人教版生物選修1 課后題答案
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1、專題1 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 本專題圍繞傳統(tǒng)發(fā)酵食品的制作展開,主要操作技術(shù)歸納如下。 1. 果酒與果醋的制作技術(shù)。 2. 腐乳的制作技術(shù)。 3. 泡菜的腌制與亞硝酸鹽含量的測定。 課題1 果酒與果醋的制作 一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)果酒制作的原理 知識(shí)要點(diǎn):1. 酵母菌的兼性厭氧生活方式;2.發(fā)酵需要的適宜條件;3.傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來源。 (二)果醋制作的原理 知識(shí)要點(diǎn):1.酒變醋的原理;2.控制發(fā)酵條件的作用;3.制醋所利用的醋酸菌的來源。 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)果酒的制作是否成功 發(fā)酵后取樣,通過嗅味與品嘗進(jìn)行初步鑒定。此外,還可用顯微鏡觀察酵母菌,并用重
2、鉻酸鉀檢驗(yàn)酒精的存在。如果實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想,請(qǐng)學(xué)生分析失敗原因,然后重新制作。 (二)果醋的制作是否成功 首先通過觀察菌膜的形成、嗅味與品嘗進(jìn)行初步鑒定,再通過檢測與比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進(jìn)一步的鑒定。此外,還可以通過在顯微鏡下觀察發(fā)酵液中是否有醋酸菌,并統(tǒng)計(jì)其數(shù)量作進(jìn)一步鑒定。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么? 答:應(yīng)該先沖洗,然后再除去枝梗,以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機(jī)會(huì)。 2.你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染? 提示:需要從發(fā)酵制作的過程進(jìn)行全面的考慮。例如,榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈;每次排氣時(shí)只
3、需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。 3.制葡萄酒時(shí),為什么要將溫度控制在18~25 ℃?制葡萄醋時(shí),為什么要將溫度控制在30~35 ℃? 答:溫度是酵母菌生長與發(fā)酵的重要條件。20 ℃左右最適合酵母菌繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長溫度為30~35 ℃,因此要將溫度控制在30~35 ℃。 4.制葡萄醋時(shí),為什么要適時(shí)通過充氣口充氣? 答:醋酸菌是好氧菌,在將酒精變?yōu)榇姿釙r(shí)需要氧的參與,因此要適時(shí)向發(fā)酵液中充氣。 (二)[資料]發(fā)酵裝置的設(shè)計(jì)討論題 請(qǐng)分析此裝置中的充氣口、排氣口與出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身連接
4、?結(jié)合果酒、果醋的制作原理,你認(rèn)為應(yīng)該如何使用這個(gè)發(fā)酵裝置? 答:充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時(shí)用來排出CO2的;出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個(gè)長而彎曲的膠管與瓶身連接,其目的是防止空氣中微生物的污染,其作用類似巴斯德的鵝頸瓶。使用該裝置制酒時(shí),應(yīng)該關(guān)閉充氣口;制醋時(shí),應(yīng)將充氣口連接氣泵,輸入氧氣。 (三)練習(xí) 2.提示:大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)需要進(jìn)行更為全面周詳?shù)目紤],如原料的來源與選擇、菌種的培育與選擇、發(fā)酵的設(shè)備、發(fā)酵條件的自動(dòng)化控制,以與如何嚴(yán)格控制雜菌污染;等等。此外,無論是葡萄酒或葡萄醋,實(shí)驗(yàn)時(shí)所檢測的發(fā)酵液,并非商品意義上的產(chǎn)品。在實(shí)際生產(chǎn)中還
5、需沉淀過濾、滅菌裝瓶等獲得成品酒或醋。葡萄酒還需在一定設(shè)施與條件下(如橡木桶與地窖)進(jìn)行后續(xù)發(fā)酵,以獲得特定的風(fēng)味與色澤。 3.提示:需考慮廠房、設(shè)備投資、原材料采購、工人人數(shù)與工資、產(chǎn)品種類、生產(chǎn)周期、銷售渠道、利潤等問題。 課題2 腐乳的制作 一、基礎(chǔ)知識(shí) 知識(shí)要點(diǎn):相關(guān)的微生物,如毛霉等在腐乳制作中的作用。 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)是否完成腐乳的制作 學(xué)生是否完成腐乳的制作依據(jù)是:能夠合理地選擇實(shí)驗(yàn)材料與用具;前期發(fā)酵后豆腐的表面長有菌絲,后期發(fā)酵制作基本沒有雜菌的污染。 (二)腐乳質(zhì)量的評(píng)價(jià) 制作成功的腐乳應(yīng)該具有以下特點(diǎn):色澤基本一致、味道鮮美、咸淡適口、無異味、塊
