《實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定》由會員分享，可在線閱讀，更多相關《實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定（11頁珍藏版）》請在裝配圖網(wǎng)上搜索。
1、實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定 實驗五、植物組織中過氧化氫酶活力測定高錳酸鉀滴定法高錳酸鉀滴定法實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定一、實驗目的一、實驗目的l1.掌握酶活力測定的方法l2.了解過氧化氫酶在生物體中的作用原理實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定二、實驗原理二、實驗原理l過氧化氫酶（CAT）屬于血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化過氧化氫分解為水和分子氧，在此過程中起傳遞電子的作用，過氧化氫則既是氧化劑又是還原劑。lR(Fe2+)+H2O2 = R(Fe3+OH)lR(Fe3+OH)2+H2O2 = R(Fe2+)2+2H2O+O2實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定l據(jù)此，可根據(jù)據(jù)
2、此，可根據(jù)H2O2的消耗量或的消耗量或O2的生成量測的生成量測定該酶活力大小。在反應系統(tǒng)中加入一定量定該酶活力大小。在反應系統(tǒng)中加入一定量（反應過量）的（反應過量）的H2O2溶液，經(jīng)酶促反應后，溶液，經(jīng)酶促反應后，用標準高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多用標準高錳酸鉀溶液（在酸性條件下）滴定多余的余的H2O2，即可求出消耗的，即可求出消耗的H2O2的量。的量。l5 H2O2 +2KMnO4+4H2SO4 =5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定三、材料、試劑與器具三、材料、試劑與器具 1.材料：材料：小麥葉片2.試劑試劑（1）10% H2SO4；（2）
3、0.2mol/L磷酸緩沖液pH7.8；（3）0.1mol/L高錳酸鉀標準液：稱取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷卻蒸餾水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液標定；（4）0.1mol/L H2O2：市售30% H2O2大約等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀釋至1000ml，用標準0.1mol/ KMnO4溶液（在酸性條件下）進行標定；（5）0.1mol/L草酸：稱取優(yōu)級純H2C2O4 2H2O 12.607g，用蒸餾水溶解后，定容至1L。實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定3.器具器具（1）恒溫水??；（2）研缽；三角瓶50ml4；酸式滴定管（10
4、ml）；容量瓶25ml1等實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定四、實驗步驟四、實驗步驟1.酶液提取酶液提取l取小麥葉片2.5g加入pH7.8的磷酸緩沖溶液少量，研磨成勻漿，轉移至25ml容量瓶中，用該緩沖液沖洗研缽，并將緩沖洗液轉入容量瓶中，用同一緩沖液定容，4000rpm離心15min，上清液即為過氧化氫酶的粗提液。實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定2.反應反應l取50ml三角瓶4個（兩個測定兩個對照），測定瓶中加入酶液2.5ml，對照瓶中加入煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同時計時，于30恒溫水浴中保溫10min，立即加入10% H2SO4 2.5ml。
5、3.滴定滴定l用0.1mol/L KMn4標準溶液滴定H2O2，至出現(xiàn)粉紅色（在30min內不消失）為終點。實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定五、計算五、計算l酶活力用每克鮮重樣品1min內分解H2O2的毫克數(shù)表示l酶活(mgH2O2/gmin)=l式中： A對照KMnO4滴定毫升數(shù)； B酶反應后KMnO4滴定毫升數(shù)； VT酶液總量（ml）； V1反應所用酶液量（ml）； F W樣品鮮重（g）； 1.71ml 0.1mol/L的KMnO4相當于1.7mg H2O2().ABVFWVtT171實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定六、研討題六、研討題l1.影響過氧化氫酶活力測定的因素有哪些影響過
6、氧化氫酶活力測定的因素有哪些?l2.過氧化氫酶與哪些生化過程有關過氧化氫酶與哪些生化過程有關?l3.過氧化氫酶的活力測定還有另外一種方法，即紫外吸收過氧化氫酶的活力測定還有另外一種方法，即紫外吸收法，原理是法，原理是H2O2在在240nm波長下有強烈吸收，過氧化氫波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應溶液吸光度酶能分解過氧化氫，使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間隨反應時間而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶而降低。根據(jù)測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活力。請你查閱資料設計一個應用該方法測定過氧化氫的活力。請你查閱資料設計一個應用該方法測定過氧化氫酶活力的實驗。酶活力的實驗。實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定
實驗五植物組織中過氧化氫酶的活力測定
