高三生物 實(shí)驗(yàn)專項(xiàng)突破31 DNA的粗提取與鑒定 新人教版 課件

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1、 實(shí)驗(yàn)原理 1. DNA在不同濃度的NaCl溶液中的溶解度不同，其中在物質(zhì)的量濃度為0.14 mol/L時(shí)最低。 2. DNA不溶于酒精，但是細(xì)胞中的一些有機(jī)物如蛋白質(zhì)則溶于酒精，可以用酒精提純。 3. DNA遇二苯胺(沸水浴)會(huì)被染成藍(lán)色，可用來鑒定DNA分子。 實(shí)驗(yàn)流程 1. 做該實(shí)驗(yàn)時(shí)，不能用豬血代替雞血，因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞中沒有細(xì)胞核，不能提取DNA。 2. 制備雞血細(xì)胞液時(shí)，要注意向雞血中加檸檬酸鈉，防止血液凝固。 3. 漲破細(xì)胞的方法：向血細(xì)胞中加入蒸餾水，血細(xì)胞溶液的濃度大于蒸餾水的濃度，從而使血細(xì)胞大量吸水而漲破。不能用生理鹽水，因?yàn)檠?xì)胞溶液的濃度與生理鹽水的濃度相當(dāng)，

2、所以血細(xì)胞在生理鹽水中不能吸收水分。 4. 兩次加入蒸餾水，第一次是為了使血細(xì)胞吸水漲破；第二次是為了降低氯化鈉的濃度，有利于DNA的析出。 5. 兩次析出DNA的方法：第一次是加入蒸餾水，降低氯化鈉的濃度，促使DNA析出；第二次是加入冷酒精，因?yàn)镈NA不溶于酒精溶液。 6. 鑒定DNA時(shí)要用兩支試管，其中不加DNA的試管起對(duì)照作用，該試管溶液不變色，另一支加有DNA的試管溶液變藍(lán)色。選材時(shí)注意選用細(xì)胞易破碎、DNA含量相對(duì)較高的生物組織；鑒定DNA的二苯胺試劑要現(xiàn)配現(xiàn)用，否則會(huì)影響鑒定效果。 2010江蘇卷某生物興趣小組開展DNA粗提取的相關(guān)探究活動(dòng)，具體步驟如下： 材料處理：稱取新鮮的花菜

3、、辣椒和蒜黃各2份，每份10 g。剪碎后分成兩組，一組置于20、另一組置于20條件下保存24 h。 DNA粗提?。?第一步：將上述材料分別放入研缽中，各加入15 mL研磨液，充分研磨。用兩層紗布過濾，取濾液備用。 第二步：先向6只小燒杯中分別注入10 mL濾液，再加入20 mL體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒緩緩地向一個(gè)方向攪拌，使絮狀物纏繞在玻璃棒上。 第三步：取6支試管，分別加入等量的2 mol/L NaCl溶液溶解上述絮狀物。 DNA檢測(cè)：在上述試管中各加入4 mL二苯胺試劑，混合均勻后，置于沸水中加熱5 min，待試管冷卻后比較溶液的顏色深淺，結(jié)果如下表。材料保存溫度花菜辣椒

4、蒜黃20 (注：“”越多表示藍(lán)色越深) 分析上述實(shí)驗(yàn)過程，回答下列問題： (1)該探究性實(shí)驗(yàn)的課題名稱是_。 (2)第二步中“緩緩地”攪拌，這是為了減少_。 (3)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，得出結(jié)論并分析。 結(jié)論1：與20相比，相同實(shí)驗(yàn)材料在20條件下保存，DNA的提取量較多。 結(jié)論2：_。 針對(duì)結(jié)論1，請(qǐng)?zhí)岢龊侠淼慕忉專篲。 (4)氯仿密度大于水，能使蛋白質(zhì)變性沉淀，與水和DNA均不相溶，且對(duì)DNA影響極小。為了進(jìn)一步提高DNA純度，依據(jù)氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基礎(chǔ)上繼續(xù)操作的步驟是： _。 然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的冷酒精溶液使DNA析出。 思路點(diǎn)撥：本題主要考查DNA粗提取的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的實(shí)驗(yàn)與探究能力。如果DNA斷裂，就不容易被提取出來；溫度主要是通過影響酶的活性來影響生理過程。粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白質(zhì)，可以通過氯仿的特殊功能來去除蛋白質(zhì)，提高DNA純度。 答案：(1)探究不同材料和不同保存溫度對(duì)DNA提取量的影響(2)DNA斷裂(3)等質(zhì)量的不同實(shí)驗(yàn)材料，在相同的保存溫度下，從蒜黃提取的DNA量最多低溫抑制了相關(guān)酶的活性，DNA降解速度慢(4)將第三步獲得的溶液與等量的氯仿充分混合，靜置一段時(shí)間，吸取上清液