（浙江選考）2021版新高考生物一輪復習 專題11 生物技術實踐 第31講 微生物的利用教學案 新人教版

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1、第31講　微生物的利用 知識內(nèi)容 考試要求 知識內(nèi)容 考試要求 1．大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 實驗與探究能力 2.分離以尿素為氮源的微生物 實驗與探究能力 　細菌的培養(yǎng)與分離 1．微生物：結構簡單、形體微小的單細胞、多細胞或沒有細胞結構的低等生物，如酵母、細菌、藍細菌和病毒等。絕大多數(shù)微生物與傳染病無關，90%以上的微生物對人類有利。 2．培養(yǎng)基 含義 微生物生存的環(huán)境和營養(yǎng)物質 成分 ①水、無機鹽、碳源和氮源，還需滿足不同微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質以及氧氣的要求 ②LB培養(yǎng)基：蛋白胨、酵母提取物、氯化鈉、水、瓊脂(固體培養(yǎng)基) LB 培養(yǎng) 基的 作

2、用 ①蛋白胨、酵母提取物：為細菌生長提供碳源和氮源； ②氯化鈉：維持一定的滲透壓； ③瓊脂：凝固劑，不易分解，一般不作為營養(yǎng)物質。其在96 ℃時融化成液體，冷卻到45 ℃以下即重新凝固 種類 ①按物理狀態(tài)分，包括固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基； ②按特殊用途分，包括基礎培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基； ③按培養(yǎng)不同微生物分，包括細菌培養(yǎng)基(pH呈中性偏堿，添加有機物如蛋白胨、酵母提取物)、霉菌培養(yǎng)基(pH呈中性偏酸，添加無機物或者添加蔗糖的豆芽汁) 3.細菌的培養(yǎng)和分離 細菌培養(yǎng) 細菌分離 劃線分離法 涂布分離法 細菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。

3、在培養(yǎng)細菌時，一般用接種環(huán)將已有細菌的培養(yǎng)物轉移到新的培養(yǎng)基中。在液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)8 h，每毫升培養(yǎng)基中有幾億個細菌。接種于固體培養(yǎng)基10～20 h后，一個細菌細胞會繁殖成許多個細菌細胞，聚集在一起，形成菌落 用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。由于劃線過程中，接種環(huán)上的菌液逐漸減少，因此劃線最后部分的細菌間距離加大。培養(yǎng)一段時間后，每一個細菌細胞產(chǎn)生一個菌落。再將每個菌落分別接種到試管斜面上，從而除去雜菌 先將培養(yǎng)的菌液稀釋，通常稀釋105～107倍。取0.1 mL稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進行培養(yǎng)，得到相互分開的菌落。通常以每個

4、培養(yǎng)皿有20個以內(nèi)的單菌落最為合適 方法簡單 單菌落更易分開，但操作復雜些 單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一 4.滅菌操作 項目 灼燒滅菌 高壓蒸汽滅菌 過濾滅菌 適用 材料 或用具 接種環(huán)、接種針或其他金屬用具 培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、試管等玻璃器具等 尿素等加熱會分解的物質 續(xù)　表 項目 灼燒滅菌 高壓蒸汽滅菌 過濾滅菌 滅菌 條件 及時間 在酒精燈火焰上充分灼燒，直至燒紅，冷卻后備用 LB培養(yǎng)基：121℃(1 kg/cm2壓力)、15 min 含葡萄糖的培養(yǎng)基：90℃以上(500__g/cm2壓力

5、)、30 min 玻璃器皿：高壓蒸汽滅菌后放入60～80__℃的烘箱中烘干 G6玻璃砂漏斗 過濾 5.超凈工作臺 提前50 min左右開啟超凈工作臺，先打開紫外燈滅菌30 min，然后關閉紫外燈開啟過濾風，運行20 min，之后超凈臺可以開始使用。 (1)培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，有時還需要加入一些特殊的物質(√) (2)倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上(×) (3)消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對細胞的傷害(√) (4)為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落(×) 1．選擇培養(yǎng)基的制作方法

6、(1)在培養(yǎng)基全部營養(yǎng)成分具備的前提下，加入物質：依據(jù)某些微生物對某些物質的抗性，在培養(yǎng)基中加入該物質，以抑制不需要的微生物的生長，促進所需要的微生物生長，如培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽時可抑制多種細菌的生長，但不影響金黃色葡萄球菌的生長，從而可將該菌分離出來；而在培養(yǎng)基中加入青霉素時可抑制細菌、放線菌的生長，從而分離得到酵母菌和霉菌。 (2)通過改變培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分達到分離微生物的目的：培養(yǎng)基中缺乏氮源時，可分離自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而無法生存；培養(yǎng)基中若缺乏有機碳源則異養(yǎng)微生物無法生存，而自養(yǎng)微生物可利用空氣中的CO2制造有機物生存。 (3)利用培養(yǎng)基的特定化學成分分離特

