（浙江選考）2019版高考生物一輪總復(fù)習(xí) 第十單元 現(xiàn)代生物科技專(zhuān)題 第34講 克隆技術(shù)學(xué)案

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1、 第34講　克隆技術(shù) 考試標(biāo)準(zhǔn) 加試 考試標(biāo)準(zhǔn) 加試 1.植物的克隆 b 2.動(dòng)物的克隆 a 考點(diǎn)一　植物的克隆 1．植物細(xì)胞全能性 (1)全能性：植物體的每個(gè)生活細(xì)胞都具有遺傳上的全能性，因而都具有發(fā)育成完整植株的潛能。 (2)全能性表達(dá)的條件 ①離體：已經(jīng)分化的植物體細(xì)胞，只有在離體條件下才能表現(xiàn)出全能性。 ②無(wú)菌：培養(yǎng)基一旦被污染，迅速生長(zhǎng)的各種雜菌不僅會(huì)與培養(yǎng)物爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，而且會(huì)產(chǎn)生大量對(duì)培養(yǎng)物有害的物質(zhì)。 ③一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：如水、無(wú)機(jī)鹽、蔗糖、維生素等。 ④植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑：為促進(jìn)脫分化和再分化，培養(yǎng)基中需要加入一定的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，如生長(zhǎng)素、細(xì)

2、胞分裂素等。 (3)全能性表達(dá)的難易程度 ①分化程度低的細(xì)胞>分化程度高的細(xì)胞。 ②受精卵>配子>體細(xì)胞。 ③植物細(xì)胞>動(dòng)物細(xì)胞。 2．植物組織培養(yǎng)程序 配制培養(yǎng)基：配制含有適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的半固體培養(yǎng)基 切取消毒的組織塊 　 獲得愈傷組織：由相對(duì)沒(méi)有分化的活的薄壁細(xì)胞團(tuán)組成的新生組織 誘導(dǎo)新植株 3．植物細(xì)胞培養(yǎng)和器官培養(yǎng)的措施 通過(guò)平衡的植物激素配比進(jìn)行調(diào)控。 (1)適量的激動(dòng)素和細(xì)胞分裂素配比，可誘導(dǎo)芽的分化。 (2)適量的吲哚乙酸及適當(dāng)減除其他某些激素，可誘導(dǎo)生根。 4．原生質(zhì)體培養(yǎng)與植物細(xì)胞工程 (1)原生質(zhì)體培養(yǎng) 植物細(xì)胞原生質(zhì)

3、體新植株。 (2)植物細(xì)胞工程的操作過(guò)程 5．植物克隆技術(shù)的應(yīng)用 (1)轉(zhuǎn)基因植株培育。 (2)細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的生產(chǎn)。 (3)單倍體育種。 (4)誘發(fā)、篩選突變體。 思考討論 1．進(jìn)行植物組織培養(yǎng)時(shí)，既用到消毒技術(shù)，也用到滅菌技術(shù)，它們分別針對(duì)哪些對(duì)象？為何需進(jìn)行“無(wú)菌操作”。 提示　對(duì)培養(yǎng)材料及操作者衣著、手臂應(yīng)進(jìn)行消毒，對(duì)培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行滅菌。由于雜菌不僅爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)，還會(huì)產(chǎn)生毒素，故應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌操作。 2．若培養(yǎng)物取自植物的幼莖、葉片等含有葉綠體的部位，愈傷組織中是否會(huì)含有葉綠體？ 提示　培養(yǎng)物經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)后，失去其特有的結(jié)構(gòu)和功能而轉(zhuǎn)變成相對(duì)沒(méi)有分化的細(xì)胞，因此，愈傷組織

4、中不含葉綠體。 3．將無(wú)根的非洲菊幼苗轉(zhuǎn)入無(wú)植物激素的培養(yǎng)基中，在適宜的溫度和光照等條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，應(yīng)出現(xiàn)的現(xiàn)象是下列①～④中的哪一種？ 提示　細(xì)胞分裂素促進(jìn)細(xì)胞分裂，誘導(dǎo)芽的分化；生長(zhǎng)素可以促進(jìn)不定根、側(cè)根的形成；此題中雖然培養(yǎng)基中沒(méi)有植物激素，但由于外植體為“菊幼苗”而非離體的組織或細(xì)胞，故仍可自行產(chǎn)生激素，從而產(chǎn)生如圖②所示的生長(zhǎng)現(xiàn)象。 4．生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素在植物組織培養(yǎng)中的相互作用及其應(yīng)用 (1)細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素比例合適?愈傷組織會(huì)分化出根和芽。 (2)細(xì)胞分裂素多，生長(zhǎng)素少?只長(zhǎng)莖葉不長(zhǎng)根。 (3)生長(zhǎng)素多，細(xì)胞分裂素少?只長(zhǎng)根，不長(zhǎng)莖葉。 (4)生長(zhǎng)素少

5、，細(xì)胞分裂素也少?愈傷組織繼續(xù)生長(zhǎng)，不發(fā)生分化。 題型一　植物細(xì)胞的全能性和組織培養(yǎng)方法 1．下圖為玉米植物(2n＝20)組織培養(yǎng)的簡(jiǎn)略表示，下列有關(guān)說(shuō)法不正確的是(　　) ①②③―→④ A．①→②的培養(yǎng)基中需要加入一定配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素，還要加入瓊脂和蔗糖等 B．②的分化程度比①低，全能性比①高 C．若①是花藥，則④是單倍體植株，將④的種子用一定濃度的秋水仙素處理可獲得純合子 D．若將②在搖床上進(jìn)行液體懸浮培養(yǎng)可以獲得細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大的胚性細(xì)胞 答案　C 解析　玉米為二倍體，其單倍體植株高度不育，不能產(chǎn)生“種子”。 2．青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所