6、形整齊、厚薄均勻、質(zhì)地細(xì)膩、無雜質(zhì)。 (三) 能否總結(jié)不同條件對(duì)腐乳風(fēng)味與質(zhì)量的影響。 學(xué)生能從鹽、酒的用量、發(fā)酵的溫度、發(fā)酵時(shí)間的長短,以與香辛料等因素中的某一因素來說明其對(duì)腐乳風(fēng)味或質(zhì)量的影響。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.你能利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí),解釋豆腐長白毛是怎么一回事? 答:豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲,在豆腐中還有匍匐菌絲。 2.王致與為什么要撒許多鹽,將長毛的豆腐腌起來? 答:鹽能防止雜菌污染,避免豆腐腐敗。 3.我們平常吃的豆腐,哪種適合用來做腐乳? 答:含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳,不易成
7、形。 4.吃腐乳時(shí),你會(huì)發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢?它對(duì)人體有害嗎?它的作用是什么? 答:“皮”是前期發(fā)酵時(shí)在豆腐表面上生長的菌絲(匍匐菌絲),它能形成腐乳的“體”,使腐乳成形?!捌ぁ睂?duì)人體無害。 (二)練習(xí) 1.答:越接近瓶口,雜菌污染的可能性越大,因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量,在接近瓶口的表面,鹽要鋪厚一些,以有效防止雜菌污染。 課題3 制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量 一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)乳酸菌發(fā)酵 知識(shí)要點(diǎn):1. 乳酸菌在自然界的分布;2. 乳酸菌發(fā)酵的原理。 (二)亞硝酸鹽 知識(shí)要點(diǎn):1.亞硝酸鹽的有關(guān)知識(shí);2.我國食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的亞
8、硝酸鹽含量標(biāo)準(zhǔn);3.亞硝酸鹽的危害。 三、課題成果評(píng)價(jià) (一)泡菜腌制的質(zhì)量如何 可以根據(jù)泡菜的色澤與風(fēng)味進(jìn)行初步的評(píng)定,還可以在顯微鏡下觀察乳酸菌形態(tài),比較不同時(shí)期泡菜壇中乳酸菌的含量。 (三)是否進(jìn)行了與時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 在實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中,應(yīng)與時(shí)對(duì)泡菜中亞硝酸鹽含量進(jìn)行鑒定,比較不同時(shí)期亞硝酸鹽含量的變化與其對(duì)泡菜質(zhì)量的影響。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶? 答:酸奶的制作依靠的是乳酸菌的發(fā)酵作用??股啬軌驓⑺阑蛞种迫樗峋纳L,因此含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶。 2.為什么日常生活中要多吃新鮮蔬菜,不吃存放時(shí)間過長、
9、變質(zhì)的蔬菜? 答:有些蔬菜,如小白菜與蘿卜等,含有豐富的硝酸鹽。當(dāng)這些蔬菜放置過久發(fā)生變質(zhì)(發(fā)黃、腐爛)或者煮熟后存放太久時(shí),蔬菜中的硝酸鹽會(huì)被微生物還原成亞硝酸鹽,危害人體健康。 3.為什么泡菜壇內(nèi)有時(shí)會(huì)長一層白膜?你認(rèn)為這層白膜是怎么形成的? 答:形成白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物,泡菜發(fā)酵液營養(yǎng)豐富,其表面氧氣含量也很豐富,適合酵母菌繁殖。 (二)練習(xí) 2.答:果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵,果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬拇x,腐乳的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類,泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。 傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)都巧妙地利用了天
10、然菌種,都為特定的菌種提供了良好的生存條件,最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組分,而是成分復(fù)雜的混合物。 專題2 微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用 本專題圍繞微生物技術(shù)展開,主要技術(shù)歸納如下。 1.培養(yǎng)基的制備。 2.高壓蒸汽滅菌與干熱滅菌。 3.倒平板操作。 4.平板劃線操作與稀釋涂布平板法。 5.應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物(課題2與課題3)。 課題1 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 一.知識(shí)要點(diǎn): (一)培養(yǎng)基 1.培養(yǎng)基的用途與種類,指出培養(yǎng)基可分為液體與固體兩大類;2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方;3.盡管培養(yǎng)基的配方各不相同,但是其基本成分都包括水、碳源、氮源與無機(jī)鹽。 (