7、定微生物：如當石油是唯一碳源時，可抑制不能利用石油的微生物生長，使能夠利用石油的微生物生長，從而分離出能消除石油污染的微生物。 (4)通過某些特殊環(huán)境分離微生物：如在高鹽環(huán)境中可分離耐鹽菌，其他菌在鹽濃度高時易失水而不能生存；在高溫環(huán)境中可分離得到耐高溫的微生物，其他微生物在高溫環(huán)境中因酶失活而無法生存。 2．消毒與滅菌的辨析 項目 條件 結果 常用方法 應用范圍 消毒 較為溫和的物理或化學方法 僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分對人體有害的微生物 煮沸消毒法 日常用品 巴氏消毒法 不耐高溫的液體 化學藥劑 消毒法 用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源 滅菌 強烈的理化

8、因素 殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼燒滅菌法 接種工具 干熱滅菌法 玻璃器皿、金屬工具 高壓蒸汽滅菌法 培養(yǎng)基及容器 3．細菌的兩種分離方法的比較 項目 劃線分離法 涂布分離法 工具 接種環(huán) 玻璃刮刀 原理 通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細菌細胞繁殖而來的肉眼可見的細胞群體，即菌落 將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細菌細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成

9、單個的菌落 特點 方法簡單，但不適宜計數(shù) 單菌落更易分開，但操作復雜 目的 使培養(yǎng)基上形成單個細菌細胞繁殖而來的子細胞群體——菌落 [題組沖關] 1．做“微生物的分離與培養(yǎng)”實驗時，下列敘述正確的是(　　) A．高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋 B．倒平板時，應將打開的皿蓋放在一邊，以免培養(yǎng)基濺到皿蓋上 C．為了防止污染，接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落 D．用記號筆標記培養(yǎng)皿中的菌落時，應標記在皿底上 解析：選D。高壓滅菌結束后應自然冷卻，等滅菌鍋壓力與大氣壓相同時打開鍋蓋，A項錯誤；倒平板時，不能將皿蓋放在一邊，B項錯誤；接種環(huán)經(jīng)火焰

10、滅菌應冷卻后挑取菌落，C項錯誤；標記培養(yǎng)皿中的菌落時，記號筆應標記在皿底上，D項正確。 2．(2020·寧波模擬)為了調查某河流的水質狀況，某研究小組測定了該河流水樣中的細菌含量，并進行了細菌分離等工作?；卮鹣铝袉栴}： (1)該小組采用涂布分離法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是____________________。 (2)該小組采用劃線分離法分離水樣中的細菌。操作時，接種環(huán)通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是___________________________

11、_______。 (3)示意圖A和B中，________表示的是用涂布分離法接種培養(yǎng)后得到的結果。 (4)該小組將得到的菌株接種到液體培養(yǎng)基中并混勻，一部分進行靜置培養(yǎng)，另一部分進行振蕩培養(yǎng)。結果發(fā)現(xiàn)：振蕩培養(yǎng)的細菌比靜置培養(yǎng)的細菌生長速度快。分析其原因是：振蕩培養(yǎng)能提高培養(yǎng)液中____________的含量，同時可使菌體與培養(yǎng)液充分接觸，提高____________的利用率。 解析：(1)在涂布接種前，隨機選取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)一段時間，目的是檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，不能留有雜菌。(2)用劃線分離法分離水樣中的細菌，操作時，接種環(huán)通過灼燒滅菌，在第二次及以后的劃線時，

12、從上一次劃線末端開始劃線，目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落。(3)涂布分離法接種培養(yǎng)后得到的結果應為圖B。(4)振蕩可以使細菌分散，更有利于細菌利用培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質，并且可以使培養(yǎng)液中的溶解氧增多。 答案：(1)檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格 (2)灼燒　將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 (3)B　(4)溶解氧　營養(yǎng)物質 　大腸桿菌的培養(yǎng)和分離 1．大腸桿菌 (1)特性：大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧(代謝類型)的腸道桿菌，在腸道中一般對人無害，但若進入人的泌尿系統(tǒng)，就會對人體產(chǎn)生危害。 (2)用途：是基因工程技術中被廣泛采用的工具。 2．大腸桿菌的培養(yǎng)和分離實

13、驗 (1)實驗內(nèi)容：將大腸桿菌擴大培養(yǎng)和劃線分離，即用LB液體培養(yǎng)基擴大培養(yǎng)大腸桿菌，培養(yǎng)后再在LB固體平面培養(yǎng)基上劃線進行分離，隨后培養(yǎng)基上就會形成一個個單獨的菌落。 (2)實驗步驟 培養(yǎng)基滅菌 ↓ 倒平板 ↓ 接種 ↓ 劃線分離 ↓ 培養(yǎng)觀察 50 mL LB液體培養(yǎng)基和50 mL LB固體培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿高壓蒸汽滅菌 將培養(yǎng)基分別倒至4個滅菌后的培養(yǎng)皿中，水平放置，使之形成平面 在裝有液體培養(yǎng)基的三角瓶中接種大腸桿菌，培養(yǎng)12 h 用接種環(huán)在接種有大腸桿菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固體培養(yǎng)基的平板上連續(xù)劃線，蓋好培養(yǎng)皿 培養(yǎng)皿倒置(蓋在下面)，放在37 ℃

