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1、DNA重組技術(shù)的基本工具
[基礎(chǔ)對(duì)點(diǎn)]
知識(shí)點(diǎn)一 基因工程概念及工具酶
1.下列敘述符合基因工程概念的是( )
A.加熱殺死的S型細(xì)菌和活的R型細(xì)菌一起培養(yǎng)得到活的S型細(xì)菌
B.將人的干擾素基因重組到質(zhì)粒后導(dǎo)入大腸桿菌,獲得能產(chǎn)生人干擾素的菌株
C.用紫外線照射青霉菌,使其DNA發(fā)生改變,通過(guò)篩選獲得青霉素高產(chǎn)菌株
D.自然界中天然存在的噬菌體自行感染細(xì)菌后其DNA整合到細(xì)菌DNA上
答案 B
解析 基因工程又叫DNA重組技術(shù),是一種人為的操作過(guò)程。A項(xiàng)屬于基因重組,但由于S型細(xì)菌的基因不是人為導(dǎo)入R型細(xì)菌的,故不屬于基因工程的范疇,不符合題意;B項(xiàng)符合基因工程的概念,符
2、合題意;C項(xiàng)屬于誘變育種,不符合題意;D項(xiàng)外源基因?qū)爰?xì)菌不是人為操作的,不屬于基因工程的范疇,不符合題意。
2.下列有關(guān)基因工程中限制性核酸內(nèi)切酶的描述,正確的是( )
A.限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別6個(gè)或8個(gè)脫氧核苷酸組成的序列
B.限制性核酸內(nèi)切酶的活性受溫度的影響
C.限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別和切割RNA
D.限制性核酸內(nèi)切酶只能從原核生物中提取
答案 B
解析 限制性核酸內(nèi)切酶能夠識(shí)別并切割雙鏈DNA上特定的核苷酸序列,大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶能夠識(shí)別6個(gè)核苷酸組成的序列,少數(shù)可以識(shí)別4、5或者8個(gè)核苷酸組成的序列,A錯(cuò)誤;限制性核酸內(nèi)切酶的化學(xué)本質(zhì)是蛋白質(zhì),活性受溫度影響
3、,B正確;限制性核酸內(nèi)切酶只能識(shí)別和切割DNA,C錯(cuò)誤;限制性核酸內(nèi)切酶主要從原核生物獲得,D錯(cuò)誤。
3.下面是4種限制酶所識(shí)別的DNA分子序列和切割位點(diǎn)圖(↓表示切割位點(diǎn),切口為黏性末端):
限制酶1:—↓GATC—
限制酶2:—CATG↓—
限制酶3:—G↓GATCC—
限制酶4:—CCGC↓GG—
請(qǐng)指出下列哪組表達(dá)正確( )
A.限制酶1和3切出的黏性末端相同
B.限制酶1、2、4識(shí)別的序列都由4個(gè)脫氧核苷酸組成
C.在使用限制酶的同時(shí)還需要解旋酶
D.限制酶1和2切出的DNA片段可通過(guò)T4DNA連接酶拼接
答案 A
解析
4.下列有關(guān)DNA連接酶的說(shuō)
4、法,正確的是( )
A.DNA連接酶和限制酶的作用恰好相反,DNA連接酶可以將限制酶切開(kāi)的雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái)
B.DNA連接酶和DNA聚合酶一樣能連接單鏈DNA片段
C.E·coli DNA連接酶可以連接有平末端的DNA片段,也能連接有黏性末端的DNA片段
D.T4DNA連接酶只能連接有平末端的DNA片段
答案 A
解析 DNA連接酶不能連接單鏈DNA片段,DNA聚合酶是將單個(gè)脫氧核苷酸加到已有的核苷酸片段上,B錯(cuò)誤;E·coli DNA連接酶只能連接有黏性末端的DNA片段,C錯(cuò)誤;T4DNA連接酶既可以連接有黏性末端的DNA片段,也可以連接有平末端的DNA片段,D錯(cuò)誤。
5、
5.如圖為DNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化,圖中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA連接酶、解旋酶作用的正確順序是( )
A.①②③④ B.①②④③
C.①④②③ D.①④③②
答案 C
解析 限制酶能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列,并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂,因此①符合;DNA聚合酶用于DNA分子的復(fù)制,能在單鏈上將一個(gè)個(gè)脫氧核苷酸連接起來(lái),因此④符合;DNA連接酶能在具有相同末端的兩個(gè)DNA片段之間形成磷酸二酯鍵,將切開(kāi)的雙鏈DNA片段“縫合”起來(lái),因此②符合;解旋酶能夠?qū)NA分子的雙螺旋解開(kāi),因此③符合,C正確。