11、二)無菌技術(shù) 知識(shí)要點(diǎn):1.無菌技術(shù)的概念;2.消毒與滅菌的概念與兩者的區(qū)別;3.常用的消毒與滅菌的方法,接種環(huán)灼燒滅菌的方法 二.課題成果評(píng)價(jià) (一)培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1~2 d后無菌落生長,說明培養(yǎng)基的制備是成功的,否則需要重新制備。 (二)接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致,并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn),則說明接種操作是符合要求的;如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落,則說明接種過程中,無菌操作還未達(dá)到要求,需要分析原因,再次練習(xí)。 (三)是否進(jìn)行了與時(shí)細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)12 h與24 h后的大腸桿菌菌落的
12、大小會(huì)有明顯不同,與時(shí)觀察記錄的同學(xué)會(huì)發(fā)現(xiàn)這一點(diǎn),并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外,還有什么目的? 答:無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。 2.請(qǐng)你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要,請(qǐng)選擇合適的方法。 (1) 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿 (2) 玻棒、試管、燒瓶與吸管 (3) 實(shí)驗(yàn)操作者的雙手 答:(1)、(2)需要滅菌;(3)需要消毒。 (二)倒平板操作的討論 1.培養(yǎng)基滅菌后,需要冷卻到50 ℃左右時(shí),才
13、能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的溫度? 提示:可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí),就可以進(jìn)行倒平板了。 2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰? 答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。 3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置? 答:平板冷凝后,皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠,凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。 4.在倒平板的過程中,如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個(gè)平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎?為什么? 答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上
14、滋生,因此最好不要用這個(gè)平板培養(yǎng)微生物。 (三)平板劃線操作的討論 1.為什么在操作的第一步以與每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時(shí),仍然需要灼燒接種環(huán)嗎?為什么? 答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時(shí),接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能與時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境與感染操作者。 2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線? 答:以免接種環(huán)
15、溫度太高,殺死菌種。 3.在作第二次以與其后的劃線操作時(shí),為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線? 答:劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個(gè)細(xì)菌繁殖而來的菌落。 (四)涂布平板操作的討論 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作? 提示:應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍;等等。 (五)練習(xí) 1.提示:可以從微生物生長需要哪些條件的角度來思
16、考。例如,微生物的生長需要水、空氣、適宜的溫度,食品保存可以通過保持干燥、真空的條件,以與冷藏等方法來阻止微生物的生長。 2.提示:可以從這三種培養(yǎng)技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進(jìn)行總結(jié)歸納。例如,這三種培養(yǎng)技術(shù)都需要為培養(yǎng)物提供充足的營養(yǎng),但無土栽培技術(shù)的操作并不需要保證無菌的條件,而其他兩種技術(shù)都要求嚴(yán)格的無菌條件。 課題2? 土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離 一.研究思路 (一)篩選菌株 微生物的選擇培養(yǎng),是指利用培養(yǎng)基的組成使適宜生長的特定微生物得到較快繁殖的技術(shù),也稱為微生物的“選擇培養(yǎng)”。在本課題提供的選擇培養(yǎng)基的配方中,尿素是培養(yǎng)基中的惟一氮源,因此,原則上只有能夠利用尿素的