14、恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12～24 h后，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個菌落 (3)大腸桿菌分離的用途：單菌落的分離是消除污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達量菌株的最簡便方法之一。 (1)大腸桿菌是革蘭氏陽性菌，既能進行需氧呼吸又能進行厭氧呼吸(×) (2)利用LB液體培養(yǎng)基和LB固體培養(yǎng)基分別進行分離培養(yǎng)和擴大培養(yǎng)微生物(×) (3)單菌落的分離是消除雜菌污染的通用方法，也是篩選高表達菌株的簡便方法(√) (4)常用的微生物分離方法有劃線分離法和涂布分離法(√) (5)劃線分離法的原理是利用接種環(huán)挑去一個菌種，接種到固體培養(yǎng)基上，經(jīng)培養(yǎng)后得到單菌落(×) (6)劃線分離操

15、作簡便，但涂布分離更容易得到單菌落(√) (7)高壓蒸汽滅菌法是進行各種無菌操作都需要進行的滅菌方法(×) (8)劃線分離時，接種環(huán)只蘸取一次菌液，每次劃線前均需灼燒接種環(huán)(√) (9)進行菌種擴大培養(yǎng)和分離培養(yǎng)需要將培養(yǎng)基倒置放在恒溫培養(yǎng)箱中(×) 1．菌液劃線分離的方法 2．劃線分離操作中的相關問題 在劃線操作的第一步以及之后每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)，在劃線操作結束后，還需要灼燒接種環(huán)。 項目 第一次灼燒 之后每次劃 線前灼燒 劃線結束后灼燒 目的 避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物 殺死上次劃線結束后殘留在接種環(huán)上的菌種 殺死接種環(huán)上殘留的菌種

16、，避免其污染環(huán)境或感染操作者 注意 事項 ①在灼燒接種環(huán)后，要待其冷卻后才能伸入菌液，以免接種環(huán)溫度太高殺死菌種； ②第二次及以后的劃線要從上一次劃線的末端開始； ③劃線時用力大小要適當，防止用力過大劃破培養(yǎng)基 3.進行恒溫培養(yǎng)時，要將培養(yǎng)皿倒置 如果正放培養(yǎng)皿，則皿蓋上形成的水滴會落入培養(yǎng)基表面并且擴散開。如果培養(yǎng)皿中已形成菌落，則菌落中的細菌會隨水擴散，菌落間相互影響，很難再分成單菌落，達不到分離的目的。因此恒溫培養(yǎng)時，培養(yǎng)皿必須倒置。 4．保存菌種 用接種環(huán)取出單個菌落，用劃線分離法接種在斜面培養(yǎng)基上，37 ℃ 培養(yǎng)24 h后，置于4 ℃冰箱中保存。 [題組沖關]

17、1．某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是(　　) A．培養(yǎng)基分裝到培養(yǎng)皿后進行滅菌 B．轉換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進行劃線 C．接種后的培養(yǎng)皿須放在光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng) D．培養(yǎng)過程中每隔一周觀察一次 解析：選B。培養(yǎng)基滅菌后再分裝到培養(yǎng)皿中；轉換劃線角度后要灼燒接種環(huán)，冷卻后再從上次劃線的末端開始進行劃線；接種后的培養(yǎng)皿需放在恒溫箱中進行培養(yǎng)，一般每隔12 h或24 h觀察一次。 2．(2020·浙江溫嶺選考模擬)下圖為“大腸桿菌的培養(yǎng)和分離”實驗的基本流程，請回答下列問題： →→→→ (1)A過程配制培養(yǎng)基時除了加入特定的營養(yǎng)物質以外，還要加入一定量

18、的氯化鈉，以維持________。對培養(yǎng)基酸堿度的調節(jié)，應該在B過程的________(填“前面”或“后面”)。 (2)D過程與C過程相比，培養(yǎng)基中另外需添加的物質是________。E過程所需的溫度是________。 (3)與微生物培養(yǎng)不同，植物組織培養(yǎng)時，先配制MS培養(yǎng)基，再加入一定比例的________。 (4)植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是________。 A．接種環(huán)和鑷子　　　　　　 B．三角瓶和廣口瓶 C．發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基 D．用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽 解析：(1)氯化鈉的作用是維持培養(yǎng)基的滲透壓。調節(jié)好酸堿度后才能進行滅

