都市測試)同位素標記法是生物科學研究中常用的方法。下列敘述錯誤的是( )
A.用C標記的CO2供給小球藻進行光合作用可證明碳的轉化途徑
B.將3H標記的亮氨酸注射到胰腺腺泡細胞中可證明生物膜間有聯(lián)系
C.用14C或18O標記的噬菌體分別侵染細菌可證明DNA是遺傳物質
D.將被15N標記的細菌轉移到含14N的培養(yǎng)液中可證明DNA的復制方式
C [用32P或35S標記的噬菌體分別侵
10、染細菌可證明DNA是遺傳物質。]
4.(2019晉中調研)同位素標記法在遺傳學的研究中發(fā)揮了重要作用。請根據所學知識回答下列問題:
(1)現提供3H標記的胸腺嘧啶脫氧核苷酸、尿嘧啶核糖核苷酸以及亮氨酸,若要研究抗體的合成與轉運,應選擇____________;若要驗證抗體合成所需的直接模板,應選擇____________________。
(2)為探究T2噬菌體的遺傳物質,用放射性同位素標記的T2噬菌體侵染未被標記的大腸桿菌,經短時間保溫培養(yǎng)、攪拌離心,檢測到上清液中的放射性很低。此組實驗標記的元素是________,離心的目的是___________________________
11、___________________
_____________________________________________________。
(3)科學家將15N標記的DNA分子(15N15NDNA)放到含14N的培養(yǎng)液中培養(yǎng),讓其復制3次。將親代DNA和每次復制產物置于試管進行離心,結果如圖。其中代表復制2次后的分層結果是________(填字母),理由是____________________________________________
_____________________________________________________。
[解析] (1)抗體的化
12、學本質是蛋白質,其基本組成單位是氨基酸,因此若要研究抗體的合成與轉運,應選擇3H標記的亮氨酸;抗體是蛋白質,其合成的直接模板是mRNA,若要驗證抗體合成所需的直接模板,應選擇3H標記的尿嘧啶核糖核苷酸。(2)噬菌體侵染細菌的實驗分兩組,一組噬菌體用35S對其蛋白質外殼進行標記,另一組用32P對噬菌體的核酸進行標記。噬菌體在侵染細菌時,只是把遺傳物質DNA注入細菌,因此如果標記的是蛋白質,則上清液放射性高,沉淀物放射性很低;如果標記的是DNA,則上清液放射性很低,沉淀物放射性高。綜上所述,此組實驗中標記的是DNA,即DNA中的P元素。此實驗過程中,離心的目的是讓上清液中析出重量較輕的T2噬菌體顆
13、粒,沉淀物中留下被感染的大腸桿菌。(3)由于DNA分子的復制是半保留復制,一個用15N標記的DNA在含14N的培養(yǎng)基上培養(yǎng),復制1次后,每個DNA分子的一條鏈含15N,一條鏈含14N,離心后對應圖中的b,復制2次后,產生4個DNA分子,其中含15N和14N的DNA分子為2個,只含14N的DNA分子為2個,離心后對應圖中的c。
[答案] (1)3H標記的亮氨酸 3H標記的尿嘧啶核糖核苷酸 (2)P 讓上清液中析出重量較輕的T2噬菌體顆粒,沉淀物中留下被感染的大腸桿菌 (3)c DNA復制方式為半保留復制,15N15NDNA分子復制兩次后,子代中1/2為15N14NDNA,1/2為14N14ND
14、NA,離心結果與c相符
DNA半保留復制與細胞分裂綜合中的同位素標記法
(2019深圳模擬)不含放射性標記的蠶豆根尖細胞在含3H標記的胸腺嘧啶脫氧核苷酸的培養(yǎng)基中完成一個細胞周期,然后在不含放射性標記的培養(yǎng)基中繼續(xù)分裂至中期,其染色體的放射性標記分布情況是 ( )
A.每條染色體中都只有一條單體被標記
B.每條染色體的兩條單體都被標記
C.只有半數的染色體中一條單體被標記
D.每條染色體的兩條單體都不被標記
[審題指導] (1)確定親代DNA分子標記情況。根據題干信息和DNA半保留復制的特點,可確定親代DNA分子(未被標記)→放入含3H標記的胸腺嘧啶脫氧核苷酸的培養(yǎng)
15、基中完成一個細胞周期,所得子代DNA分子均有一條鏈被標記。
(2)確定原料的標記情況:放入不含放射性標記的培養(yǎng)基培養(yǎng)至中期,所得子代DNA分子一半未被標記,一半只有一條鏈被標記。