17、微生物才能夠生長。但實(shí)際上,微生物的培養(yǎng)是一個(gè)非常復(fù)雜的問題,有些微生物可以利用其他微生物的代謝產(chǎn)物生長繁殖,因此能夠在選擇培養(yǎng)基上生長的微生物不一定是所需要的微生物,還需要進(jìn)一步的驗(yàn)證。 (二)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目 統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的理論依據(jù)是:當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí),培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。因此,恰當(dāng)?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確,通常將幾個(gè)稀釋度下的菌液都涂布在平板上,培養(yǎng)后再選擇菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (三)設(shè)置對(duì)照 A同學(xué)的結(jié)果與其他同學(xué)不同,可能的解釋有兩種。一是由于土樣不同,二是由于培養(yǎng)基污染或操作失誤。究竟是哪個(gè)原
18、因,可以通過實(shí)驗(yàn)來證明。實(shí)驗(yàn)方案有兩種。一種方案是可以由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn),如果結(jié)果與A同學(xué)一致,則證明A無誤;如果結(jié)果不同,則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題。另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng),作為空白對(duì)照,以證明培養(yǎng)基是否受到污染。通過這個(gè)事例可以看出,實(shí)驗(yàn)結(jié)果要有說服力,對(duì)照的設(shè)置是必不可少的。 二..課題成果評(píng)價(jià) (一)培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以與選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落 對(duì)照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長,說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目,說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。 (二)樣品
19、的稀釋操作是否成功 如果得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30~300的平板,則說明稀釋操作比較成功,并能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。 三..練習(xí) 2.提示:反芻動(dòng)物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌,接觸空氣后會(huì)死亡,因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準(zhǔn)備選擇培養(yǎng)基外,還應(yīng)參照厭氧菌的培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì). 課題3? 分解纖維素的微生物的分離 一.基礎(chǔ)知識(shí) (一) 纖維素與纖維素酶 知識(shí)要點(diǎn): 1.纖維素在生物圈的分布;2.纖維素酶的作用。 (二)纖維素分解菌的篩選 知識(shí)要點(diǎn): 1.剛果紅染色法;2.剛果紅染色法的原理。 二、課題成果
20、評(píng)價(jià) (一)培養(yǎng)基的制作是否合格以與選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落:對(duì)照的培養(yǎng)基在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長則說明培養(yǎng)基制作合格。如果觀察到產(chǎn)生透明圈的菌落,則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。 (二)分離的結(jié)果是否一致:由于在土壤中細(xì)菌的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于真菌與放線菌的數(shù)量,因此最容易分離得到的是細(xì)菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同,學(xué)生也可能得到真菌與放線菌等不同的分離結(jié)果。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.本實(shí)驗(yàn)的流程與課題2中的實(shí)驗(yàn)流程有哪些異同? 答:本實(shí)驗(yàn)流程與課題2的流程的區(qū)別如下。課題2是將土樣制成的菌懸液直接涂布在以尿素為惟一氮源的選擇性培養(yǎng)基上,直接分離得到菌落。本課題通過選擇
21、培養(yǎng),使纖維素分解菌得到增殖后,再將菌液涂布在選擇培養(yǎng)基上。其他步驟基本一致。 2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌? 答:由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對(duì)提高,因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。 3.將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深? 答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集,實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10 cm左右腐殖土壤中。 4.想一想,這兩種方法各有哪些優(yōu)點(diǎn)與不足?你打算選用哪一種方法?兩種剛果紅染色法的比較 方法一是傳統(tǒng)的方法,缺點(diǎn)是操作繁