19、菌，若滅菌后再調節(jié)酸堿度，會產(chǎn)生新的污染。(2)在液體培養(yǎng)基的基礎上加入一定量的瓊脂可形成固體培養(yǎng)基。菌種應置于4 ℃冰箱中保存。(3)植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基中需加入一定比例的植物激素。(4)高壓蒸汽滅菌常用于培養(yǎng)基、培養(yǎng)器材等的滅菌，而用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽只能進行消毒，不能進行滅菌操作，否則會導致細胞死亡。 答案：(1)滲透壓　前面 (2)瓊脂　4 ℃ (3)植物激素 (4)D 　分離以尿素為氮源的微生物 1．實驗原理：利用尿素的細菌含有脲酶，通過降解尿素作為其生長的氮源。其反應式為(NH2)2C===O＋H2O2NH3＋CO2，生成的NH3使培養(yǎng)基的pH由原來的中性變?yōu)閴A性，

20、于是培養(yǎng)基中的酚紅由紅黃色變成紅色。 2．實驗步驟 3．預測本實驗的結果：LB全營養(yǎng)固體培養(yǎng)基上的菌落多而雜；尿素固體培養(yǎng)基上的菌落少而純；一定時間內(nèi)，菌落周圍出現(xiàn)紅色區(qū)域。用濃度為10－4和10－5土壤稀釋液接種，更容易形成單菌落的是10－5土壤稀釋液。 (1)尿素培養(yǎng)基配制時各種成分均需要過濾滅菌(×) (2)脲酶分解尿素為氨氣，酚紅指示劑遇氨氣(堿性)變紅色(√) (3)涂布分離后不能倒置培養(yǎng)皿，防止涂布的菌液流出(×) (4)分離以尿素為唯一氮源的微生物時，尿素培養(yǎng)基中加入瓊脂作為凝固劑(×) (5)制備土壤懸液時，在無菌條件下，將土樣與無菌水混合搖勻后盡量吸取土

21、樣，以增加微生物的數(shù)量(×) (6)涂布分離法分離細菌，一般采用移液器吸取0.1 mL樣液加到含有相應培養(yǎng)基中(√) (7)涂布分離法能夠計數(shù)菌落數(shù)，采用該方法統(tǒng)計出的細菌數(shù)通常偏少(√) (8)尿素培養(yǎng)基上的微生物數(shù)量比全營養(yǎng)培養(yǎng)基上微生物數(shù)量多(×) 1．培養(yǎng)基中觀測指標的分析 (1)培養(yǎng)基中的酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化(變紅)，標志著存在脲酶水解尿素的作用，從而證明這一菌株能以尿素為氮源。紅色環(huán)狀區(qū)域的大小代表脲酶活性的強弱和含量的多少。紅色區(qū)域越大，表明菌株利用尿素的能力越強。 (2)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)比較，尿素培養(yǎng)基上只有少數(shù)菌落，這一現(xiàn)象表明能利用尿素的細菌在土壤

22、菌群中只占極少部分。 2．微生物篩選過程中必要的兩種對照培養(yǎng)基及其作用 對照組 作用 現(xiàn)象 結論 未接種培養(yǎng)基 有無雜菌污染的判斷 未接種的培養(yǎng)皿中無菌落生長 未被雜菌污染 接種的LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基 選擇培養(yǎng)基篩選作用的確認 LB全營養(yǎng)培養(yǎng)基上的菌落數(shù)大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目 選擇培養(yǎng)基具有篩選作用 3.樣品稀釋的原因和標準 (1)稀釋原因：樣品的稀釋度直接影響平板上生長的菌落數(shù)。在適當?shù)南♂尪认?，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。因此，恰當?shù)南♂尪仁浅晒Φ亟y(tǒng)計菌落數(shù)的關鍵。 (2)稀釋標準：選用一定范圍的樣品稀釋液進行培養(yǎng)，為了保證結果準確，

23、一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板計數(shù)。 [題組沖關] 1．金黃色葡萄球菌有很強的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下列實驗結束后的做法錯誤的是(　　) A．對接種環(huán)進行灼燒處理 B．帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉 C．帶菌培養(yǎng)基必須經(jīng)加熱后才能倒掉 D．接種后雙手必須用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭 解析：選C。金黃色葡萄球菌有很強的致病力，所以在操作時一定要做到安全防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對接種環(huán)進行灼燒也可以殺滅細菌，防止污染環(huán)境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培養(yǎng)基中的金黃色葡萄球菌；如果只對帶菌培養(yǎng)基進行

24、加熱，殺不盡其中的致病菌，因為此菌的耐高溫能力很強，會污染環(huán)境。 2．(2020·浙江臺州高三模擬)下圖是“分離以尿素為氮源的微生物”實驗的基本流程，請回答下列問題： (1)該實驗培養(yǎng)基不能含有____________。 A．尿素 　　　　　　　　　 B．氯化鈉 C．葡萄糖 D．瓊脂 (2)尿素溶液可用____________使之無菌。若要檢查B過程滅菌是否徹底，可以采用的方法是________________________________________________________________________ ____________