6
6、.關(guān)于下圖所示黏性末端的敘述,正確的是( )
A.①與③是由相同限制酶切割產(chǎn)生的
B.DNA連接酶可催化①與③的連接
C.經(jīng)酶切形成④需要脫去2分子水
D.DNA連接酶與DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端
答案 B
解析 ①與③的黏性末端相同,但它們識(shí)別的堿基序列不同,應(yīng)不是相同的限制性核酸內(nèi)切酶切出來(lái)的,A錯(cuò)誤;酶切獲得④需要消耗2個(gè)水分子,C錯(cuò)誤;DNA聚合酶作用于單個(gè)游離的脫氧核苷酸,D錯(cuò)誤。
知識(shí)點(diǎn)二 基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車(chē)”
7.下列有關(guān)細(xì)菌質(zhì)粒的敘述,正確的是( )
A.質(zhì)粒是存在于細(xì)菌細(xì)胞中的一種顆粒狀的細(xì)胞器
B.質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞中能
7、自我復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子
C.質(zhì)粒只有在進(jìn)入受體細(xì)胞后在宿主細(xì)胞內(nèi)才能復(fù)制
D.細(xì)菌質(zhì)粒的復(fù)制過(guò)程一定是在受體細(xì)胞外獨(dú)立進(jìn)行
答案 B
解析 質(zhì)粒是細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中能自主復(fù)制的小型環(huán)狀DNA分子,不是細(xì)胞器,在受體細(xì)胞內(nèi)外均可復(fù)制,A、C、D錯(cuò)誤,B正確。
8.質(zhì)粒是基因工程最常用的載體,下列有關(guān)質(zhì)粒的說(shuō)法錯(cuò)誤的是( )
A.質(zhì)粒不僅存在于細(xì)菌中,某些病毒也具有
B.質(zhì)粒作為載體時(shí),應(yīng)具有標(biāo)記基因和多個(gè)限制酶切點(diǎn)
C.質(zhì)??蓪⒛康幕蛘系饺旧wDNA上
D.質(zhì)粒能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存,并在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制
答案 A
解析 質(zhì)粒為小型環(huán)狀DNA分子,不僅存在于細(xì)菌中,也
8、存在于某些真核生物中,但病毒中沒(méi)有質(zhì)粒,A錯(cuò)誤;質(zhì)粒作為載體時(shí),應(yīng)具有標(biāo)記基因和多個(gè)限制酶切割位點(diǎn),B正確;質(zhì)粒攜帶目的基因進(jìn)入細(xì)胞后,進(jìn)行自主復(fù)制,或?qū)⒛康幕蛘系绞荏w細(xì)胞染色體DNA上,C正確;質(zhì)粒能夠在宿主細(xì)胞中穩(wěn)定保存,并在宿主細(xì)胞內(nèi)復(fù)制,D正確。
9.限制酶MunⅠ和限制酶EcoRⅠ的識(shí)別序列及切割位點(diǎn)分別是—C↓TTAAG—和—G↓AATTC—。如圖表示四種質(zhì)粒和目的基因,其中,質(zhì)粒上箭頭所指部位為酶的識(shí)別位點(diǎn),陰影部分表示標(biāo)記基因。適于作為圖示目的基因載體的質(zhì)粒是( )
答案 A
解析 用限制酶MunⅠ 切割A(yù)質(zhì)粒后,不會(huì)破壞標(biāo)記基因,而且還能產(chǎn)生與目的基因兩側(cè)黏性
9、末端相同的末端,適于作為目的基因的載體,A正確;B項(xiàng)中質(zhì)粒沒(méi)有標(biāo)記基因,不適于作為目的基因的載體,B錯(cuò)誤;C、D質(zhì)粒含有標(biāo)記基因,但用限制酶切割后,標(biāo)記基因會(huì)被破壞,因此不適于作為目的基因的載體,C、D錯(cuò)誤。
[能力提升]
10.下圖表示一項(xiàng)重要的生物技術(shù),對(duì)圖中物質(zhì)a、b、c、d的描述,正確的是( )
A.通常情況下,a與d需要用同一種限制酶進(jìn)行切割
B.b能識(shí)別特定的核苷酸序列,并將A與T之間的氫鍵切開(kāi)
C.c連接雙鏈間的A和T,使黏性末端處堿基互補(bǔ)配對(duì)