22、瑣,加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜;其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便,不存在菌落混雜問題,缺點(diǎn)是由于纖維素與瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊,因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是:有些微生物具有降解色素的能力,它們?cè)陂L時(shí)間培養(yǎng)過程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分。 5.為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物? 答:在選擇培養(yǎng)的條件下,可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁
23、殖,而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用。 (二)練習(xí) 2.答:流程圖表示如下。 土壤取樣→選擇培養(yǎng)(此步是否需要,應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)→梯度稀釋→將菌懸液涂布到有特定選擇作用的培養(yǎng)基上→挑選單菌落→發(fā)酵培養(yǎng) 專題3 植物的組織培養(yǎng)技術(shù) 本專題圍繞植物組織培養(yǎng)的基本技術(shù)展開,主要技術(shù)歸納如下。 1.培養(yǎng)基的制備2.外植體消毒3.接種4.培養(yǎng) 5.移栽6.栽培 課題1? 菊花的組織培養(yǎng) 一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)植物組織培養(yǎng)的基本過程 知識(shí)要點(diǎn):1.細(xì)胞分化的概念;2.離體植物細(xì)胞的脫分化與再分化。 (二)影響植物組織培養(yǎng)的
24、因素 知識(shí)要點(diǎn):影響植物組織培養(yǎng)的因素有培養(yǎng)基配制、外植體的選取、消毒、接種、培養(yǎng)、移栽與栽培等。 二、注意事項(xiàng) (一)無菌技術(shù)是植物組織培養(yǎng)能否獲得成功的關(guān)鍵 植物組織培養(yǎng)不同于扦插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,所以對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高,對(duì)無菌操作的要求非常嚴(yán)格。如果不小心引起污染,將可能造成培養(yǎng)工作的前功盡棄。 無菌技術(shù)包括培養(yǎng)基消毒滅菌與植物材料(外植體)的消毒滅菌。對(duì)培養(yǎng)材料進(jìn)行表面滅菌時(shí),一方面要考慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受能力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)別對(duì)待。 (二)妥善處理被污染的培養(yǎng)
25、物 即使對(duì)于有經(jīng)驗(yàn)的操作人員,操作后出現(xiàn)培養(yǎng)物被污染的情況也常有。一般情況下,細(xì)菌污染可能是由接種人員造成的,如未戴口罩,接種時(shí)說話,或手與器械消毒不嚴(yán)等。真菌污染可能是植物材料滅菌不當(dāng)。需要特別注意的是,一旦發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)材料被污染,特別是真菌性污染,一定不要打開培養(yǎng)瓶。應(yīng)先將所有被污染的培養(yǎng)瓶統(tǒng)一放在高壓蒸汽鍋內(nèi)進(jìn)行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培養(yǎng)瓶,進(jìn)行清洗。 (三)有毒藥品的用后處理 外植體滅菌用過的有毒藥品要妥善處理(如氯化汞等),以免引起環(huán)境污染。一般應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部門處理。 三、課題成果評(píng)價(jià) (一)對(duì)接種操作中污染情況的分析 接種3~4 d后,在接種操作中被雜菌污染的
26、培養(yǎng)物會(huì)表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請(qǐng)學(xué)生適時(shí)統(tǒng)計(jì)污染率,分析接種操作是否符合無菌要求。 (二)是否完成了對(duì)植物組織的脫分化與再分化 觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果,看看是否培養(yǎng)出了愈傷組織,記錄多長時(shí)間長出愈傷組織。統(tǒng)計(jì)更換培養(yǎng)基后愈傷組織進(jìn)一步分化成根與芽的比例與時(shí)間。 (三)是否進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)、對(duì)照與記錄 做好統(tǒng)計(jì)與對(duì)照,填好結(jié)果記錄表,培養(yǎng)嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)態(tài)度。從實(shí)驗(yàn)的第一步開始就要做好實(shí)驗(yàn)記錄,可以分組配制不同培養(yǎng)基,如誘導(dǎo)愈傷或直接分化叢芽的培養(yǎng)基,然后做不同配方的比較。 (四)生根苗的移栽是否合格 生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培養(yǎng)基,又不能傷與根系。一般使用無土栽培的辦法。培養(yǎng)基質(zhì)要提前