25、____________________________________________________________。 (3)圖中步驟C為____________。相對于劃線分離法，過程D涂布分離法的優(yōu)點是____________。 (4)如果菌落周圍出現(xiàn)____________色環(huán)帶，說明該菌落能分泌脲酶。 答案：(1)D　(2)G6玻璃砂漏斗過濾　將空白培養(yǎng)基放在適宜溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察有無菌落出現(xiàn)　(3)倒平板　單菌落更易分開　(4)紅 1．下列關于微生物的培養(yǎng)和分離的敘述，錯誤的是(　　) A．通過消毒不能殺死物體內(nèi)所有的微生物 B．利用劃線分離法可以統(tǒng)計樣品中

26、活菌的數(shù)目 C．劃線分離法和涂布分離法常用于微生物的接種 D．微生物所用的培養(yǎng)基成分和植物組織培養(yǎng)用的培養(yǎng)基成分不同 解析：選B。消毒是指殺死病原微生物，但不一定能殺死細菌芽孢的方法。統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目要用涂布分離法，劃線分離法辦不到。微生物接種最常見的方法是劃線分離法和涂布分離法。不同的培養(yǎng)對象，所需的營養(yǎng)成分不同，培養(yǎng)基中加入的物質也就不同。 2．下圖是利用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)和純化X細菌的部分操作步驟。有關敘述正確的是(　　) A．步驟①中，倒好平板后應立即將其倒置，防止水蒸氣落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)物 B．步驟②接種環(huán)和試管口應先在火焰上灼燒，接種環(huán)冷卻后再放入試管中蘸

27、取菌液 C．步驟③沿多個方向劃線，使接種物逐漸稀釋，培養(yǎng)后可根據(jù)出現(xiàn)的單個菌落計數(shù) D．步驟④是將培養(yǎng)皿放在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，一段時間后所得到的都是X細菌的菌落 答案：B 3．(2016·浙江10月選考)請回答從土壤中分離產(chǎn)脲酶細菌和脲酶固定化實驗的有關問題： (1)LB固體培養(yǎng)基：取適量的蛋白胨、酵母提取物、NaCl，加入一定量的蒸餾水溶解，再加________，滅菌備用。 (2)尿素固體培養(yǎng)基：先將適宜濃度的尿素溶液用________滅菌過的G6玻璃砂漏斗過濾，因為G6玻璃砂漏斗________________________，故用于過濾除菌。然后將尿素溶液加入已經(jīng)滅菌的含

28、有酚紅的培養(yǎng)基中，備用。 (3)取適量含產(chǎn)脲酶細菌的10－4、10－5兩種土壤稀釋液，分別涂布接種到LB固體培養(yǎng)基和尿素固體培養(yǎng)基上，培養(yǎng)48 h，推測固體培養(yǎng)基上生長的菌落數(shù)最少的是______(A.10－5稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　B．10－5稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基　C．10－4稀釋液＋尿素固體培養(yǎng)基　 D．10－4稀釋液＋LB固體培養(yǎng)基)。在尿素固體培養(yǎng)基上產(chǎn)脲酶細菌菌落周圍出現(xiàn)________，其原因是細菌產(chǎn)生的脲酶催化尿素分解產(chǎn)生________所致。 (4)制備固定化脲酶時，用石英砂吸附脲酶、裝柱。再用蒸餾水洗滌固定化酶柱，其作用是________。 答案：(1)瓊脂糖 (

29、2)高壓蒸汽　孔徑小，細菌不能濾過 (3)A　紅色環(huán)　氨(或NH3) (4)除去游離的脲酶 4．請結合圖示，回答下列有關大腸桿菌分離與純化的問題： (1)稀釋 用1 mL無菌吸管吸取1 mL大腸桿菌培養(yǎng)液，加入盛有9 mL________的大試管中，充分混勻，稀釋________倍；按照同樣的方法依次進行稀釋制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。 (2)劃線或涂布 ①劃線分離法 a．操作：在________旁，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培養(yǎng)液在平板上劃線。 b．劃線方法：________劃線和______

30、__劃線。 c．平行劃線時，第一次劃線及每次劃線之間都要灼燒接種環(huán)，劃線結束后也要灼燒接種環(huán)，目的分別是什么？ ②涂布分離法 a．操作：取0.1 mL稀釋度不同的菌液，加在培養(yǎng)皿的固體培養(yǎng)基上，用玻璃刮刀涂布在培養(yǎng)基平面上，然后進行培養(yǎng)。 b．圖示： (3)培養(yǎng)：將接種的平板________于培養(yǎng)箱或溫室中37 ℃培養(yǎng)12～24 h。 答案：(1)無菌水　10 (2)a.酒精燈火焰　b．平行　連續(xù) c. 第一次灼燒 每次劃線之前灼燒 劃線結束時灼燒 目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端，使

