過(guò)氧化氫酶(CAT)試劑盒說(shuō)明書(shū)

. 過(guò)氧化氫酶 (CAT)試劑盒說(shuō)明書(shū) 一、測(cè)定原理： 過(guò)氧化氫酶 (CAT) 分解 H2O2 的反應(yīng)可通過(guò)加入鉬酸銨而迅速中止，剩余的作用產(chǎn)生一種淡黃色的絡(luò)合物，在 405nm 處測(cè)定其變化量，可計(jì)算出  CAT  H2O2 與鉬酸銨的活力。試劑一 (ml) 二、試劑組成與配制： 試劑一：液體 100 ml 1 瓶， 4℃保存 6 個(gè)月。 試劑二：底物液體  10 ml 1 瓶， 4℃保存  6 個(gè)月。 試劑三：顯色粉劑 1 瓶， 4℃保存 6 個(gè)月。加雙蒸水至  100 ml 溶解， 4℃保存  1 個(gè)月。（如 果底部有不溶粉末沉淀，直接取上清使用，不影響測(cè)定結(jié)果） 試劑四：液體  10 ml 1 瓶， 4℃保存  6 個(gè)月。天冷時(shí)會(huì)凝固，臨用前  37℃水浴至透明方可使 用。 三、組織樣本的檢測(cè) 1、組織勻漿液的制備：準(zhǔn)確稱(chēng)取組織重量，按重量 (g)：體積 (ml)=1 ：9 的比例加入 9 倍體 積的生理鹽水， 冰水浴條件下， 制備成 10%的組織勻漿， 2500 轉(zhuǎn) /分離心 10 分鐘，取上清， 再用生理鹽水稀釋成最佳取樣濃度，待測(cè) (最佳取樣濃度摸索減附錄 )。 2、操作表： 對(duì)照管 測(cè)定管 組織勻漿 (ml) 0.05 試劑一 (37℃預(yù)溫 )(ml) 1.0 1.0 試劑二 (37℃預(yù)溫 )(ml) 0.1 0.1 混勻， 37℃準(zhǔn)確反映 1 分鐘（ 60 秒） 試劑三 (ml) 1.0 1.0 試劑四 (ml) 0.1 0.1 組織勻漿 (ml) 0.05 混勻，波長(zhǎng) 405nm ，光徑 0.5cm，雙蒸水調(diào)零，測(cè)定各管吸光度值。 注：一般樣本沒(méi)有高脂等導(dǎo)致顯著差異情況，對(duì)照管的樣本更換成雙蒸水，做  1-2 管對(duì)照即 1 / 2 . 可。如需做樣本自身對(duì)照，則試劑盒所測(cè)定樣本數(shù)量減至 48 樣。 3.組織中 CAT 活力的計(jì)算： （1）定義：每毫克組織蛋白每秒種分解 1umol 的 H2O2 的量為一個(gè)活力單位。 （2）計(jì)算公式： 組織勻漿中 CAT 活力 (U / mgprot ) (對(duì)照 OD 值 - 測(cè)定 OD值 ) 271* 1 待測(cè)樣本蛋白濃度 (mgprot / ml) 60 取樣量 注： *271 為斜率的倒數(shù) （3）計(jì)算舉例： 取 10%水稻葉片勻漿 0.05ml 做 CAT 檢測(cè)，測(cè)得對(duì)照管吸光度為 0.605，測(cè)定管吸光度為 0.332， 同時(shí)測(cè)得 10%水稻葉片勻漿蛋白濃度為 3.1303 mgprot/ml 。則計(jì)算結(jié)果為： 組織勻漿中 CAT 活力 ( U/mgprot ) 0.704 0.332 271 1 60 3.1303 10.7351U /mgprot 0.05 注： 1.測(cè)定血清和血漿時(shí)，如果樣本不溶血，每批樣本只需要隨機(jī)挑 2 個(gè)樣本做對(duì)照或者用 雙蒸水代替額樣本做對(duì)照；如果樣本溶血的話(huà)，必須每個(gè)樣本都要做對(duì)照。 2.測(cè)定組織勻漿時(shí)，如果樣本不是高脂，每批樣本只需要隨機(jī)挑 2 個(gè)樣本做對(duì)照或者用雙蒸 水代替額樣本做對(duì)照；如果樣本高脂，必須每個(gè)樣本都要做對(duì)照。 3.測(cè)定全血時(shí)，必需每個(gè)樣本都要做對(duì)照。 2 / 2