27、消毒,可以向培養(yǎng)基質(zhì)噴灑質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的高錳酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12 h。掀開塑料薄膜后24 h才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天,等壯苗后再定植大田或進(jìn)行盆栽。統(tǒng)計(jì)自己移栽的成活率,看看移栽是否合格。 四、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.你能說出各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用嗎?同專題2中微生物培養(yǎng)基的配方相比,MS培養(yǎng)基的配方有哪些明顯的不同? 答:微量元素與大量元素提供植物細(xì)胞生活所必需的無機(jī)鹽;蔗糖提供碳源,同時(shí)能夠維持細(xì)胞的滲透壓;甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主。與微生物的培養(yǎng)不同,MS
28、培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng),無機(jī)鹽混合物包括植物生長必須的大量元素與微量元素兩大類。 2.你打算做幾組重復(fù)?你打算設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)嗎? 答:可以生分組,做不同的材料或配方,最后分別匯報(bào)成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復(fù)。設(shè)置對(duì)照實(shí)驗(yàn)可以取用一個(gè)經(jīng)過滅菌的裝有培養(yǎng)基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培養(yǎng),用以說明培養(yǎng)基制作合格,沒有被雜菌污染。 (二)練習(xí) 1.答:植物組織培養(yǎng)所利用的植物材料體積小、抗性差,對(duì)培養(yǎng)條件的要求較高。用于植物組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基同樣適合于某些微生物的生長,如一些細(xì)菌、真菌等的生長。而培養(yǎng)物一旦受到微生物的污染,就會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)前功盡棄,因此要進(jìn)行嚴(yán)格的無菌操作
29、。 2.答:外植體的生理狀態(tài)是成功進(jìn)行組織培養(yǎng)的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好,容易誘導(dǎo)脫分化與再分化。 課題2 月季的花藥培養(yǎng) 一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)被子植物的花粉發(fā)育 知識(shí)要點(diǎn):1.花粉是單倍體生殖細(xì)胞;2.花粉的發(fā)育要經(jīng)歷不同的時(shí)期。 (二)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑 知識(shí)要點(diǎn):花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑。 (三)影響花藥培養(yǎng)的因素 知識(shí)要點(diǎn):選取適宜的材料與培養(yǎng)基組成是花粉植株誘導(dǎo)成功的關(guān)鍵。 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)選材是否恰當(dāng) 選材是否成功是花藥培養(yǎng)成功的關(guān)鍵。學(xué)生應(yīng)學(xué)會(huì)通過顯微鏡觀察處于適宜發(fā)育期的花粉。 (二)無菌技術(shù)是否過關(guān) 如果出現(xiàn)了污染現(xiàn)
30、象,說明某些操作步驟,如培養(yǎng)基滅菌、花蕾消毒或接種等有問題。 (三)接種是否成功 如果接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體,花藥培養(yǎng)的第一步就成功了。要適時(shí)轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基,以便愈傷組織或胚狀體進(jìn)一步分化成再生植株。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 為什么花瓣松動(dòng)會(huì)給材料的消毒帶來困難? 答:花瓣松動(dòng)后,微生物就可能侵入到花藥,給材料的消毒帶來困難。 (二)練習(xí) 1.答:F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。如果運(yùn)用常規(guī)育種方法,將F2代中的紫色甜玉米與白色甜玉米(aasusu)進(jìn)行測交,可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣,耗時(shí)
31、也較長,需要至少三年的選種與育種時(shí)間。如果利用花藥培養(yǎng)的技術(shù),在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的組合,再將花粉植株進(jìn)行染色體加倍,就可以直接得到紫色甜玉米的純合體(AAsusu)。這種方法可以大大縮短育種周期。 2.答:植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是:培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)與接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于:花藥培養(yǎng)的選材非常重要,需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾;花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要與時(shí)更換培養(yǎng)基;花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。 專題5 DNA與蛋白質(zhì)技術(shù) 課題1? DNA的粗撮與鑒定技術(shù) 一、基礎(chǔ)知識(shí) 知識(shí)要點(diǎn)
