《實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定（11頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定 實(shí)驗(yàn)五、植物組織中過(guò)氧化氫酶活力測(cè)定高錳酸鉀滴定法高錳酸鉀滴定法實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊弧?shí)驗(yàn)?zāi)康膌1.掌握酶活力測(cè)定的方法l2.了解過(guò)氧化氫酶在生物體中的作用原理實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定二、實(shí)驗(yàn)原理二、實(shí)驗(yàn)原理l過(guò)氧化氫酶（CAT）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過(guò)氧化氫分解為水和分子氧，在此過(guò)程中起傳遞電子的作用，過(guò)氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。lR(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3+OH)lR(Fe3+OH)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O2實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定l據(jù)此，可根據(jù)據(jù)
2、此，可根據(jù)H2O2的消耗量或的消耗量或O2的生成量測(cè)的生成量測(cè)定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量定該酶活力大小。在反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量（反應(yīng)過(guò)量）的（反應(yīng)過(guò)量）的H2O2溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，溶液，經(jīng)酶促反應(yīng)后，用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多用標(biāo)準(zhǔn)高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的余的H2O2，即可求出消耗的，即可求出消耗的H2O2的量。的量。l5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4 =5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定三、材料、試劑與器具三、材料、試劑與器具 1.材料：材料：小麥葉片2.試劑試劑（1）10% H2SO4；（2）
3、0.2mol/L磷酸緩沖液pH7.8；（3）0.1mol/L高錳酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液：稱取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液標(biāo)定；（4）0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大約等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標(biāo)準(zhǔn)0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性條件下）進(jìn)行標(biāo)定；（5）0.1mol/L草酸：稱取優(yōu)級(jí)純H2C2O4 2H2O 12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1L。實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定3.器具器具（1）恒溫水?。唬?）研缽；三角瓶50ml4；酸式滴定管（10
4、ml）；容量瓶25ml1等實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟1.酶液提取酶液提取l取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉(zhuǎn)移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將緩沖洗液轉(zhuǎn)入容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000rpm離心15min，上清液即為過(guò)氧化氫酶的粗提液。實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定2.反應(yīng)反應(yīng)l取50ml三角瓶4個(gè)（兩個(gè)測(cè)定兩個(gè)對(duì)照），測(cè)定瓶中加入酶液2.5ml，對(duì)照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同時(shí)計(jì)時(shí)，于30恒溫水浴中保溫10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。
5、3.滴定滴定l用0.1mol/L KMn4標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定H2O2，至出現(xiàn)粉紅色（在30min內(nèi)不消失）為終點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定五、計(jì)算五、計(jì)算l酶活力用每克鮮重樣品1min內(nèi)分解H2O2的毫克數(shù)表示l酶活(mgH2O2/gmin)=l式中： A對(duì)照KMnO4滴定毫升數(shù)； B酶反應(yīng)后KMnO4滴定毫升數(shù)； VT酶液總量（ml）； V1反應(yīng)所用酶液量（ml）； F W樣品鮮重（g）； 1.71ml 0.1mol/L的KMnO4相當(dāng)于1.7mg H2O2().ABVFWVtT171實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定六、研討題六、研討題l1.影響過(guò)氧化氫酶活力測(cè)定的因素有哪些影響過(guò)
6、氧化氫酶活力測(cè)定的因素有哪些?l2.過(guò)氧化氫酶與哪些生化過(guò)程有關(guān)過(guò)氧化氫酶與哪些生化過(guò)程有關(guān)?l3.過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定還有另外一種方法，即紫外吸收過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定還有另外一種方法，即紫外吸收法，原理是法，原理是H2O2在在240nm波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫波長(zhǎng)下有強(qiáng)烈吸收，過(guò)氧化氫酶能分解過(guò)氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度酶能分解過(guò)氧化氫，使反應(yīng)溶液吸光度(A240)隨反應(yīng)時(shí)間隨反應(yīng)時(shí)間而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶而降低。根據(jù)測(cè)量吸光率的變化速度即可測(cè)出過(guò)氧化氫酶的活力。請(qǐng)你查閱資料設(shè)計(jì)一個(gè)應(yīng)用該方法測(cè)定過(guò)氧化氫的活力。請(qǐng)你查閱資料設(shè)計(jì)一個(gè)應(yīng)用該方法測(cè)定過(guò)氧化氫酶活力的實(shí)驗(yàn)。酶活力的實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定
實(shí)驗(yàn)五植物組織中過(guò)氧化氫酶的活力測(cè)定