31、每次劃線后菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者 (3)倒置 1．(2020·杭州模擬)如表為某微生物培養(yǎng)基的配方，請回答下列問題： 成分 含量 成分 含量 NaNO3 3 g FeSO4 0.01 g K2HPO4 1 g C6H12O6 30 g 瓊脂 15 g H2O 1 000 mL MgSO4·7H2O 0.5 g 青霉素 0.1萬單位 (1)依物理性質，該培養(yǎng)基屬于__________培養(yǎng)基。依用途劃分，則屬于__________培養(yǎng)基。 (2)根據(jù)培養(yǎng)基原料，所培養(yǎng)微生物的同化作用類型是______

32、__________。 (3)該培養(yǎng)基中的碳源是__________。不論何種培養(yǎng)基，在各成分都融化后分裝前，要進行的是__________。 (4)若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，應除去的物質是________________，應加入的物質是__________。 (5)細菌種群進化過程中，起主要作用的變異是______。(填編號) A．環(huán)境條件　　　　　　 B．基因重組 C．基因突變 D．染色體畸變 解析：(1)該培養(yǎng)基中含有凝固劑瓊脂，屬于固體培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基含有抗生素(青霉素)，屬于選擇培養(yǎng)基。(2)該培養(yǎng)基含有有機碳源——C6H12O6，可見所培養(yǎng)的微生物是異養(yǎng)型生物。

33、(3)不論何種培養(yǎng)基，在各成分都融化后分裝前，要先進行pH調整。(4)若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)纖維素分解菌，應除去青霉素和C6H12O6，加入纖維素粉。(5)細菌是原核生物，沒有染色體，不會發(fā)生染色體畸變；細菌不能進行有性生殖，不會發(fā)生基因重組，所以細菌可遺傳的變異只有基因突變。 答案：(1)固體　選擇　(2)異養(yǎng)型　(3)C6H12O6 調整pH　(4)青霉素和C6H12O6　纖維素粉　(5)C 2．請回答下列有關微生物培養(yǎng)基的問題： (1)微生物的培養(yǎng)都需要培養(yǎng)基，一般培養(yǎng)基都含有的成分有______________________；配制固體培養(yǎng)基還需要加入凝固劑_____________

34、___。 (2)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的一般流程包括： →→→A→B 上述流程中A代表__________，實驗室中這個步驟常用的方法有__________________；流程中B代表________________，該步驟進行的適宜溫度是__________°C左右。 (3)鑒定分解尿素的細菌的方法是向以______________為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入__________指示劑，培養(yǎng)某種細菌，如果pH升高，指示劑將變紅，說明該種細菌能分解尿素。 (4)與全營養(yǎng)培養(yǎng)基中的菌落相比，選擇培養(yǎng)基中菌落數(shù)(　　) A．多　　　　　　　　 B．少 C．相等 D．幾乎為零

35、解析：(1)一般培養(yǎng)基中都應含有水、無機鹽、碳源和氮源四種成分。(2)制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的流程包括：計算→稱量→融化→滅菌→倒平板；灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌是實驗室中常用的滅菌方法。(4)選擇培養(yǎng)基上只能生長特定的微生物，因此該培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)目比全營養(yǎng)培養(yǎng)基上長出的菌落數(shù)少。 答案：(1)水、碳源、氮源和無機鹽　瓊脂 (2)滅菌　灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌　倒平板　60　(3)尿素　酚紅　(4)B 3．(2020·浙江五校高三聯(lián)考)某村莊有一條小溪，近幾年由于上游幾家乳膠廠不斷向其中排放廢水，小溪變得不再清澈。某同學想測定該溪水中的細菌含量情況?；卮鹣铝袉栴}：

36、 (1)先根據(jù)所學知識制備LB培養(yǎng)基。制備該培養(yǎng)基的步驟是：計算→稱量→融化→滅菌→倒平板。下列關于制備LB培養(yǎng)基的敘述，錯誤的是________。 A．培養(yǎng)基應先調pH再進行滅菌 B．培養(yǎng)基應先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿中 C．融化瓊脂時不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦 D．滅菌時一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121 ℃，500 g/cm2 壓力下滅菌15分鐘 (2)該同學利用上述制備的培養(yǎng)基來檢測水樣中的細菌數(shù)量，他所選擇的分離方法應是____________；該同學在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是____________________________。接種在超凈

37、工作臺上進行，實驗前一段時間需打開工作臺上的紫外燈和過濾風，實驗中需關閉的是____________(A.酒精燈　B．照明燈　C．紫外燈　D．過濾風)。 (3)值得注意的是，他所選擇的這種方法統(tǒng)計的結果往往比實際細菌的數(shù)目要低，這是因為①__________________________；②_________________________________________ ________________________________________________________________________。 (不考慮實驗操作原因引起的細菌數(shù)目的變化) (4)該同學欲將所分離