32、:1.DNA的物理化學(xué)性質(zhì),尤其是DNA的溶解性;2.二苯胺法鑒定DNA的方法與原理。 分析插圖5-1“DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線”,理解:在NaCl溶液濃度低于0.14 mol/L時(shí),DNA的溶解度隨NaCl溶液濃度的增加而逐漸降低;在0.14 mol/L時(shí),DNA溶解度最小;當(dāng)NaCl溶液濃度繼續(xù)增加時(shí),DNA的溶解度又逐漸增大。利用上述原理,可以將DNA溶于高濃度的NaCl溶液中,使其與其他物質(zhì)分開。 2.認(rèn)識(shí)DNA與蛋白質(zhì)對(duì)酶、高溫與洗滌劑的耐受性的不同。教材在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中關(guān)于去除濾液中雜質(zhì)的第二、第三個(gè)方案,正是利用了上述不同的特性,從而達(dá)到分離DNA與蛋白質(zhì)的目的。 3
33、.用二苯胺法鑒定DNA的方法 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)是否提取出了DNA 觀察你提取的DNA顏色,如果不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定出現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功,如果不呈現(xiàn)藍(lán)色,可能所提取的DNA含量低,或是實(shí)驗(yàn)操作中出現(xiàn)錯(cuò)誤,需要重新制備。 (二)分析DNA中的雜質(zhì) 本實(shí)驗(yàn)提取的DNA粗制品有可能仍然含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。 (三)不同實(shí)驗(yàn)方法的比較 對(duì)于不同的實(shí)驗(yàn)方法,本課題可以采用分組的方法進(jìn)行研究。首先選取不同的實(shí)驗(yàn)材料,其次同種材料還可以采用不同方法,從多方面比較實(shí)驗(yàn)結(jié)果,如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等,看看哪種實(shí)驗(yàn)材料、哪種提取方法的
34、效果更好。 三、答案與提示 (一)旁欄思考題 1.為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂? 答:蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi),使血細(xì)胞脹裂,再加上攪拌的機(jī)械作用,就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜與核膜的破裂),從而釋放出DNA。 2.加入洗滌劑與食鹽的作用分別是什么? 答:洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細(xì)胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCl,有利于DNA的溶解。 3.如果研磨不充分,會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響? 答:研磨不充分會(huì)使細(xì)胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。
35、 4.此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細(xì)胞成分? 答:可能含有核蛋白、多糖與RNA等雜質(zhì)。 5.為什么反復(fù)地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)? 答:用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復(fù)溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。 6.方案二與方案三的原理有什么不同? 答:方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA與蛋白質(zhì)對(duì)高溫耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分離。 (二)練習(xí) 1.答:提取DNA的第一步是材料的選取,其目的是一定要
36、選取DNA含量較高的生物材料,否則會(huì)由于實(shí)驗(yàn)過程中或多或少的損失而造成檢測的困難;第二步是DNA的釋放與溶解,這一步是實(shí)驗(yàn)成功與否的關(guān)鍵,要盡可能使細(xì)胞內(nèi)的DNA全部溶解;第三步是DNA的純化,即根據(jù)DNA的溶解特性、對(duì)酶與高溫的耐受性的不同等特性,最大限度地將DNA與雜質(zhì)分開;最后一步是對(duì)DNA進(jìn)行鑒定,這是對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果的檢測。 2.答:提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因?yàn)?,與DNA相比,蛋白質(zhì)對(duì)溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得多,很容易失活;并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣,理化性質(zhì)各不相同,使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法,只能根據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件,設(shè)計(jì)特定的方法。