A [不含放射性標記的根尖細胞在含3H標記的胸腺嘧啶脫氧核苷酸培養(yǎng)基上完成一個細胞周期后,子細胞中的核DNA分子都是一條鏈被3H標記,另一條鏈未被標記;然后子細胞在不含放射性標記的培養(yǎng)基中繼續(xù)分裂至中期,每個核DNA分子復制形成的兩個DNA分子(其中一個被標記,另一個未被標記)分別位于一條染色體的兩條姐妹染色單體上,A正確。]
1.有絲分裂與DNA復制的關系
如果用15N標記細胞中的核DNA分子,然后將細
16、胞放在正常環(huán)境(含14N)中培養(yǎng),讓其進行兩次有絲分裂,結果染色體中的DNA標記情況如圖所示:
這樣來看,最后形成的4個子細胞有3種情況:第1種情況是4個細胞都是;第2種情況是2個細胞是,1個細胞是,1個細胞是;第3種情況是2個細胞是,2個細胞是。
2.減數分裂與DNA復制的關系
如果用15N標記細胞中的核DNA分子,然后將細胞放在正常環(huán)境(含14N)中培養(yǎng),讓其進行減數分裂,結果染色體中的DNA標記情況如圖所示:
由圖可以看出,減數分裂過程中細胞雖然連續(xù)分裂2次,但DNA只復制1次,所以4個子細胞均為,細胞中所有DNA分子均呈雜合狀態(tài)。
3.解題步驟
第一步
畫出含
17、一條染色體的細胞圖,下方畫出該條染色體上的1個DNA分子,用豎實線表示含同位素標記
第二步
畫出復制一次,分裂一次的子細胞染色體圖,下方畫出染色體上的DNA鏈,未被標記的新鏈用豎虛線表示
第三步
再畫出第二次復制(分裂)后的細胞的染色體組成和DNA鏈的情況
第四步
若繼續(xù)推測后期情況,可想象著絲點分裂,染色單體分開的局面,并進而推測子細胞染色體的情況
1.用32P標記玉米體細胞(含20條染色體)的DNA分子雙鏈,再將這些細胞轉入不含32P的培養(yǎng)基中培養(yǎng),讓其分裂1次……N次。若一個細胞中的染色體總條數和被32P標記的染色體條數分別是40條和2條,則這至少是第幾次分裂的分裂期(
18、 )
A.第1次 B.第2次
C.第3次 D.第4次
C [由染色體總條數為40條可知是分裂后期,若是第1次有絲分裂后期,被32P標記的染色體條數應為40條;若是第2次有絲分裂后期,被32P標記的染色體條數應為20條;若是第3次有絲分裂后期,被32P標記的染色體條數應為0~20條。]
2.(2019合肥模擬)小鼠有20對染色體,若用3H胸腺嘧啶脫氧核苷酸標記小鼠精原細胞的染色體DNA分子,再在不含有標記的培養(yǎng)液中連續(xù)分裂2代,下列判斷錯誤的是( )
A.第一次分裂中期,含有3H的DNA單鏈有80條
B.在形成的第1代子細胞中,所有染色體均含有3H
C.第二次分裂后期
19、,含有3H的染色體有40條
D.在形成的第2代子細胞中,所有染色體均含有3H
D [DNA復制是以親代DNA分子為模板合成子代DNA分子的過程。DNA復制過程是邊解旋邊復制;DNA復制特點是半保留復制。第一次分裂的中期,細胞內DNA單鏈有80條被3H標記,A正確;在形成的第1代子細胞中,所有染色體的一條鏈被3H標記,B正確;第二次分裂的后期,細胞內有40條染色體被3H標記,C正確;在形成的第2代子細胞中,有一半染色體的一條鏈被3H標記,有一半染色體沒有被3H標記,D錯誤。]
3.(2019大興期末測試)將果蠅精原細胞(2N=8)的DNA分子用15N標記后,置于含14N的培養(yǎng)基中培養(yǎng),經過
20、連續(xù)兩次分裂后,下列推斷正確的是( )
A.若進行有絲分裂,則第二次分裂中期的細胞中有8條染色單體含14N
B.若進行有絲分裂,則兩次分裂結束后含15N的子細胞所占比例為1/2
C.若進行減數分裂,則第二次分裂中期的細胞中有4條染色單體含14N
D.若進行減數分裂,則兩次分裂結束后所有子細胞的染色體均含有15N
D [如果進行有絲分裂,經過一次細胞分裂后,形成的2個子細胞中的DNA分子都是15N-14N,再復制一次形成的2個DNA分子分別是15N-14N、14N-14N,中期時DNA存在于2條染色單體上,則第二次分裂中期含14N的染色單體有16條,A錯誤;若進行兩次有絲分裂,第一次分裂得到的子細胞中所有的染色體上DNA都是15N-14N,第二次分裂中期時單體上的DNA分子分別是15N-14N、14N-14N,得到的子細胞中一半有標記或全部有標記,或有標記,B錯誤;若進行減數分裂,第一次分裂中期的染色體組成都是15N-14N,則第二次分裂中期的細胞中有4條染色體、8條姐妹染色單體,每條單體都含14N,C錯誤;如果進行減數分裂,形成的子細胞都有15N染色體,D正確。]