38、出的某種細菌臨時保藏，應接種到試管的____________培養(yǎng)基上，等菌落長成后，放入冰箱低溫保藏。 解析：培養(yǎng)基應先調pH再進行滅菌，A正確；培養(yǎng)基應先滅菌再分裝到培養(yǎng)皿中，B正確；融化瓊脂時不能使培養(yǎng)基溢出或燒焦，C正確；滅菌時一般用高壓蒸汽滅菌鍋在121 ℃，1000 g/cm2壓力下滅菌15分鐘，D錯誤。 答案：(1)D　(2)(稀釋)涂布分離法　檢查平板滅菌是否徹底　C (3)①該方法只能統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，死菌無法統(tǒng)計 ?、诋攦蓚€或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落　(4)斜面 4．(2020·杭州模擬)從土壤中分離以尿素為氮源的細菌，實驗過程如圖所示，

39、請回答下列問題： ―→―→―→―→ (1)欲從土壤中分離出能分解尿素的細菌，將土壤用________進行一系列的梯度稀釋，同一濃度的土壤稀釋液至少涂布________個平板。 (2)在培養(yǎng)基中加入尿素(唯一氮源)，以分離出能分解尿素的細菌，這種加入尿素的培養(yǎng)基在功能上屬于________。 A．選擇培養(yǎng)基　　　 B．固體培養(yǎng)基 C．液體培養(yǎng)基　　　 D．半固體培養(yǎng)基 (3)接種后的培養(yǎng)皿________放于37 ℃的恒溫箱中培養(yǎng)。在能利用尿素的細菌菌落周圍，有紅色環(huán)帶出現(xiàn)的原因是__________________________________________________

40、____ ________________________________________________________________________。 (4)為了提高尿素肥效，可以將分解尿素的酶和尿素混合，制成“加酶尿素”。水培某植物時，為了提高“加酶尿素”中酶的利用率，可采用________技術。 解析：(1)稀釋時，為減少雜菌干擾，需要用無菌水稀釋。為排除偶然因素，每個稀釋度需要涂布3個平板。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基在功能上屬于選擇培養(yǎng)基。(3)培養(yǎng)時，為防止培養(yǎng)皿蓋上的冷凝水滴落沖散細菌，需要將培養(yǎng)皿倒置。能利用尿素的細菌可分泌脲酶，脲酶能將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨

41、使指示劑酚紅呈紅色。(4)固定化酶技術使酶可以回收，從而提高了酶的利用率。 答案：(1)無菌水　3　(2)A　(3)倒置　能利用尿素的細菌可分泌脲酶，脲酶能將培養(yǎng)基中的尿素分解，產(chǎn)生的氨使指示劑呈紅色　(4)固定化酶 5．已知一種有機物X(僅含有C、H兩種元素)不易降解，會造成環(huán)境污染。某小組用三種培養(yǎng)基篩選土壤中能高效降解X的細菌(目標菌)。 Ⅰ號培養(yǎng)基：在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中加入X(5 g/L)。 Ⅱ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機鹽(適量)，X(15 g/L)。 Ⅲ號培養(yǎng)基：氯化鈉(5 g/L)，硝酸銨(3 g/L)，其他無機鹽(適量)，X(45

42、g/L)。 回答下列問題： (1)在Ⅰ號培養(yǎng)基中，為微生物提供氮源的是________。Ⅱ、Ⅲ號培養(yǎng)基中為微生物提供碳源的有機物是________。 (2)若將土壤懸浮液接種在Ⅱ號培養(yǎng)基中，培養(yǎng)一段時間后，不能降解X的細菌比例會________，其原因是__________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (3)Ⅱ號培養(yǎng)基加入瓊脂后可以制成固體培養(yǎng)基，若要以該固體培養(yǎng)基培養(yǎng)目

43、標菌并對菌落進行計數(shù)，接種時，應采用的方法是________________________________________。 (4)假設從Ⅲ號培養(yǎng)基中得到了能高效降解X的細菌，且該菌能將X代謝為丙酮酸，則在有氧條件下，丙酮酸可為該菌的生長提供____________和______________________。 解析：(1)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，牛肉膏、蛋白胨為微生物提供了氮源，而Ⅱ號、Ⅲ號培養(yǎng)基中除X外的其他物質均不含碳，所以能為微生物提供碳源的有機物是X。(2)因為Ⅱ號培養(yǎng)基中碳源只有X，相當于選擇培養(yǎng)基，只有能降解X的細菌才能增殖，而不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖。(3)要對

44、菌落進行計數(shù)，應采用稀釋涂布平板法進行接種。(4)在有氧條件下，丙酮酸參與細菌的需氧呼吸，可以為該菌的生長提供能量和合成其他物質的原料。 答案：(1)牛肉膏、蛋白胨　X (2)下降　不能降解X的細菌因缺乏碳源不能增殖，而能降解X的細菌能夠增殖 (3)稀釋涂布平板法 (4)能量　合成其他物質的原料 6．(2020·寧波一模)某化工廠的污水池中含有一種有害的難以降解的有機化合物A。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功篩選到能高效降解化合物A的細菌(目的菌)。實驗的主要步驟如圖所示。請分析回答下列問題： (1)培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是__________