37、 專題6 植物有效萬分的提取 本專題圍繞植物有效成分的提取展開,主要操作技術(shù)歸納如下。 1.蒸餾法。2.壓榨法。3.萃取法。 課題1 植物芳香油的提取 一、基礎(chǔ)知識(shí) (一)植物芳香油的來源 知識(shí)要點(diǎn):1.植物芳香油的來源與發(fā)展歷史;2.植物芳香油的主要化學(xué)成分。 (二)植物芳香油的提取方法 知識(shí)要點(diǎn):提取植物芳香油的三種基本方法:蒸餾、壓榨與萃取。 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)是否提取出了植物精油 觀察提取出的玫瑰精油或橘皮精油,從顏色、氣味等方面來評(píng)價(jià)所提取的精油的純度與質(zhì)量。從玫瑰花提取的芳香油是淺黃色至黃色的液體,并帶有甜韻的玫瑰香;從橘皮提取的橘皮精油無色透明,具有
38、誘人的橘香味。本課題只是對(duì)兩種精油進(jìn)行了初步的提取,其中仍然含有大量的雜質(zhì)。 (二)出油率的計(jì)算 根據(jù)教科書提供的公式計(jì)算出油率。如果出油率高,說明實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)合理;如果出油率低,教師可以幫助學(xué)生從實(shí)驗(yàn)方法的選擇、實(shí)驗(yàn)過程的操作等各方面分析原因,改進(jìn)后再作嘗試。 三、答案與提示 練習(xí) 1.答:植物芳香油一般都是由2~3種芳香油混合調(diào)配而成的,其中的基底油常取自植物的種子或果實(shí),比如胡桃油、甜杏油?;子团c其他芳香油調(diào)配在一起,能夠加強(qiáng)功效。 從玫瑰花中提取出的玫瑰油稱為“液體黃金”,是世界香料工業(yè)不可取代的原料,多用于制造高級(jí)香水等化妝品。提取出的玫瑰油不含有任何添加劑或化學(xué)原料,
39、是純天然的護(hù)膚品,具有極好的抗衰老與止癢作用,能夠促進(jìn)細(xì)胞再生、防止肌膚老化、平撫肌膚細(xì)紋,還具有使人放松、愉悅心情的功效。 杏仁油富含礦物質(zhì)與維生素,是一種質(zhì)地輕柔、高滲透性的保濕劑。 熏衣草精油取自熏衣草花,具有怡神、助睡眠、舒緩壓力的作用,此外它還具有降壓、止痛、促進(jìn)細(xì)胞再生的功能,可以用于治療燙傷與蚊蟲叮咬、預(yù)防與改善脫發(fā)。 檸檬精油取自檸檬果皮,具有消除緊張、焦慮、振奮精神的作用,可用于治療神經(jīng)衰弱、關(guān)節(jié)炎,還具有促進(jìn)血液循環(huán)、殺菌止痛、平衡油脂分泌、舒緩肌膚老化、滋養(yǎng)頭發(fā)的功效。 茶樹精油具有新鮮、強(qiáng)烈的藥草香味,能改善毛孔阻塞,凈化肌膚,抗感染,對(duì)治療青春痘有奇效。它也能
40、消除疲勞、緩解壓力。 天竺葵精油能收斂皮膚,平衡、調(diào)理、潤滑中干性皮膚與敏感性皮膚,改善橘皮樣表皮,還有助于恢復(fù)精力,平緩心情。 茉莉精油能防止肌膚老化,對(duì)中干性皮膚與敏感性皮膚具有良好的保濕與滋潤作用,尤其對(duì)女性的妊娠紋與內(nèi)分泌有獨(dú)特的改善效果。 橙花精油具有清新的水果香味,不但能使人鎮(zhèn)靜,還能防止中干性肌膚的老化現(xiàn)象發(fā)生,給肌膚賦予青春活力,促進(jìn)皮膚再生。 課題2 胡蘿卜素的提取 一、基礎(chǔ)知識(shí) 1.胡蘿卜素的性狀;2.胡蘿卜素的提取方法 二、課題成果評(píng)價(jià) (一)確定提取胡蘿卜素的最佳方案 在進(jìn)行本實(shí)驗(yàn)時(shí),可以分組,每組可以采用不同的有機(jī)溶劑與時(shí)間進(jìn)行萃取,比較各組的實(shí)驗(yàn)結(jié)
41、果,確定提取胡蘿卜素的最佳方案。 (二)是否出現(xiàn)對(duì)應(yīng)的層析帶 如果萃取樣品中出現(xiàn)了與標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣的層析帶,說明提取胡蘿卜素的實(shí)驗(yàn)成功。由于提取物中含有雜質(zhì),萃取樣品的顏色可能比標(biāo)準(zhǔn)樣品的顏色淺,我們也可以通過顏色的比較,初步確定提取的胡蘿卜素的量。 二、答案與提示 (一)[資料一] 萃取劑的選擇討論題 1.乙醇與丙酮能夠用于胡蘿卜素的萃取嗎?為什么? 答:胡蘿卜素可溶于乙醇與丙酮,但它們是水溶性有機(jī)溶劑,因萃取中能與水混溶而影響萃取效果,所以不用它們作萃取劑。 2.在石油醚、醋酸乙酯、乙醚、苯與四氯化碳這幾種有機(jī)溶劑中,哪種最適宜用來提取胡蘿卜素? 答:在這五種有機(jī)溶劑中,石油
42、醚的沸點(diǎn)最高,在加熱萃取時(shí)不易揮發(fā),所以石油醚最適宜用作萃取劑。 (二)練習(xí) 1.答: 列表分析如下。 提取方法 實(shí)驗(yàn)原理 方法步驟 適用范圍 水蒸氣蒸餾 ??? 利用水蒸氣將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來 1.水蒸氣蒸餾 2.分離油層 3.除水過濾 ??? 適用于提取玫瑰油、薄荷油等揮發(fā)性強(qiáng)的芳香油 壓榨法 ??? 通過機(jī)械加壓,壓榨出果皮中的芳香油 1.石灰水浸泡、漂洗 2.壓榨、過濾、靜置 3.再次過濾 ??? 適用于柑橘、檸檬等易焦糊原料的提取 有機(jī)溶劑萃取 ??? 使芳香油溶解在有機(jī)溶劑中,蒸發(fā)溶劑后就可獲得芳香油 1.粉碎、干燥 2.萃取、過濾 3.濃縮 ??? 適用范圍廣,要求原料的顆粒要盡可能細(xì)小,能充分浸泡在有機(jī)溶液中
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