D.b代表的是限制性核酸內(nèi)切酶,c代表的是RNA聚合酶
答案 A
解析 b是限制性核酸內(nèi)切酶,能識(shí)別特定的核苷酸序
10、列并使DNA分子的每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開(kāi),而不是使氫鍵斷開(kāi),B錯(cuò)誤;c是DNA連接酶,能連接兩個(gè)DNA片段中的磷酸二酯鍵,C、D錯(cuò)誤。
11.下列關(guān)于如圖所示DNA分子片段的說(shuō)法,正確的是( )
A.限制酶可作用于①部位,解旋酶作用于③部位
B.限制酶可作用于③部位,解旋酶作用于①部位
C.作用于①部位的限制酶同時(shí)也可以作用于④部位
D.作用于①部位的限制酶與作用于⑤部位的限制酶的堿基識(shí)別順序相反
答案 A
解析 限制酶可作用于①部位磷酸二酯鍵,解旋酶作用于③部位氫鍵,A正確,B錯(cuò)誤;作用于①部位的限制酶同時(shí)也可以作用于⑤部位,C錯(cuò)誤;作用于①部
11、位的限制酶與作用于⑤部位的限制酶的堿基識(shí)別順序相同,它們識(shí)別的序列都為—GAATTC—,D錯(cuò)誤。
12.基因工程中涉及多種工具酶。限制性核酸內(nèi)切酶是一類(lèi)能識(shí)別特定核苷酸序列并在特定位點(diǎn)切割雙鏈DNA的“基因剪刀”。被限制酶識(shí)別的序列往往正反讀順序相同,斷裂的位置交錯(cuò),但又是圍繞著一個(gè)軸線(對(duì)稱(chēng)軸)對(duì)稱(chēng)排列,如圖1。PstⅠ和EcoRⅠ都是限制酶。
(1)請(qǐng)補(bǔ)全圖2中的互補(bǔ)鏈,畫(huà)出對(duì)稱(chēng)軸以及切割后的產(chǎn)物。
(2)DNA連接酶是基因操作的“針線”,其作用是把具有________能力而粘貼在一起但存在的切口封閉,進(jìn)而才可能形成有意義的________。
(3)逆轉(zhuǎn)錄酶也常被用于基因工程,
12、其存在于________(生物)中,催化以________為模板合成DNA的過(guò)程。
答案
(2)堿基互補(bǔ)配對(duì) 重組DNA
(3)某些病毒 RNA
解析
(2)DNA連接酶作用于DNA分子斷開(kāi)的磷酸二酯鍵,把目的基因與載體結(jié)合形成重組DNA分子,而兩條DNA分子之間是通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)形成氫鍵連在一起的。
(3)逆轉(zhuǎn)錄酶只存在于部分以RNA為遺傳物質(zhì)的病毒中,催化反轉(zhuǎn)錄過(guò)程,即以RNA為模板合成DNA的一條鏈,在DNA聚合酶作用下形成雙鏈DNA。
13.如圖為大腸桿菌及質(zhì)粒載體的結(jié)構(gòu)模式圖,據(jù)圖回答下列問(wèn)題。
(1)a代表的物質(zhì)和質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)都是________
13、__,二者還具有其他共同點(diǎn),如①________________________,②________________(寫(xiě)出兩條即可)。
(2)若質(zhì)粒DNA分子的切割末端為,則與之連接的目的基因切割末端應(yīng)為_(kāi)_______________;可使用________________把質(zhì)粒和目的基因連接在一起。
(3)氨芐青霉素抗性基因在質(zhì)粒DNA上稱(chēng)為_(kāi)_______________,其作用是__________________________________________________________________。
(4)下列常在基因工程中用作載體的是( )
A.蘇云金芽孢桿菌的抗蟲(chóng)基因
B.土壤農(nóng)桿菌中的RNA分子
C.大腸桿菌的質(zhì)粒
D.動(dòng)物細(xì)胞的染色體
答案 (1)DNA 能夠自我復(fù)制 具有遺傳效應(yīng)
(3)標(biāo)記基因 供重組DNA的鑒定和選擇
(4)C
解析 (1)a代表的物質(zhì)是擬核中的DNA分子,質(zhì)粒是細(xì)胞質(zhì)中的DNA分子,二者都是環(huán)狀DNA分子、能夠自我復(fù)制、具有遺傳效應(yīng)、也都具有雙螺旋結(jié)構(gòu)等。
(3)質(zhì)粒上的氨芐青霉素抗性基因是標(biāo)記基因,可以用作目的基因(重組DNA)是否導(dǎo)入的鑒定和篩選。
(4)大腸桿菌的質(zhì)粒是基因工程中常用的載體。
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