45、__________________，這種培養(yǎng)基屬于______培養(yǎng)基。 (2)“目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的________。實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌”的代謝類型是________。 (3)在上述實驗操作過程中，獲得純凈“目的菌”的關鍵是______________________。 (4)轉為固體培養(yǎng)基時，常采用劃線分離的方法進行接種，此過程中所用的接種工具是__________，操作時采用________滅菌的方法。 解析：(1)在選擇培養(yǎng)基中加入特定物質，可以篩選出特定的細菌。(2)根據(jù)題目所給的培養(yǎng)基配方，“目的菌”生長所需的氮源和碳源只能來自培養(yǎng)基

46、中的化合物A。異養(yǎng)需氧型細菌在培養(yǎng)時需要振蕩。(3)獲得純凈特定“目的菌”的關鍵是防止外來雜菌入侵。(4)用劃線分離的方法進行接種，接種工具是接種環(huán)，操作時一般采用灼燒滅菌。 答案：(1)篩選目的菌　選擇　(2)化合物A　異養(yǎng)需氧型　(3)防止外來雜菌入侵　(4)接種環(huán)　灼燒 7．急性腸胃炎、手足口病分別是由細菌和病毒通過消化道進入人體導致的，因此檢驗飲用水的細菌含量和病毒含量是有效監(jiān)控疾病發(fā)生的必要措施。請回答下列與檢驗飲用水有關的問題： (1)在如圖所示的四種菌落分布圖中，不可能是用涂布分離法得到的是________。 (2)圖中用該方法得到的菌落分布圖中，最符合計數(shù)要求的是圖

47、中的________。 (3)用該方法統(tǒng)計樣本菌落數(shù)時是否需要設置對照組？__________。為什么？________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。 (4)分別取0.1 mL、已稀釋103倍的水樣分別涂布到3個瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進行培養(yǎng)，培養(yǎng)基記錄到大腸桿菌的菌落平均數(shù)為50。則每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為________。 解析：(1)據(jù)圖可

48、知，D圖所示的菌落分布為劃線分離法接種獲得的。 (2)利用涂布分離法進行微生物計數(shù)時，需要得到30～300個菌落的平板進行計數(shù)。 (3)為了增強實驗的說服力，通常要設置對照實驗，本實驗可設置空白對照排除培養(yǎng)基污染產(chǎn)生的影響。 (4)根據(jù)公式計算每升原水樣中大腸桿菌數(shù)為50×103÷0.1×1 000＝5.0×108。 答案：(1)D　(2)C (3)需要　培養(yǎng)基制備不合格會導致菌落數(shù)增加 (4)5.0×108 8．(2020·浙江教育綠色評價聯(lián)盟高三考試)已知某細菌的兩種突變類型細菌Ⅰ和細菌Ⅱ的營養(yǎng)條件和菌落特征都相同，但細菌Ⅰ能分解有機物A而不能分解有機物B，細菌Ⅱ能分解有機物

49、B而不能分解有機物A?，F(xiàn)有這兩種類型細菌的混合液樣品，要將其分離，有人設計了一種方案，部分操作步驟如下圖。請回答下列問題： (1)步驟一使用的是____________培養(yǎng)基，其中含有細菌生長所需的水、無機鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質，此外還必須加入____________，以利于對不同菌種進行分離操作。 (2)步驟一采用____________法接種，此接種法可使接種細菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可形成單個、獨立的____________，最終可能得到純種的細菌；要進行上述接種操作，必須在____________及酒精燈火焰附近進行，以避免雜菌污染。 (3)步驟三中，若對其中某瓶培養(yǎng)液

50、中A、B兩種有機物含量進行測定，當培養(yǎng)液中檢測出如下的實驗結果時，能說明培養(yǎng)液只有細菌Ⅰ的是________。 A．化合物A與B含量都明顯下降 B．化合物A含量明顯下降，B含量基本不變 C．化合物A含量基本不變，B含量明顯下降 D．化合物A、B含量都基本不變 解析：(1)步驟一使用的是LB固體培養(yǎng)基，其中含有細菌生長所需的水、無機鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質。由于需要配制固體培養(yǎng)基，所以還必須加入凝固劑——瓊脂，以利于對不同菌種進行分離操作。(2)步驟一采用劃線分離法接種，此接種法可使接種細菌逐漸稀釋，經(jīng)適宜條件培養(yǎng)，可形成單個、獨立的菌落，最終可能得到純種的細菌；為了避免雜菌污染，必須在超凈臺及酒精燈火焰附近進行。(3)當培養(yǎng)液中檢測出化合物A含量明顯下降，B含量基本不變，才能說明培養(yǎng)液只有細菌Ⅰ，因為細菌Ⅰ只能分解利用有機物A不能利用有機物B。 答案：(1)LB固體　瓊脂　(2)劃線分離　(單)菌落 超凈臺　(3)B 18