6、提取的一種代謝產(chǎn)物，而莖及其他部位中的青蒿素含量及其微小，下列關(guān)于利用植物組織培養(yǎng)生產(chǎn)青蒿素的敘述中，正確的是(　　) A．在黃花蒿組織培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)需光照 B．加入大量生長(zhǎng)素可提高青蒿素的產(chǎn)量 C．可通過(guò)大量培養(yǎng)愈傷組織以直接獲得青蒿素 D．可大規(guī)模栽培組織培養(yǎng)苗以獲取藥用成分 答案　D 解析　植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個(gè)過(guò)程，其中脫分化過(guò)程不需要光照，而再分化過(guò)程需要光照，A項(xiàng)錯(cuò)誤；生長(zhǎng)素對(duì)脫分化和再分化過(guò)程具有調(diào)節(jié)作用，但不能直接提高青蒿素的產(chǎn)量，B項(xiàng)錯(cuò)誤；青蒿素是從植物黃花蒿的葉片中所提取的一種代謝產(chǎn)物，而莖及其他部位中的青蒿素含量及其微小，因此通過(guò)大量培養(yǎng)愈傷組織不能

7、直接獲得青蒿素，C項(xiàng)錯(cuò)誤；可大規(guī)模栽培組織培養(yǎng)苗以獲取藥用成分，D項(xiàng)正確。 植物組織培養(yǎng)過(guò)程的兩個(gè)易錯(cuò)點(diǎn) (1)脫分化形成愈傷組織的過(guò)程不需要光，再分化過(guò)程需要光，因?yàn)橛鷤M織利用有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分，而試管苗需要進(jìn)行光合作用以自養(yǎng)。 (2)種子是植物的幼體，包含胚根、胚軸和胚芽，而不是高度分化的體細(xì)胞，故由種子萌發(fā)形成植株是植物的生長(zhǎng)現(xiàn)象，并未體現(xiàn)植物細(xì)胞的全能性。 題型二　影響植物組織培養(yǎng)的因素 3．植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性因素。按照不同順序使用這兩類(lèi)激素，會(huì)得到不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素，實(shí)驗(yàn)結(jié)果是(　　) A．有利

8、于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化 B．細(xì)胞既分裂也分化 C．細(xì)胞分化頻率提高 D．有利于細(xì)胞分化，但細(xì)胞不分裂 答案　A 解析　植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素的使用順序不同，培養(yǎng)的結(jié)果不同。先使用生長(zhǎng)素，后使用細(xì)胞分裂素，有利于細(xì)胞分裂，但細(xì)胞不分化；先使用細(xì)胞分裂素，后使用生長(zhǎng)素，細(xì)胞既分裂也分化；兩者同時(shí)使用，細(xì)胞分化頻率提高。 4．如圖表示植物組織培養(yǎng)過(guò)程。據(jù)圖分析下列敘述正確的是(　　) A．⑤植株根尖細(xì)胞的全能性比①植株根尖細(xì)胞的強(qiáng) B．②試管的培養(yǎng)基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，不含有機(jī)物 C．③試管中的細(xì)胞具有細(xì)胞質(zhì)豐富、細(xì)胞核和液泡都大的特性 D．調(diào)節(jié)④培養(yǎng)基中

9、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例可誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的植物器官 答案　D 解析　由于⑤是由①上的組織經(jīng)培養(yǎng)形成的個(gè)體，故二者的全能性應(yīng)該相同，A項(xiàng)錯(cuò)誤；由①到②的過(guò)程中植物細(xì)胞不能進(jìn)行光合作用，因而②試管中含有有機(jī)物如蔗糖等，故B項(xiàng)錯(cuò)誤；③試管中細(xì)胞為愈傷組織細(xì)胞，液泡小，故C項(xiàng)錯(cuò)誤。 題型三　植物細(xì)胞工程的應(yīng)用 5．(2017·臺(tái)州月考)某科研團(tuán)隊(duì)利用植物細(xì)胞工程技術(shù)，把基因序列已知的抗除草劑(Bar)基因?qū)朐|(zhì)體獲得抗除草劑大豆。請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題： (1)對(duì)于已獲得的Bar基因可以用____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。圖中的a過(guò)程通常使用相同的______________酶和DNA連接

10、酶，使目的基因與載體連接形成重組DNA分子。 (2)在b過(guò)程中，獲得原生質(zhì)體除了需要纖維素酶和果膠酶，還需要用到的試劑是___________。 (3)成功導(dǎo)入重組DNA的原生質(zhì)體經(jīng)脫分化形成I________________，進(jìn)而生長(zhǎng)發(fā)育成植株。下列不屬于I細(xì)胞應(yīng)具有的特征是____________。 A．薄壁細(xì)胞 B．細(xì)胞質(zhì)豐富 C．液泡小 D．細(xì)胞核小 (4)若要判斷轉(zhuǎn)基因抗除草劑大豆是否培育成功，比較簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法是______________ ______________________________________________________________

11、。 答案　(1)PCR　限制性核酸內(nèi)切　(2)(較高濃度的)甘露醇　(3)愈傷組織　D　(4)用一定濃度的除草劑噴灑，觀察轉(zhuǎn)基因大豆的生長(zhǎng)情況 解析　(1)PCR技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增目的基因；圖中a為形成重組DNA分子的過(guò)程，該過(guò)程首先需要用限制性核酸內(nèi)切酶切割外源DNA和載體，其次需要用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子。(2)用酶混合液處理植物細(xì)胞時(shí)，酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外的滲透壓，防止細(xì)胞吸水脹破。(3)成功導(dǎo)入重組DNA的原生質(zhì)體經(jīng)脫分化形成I愈傷組織，進(jìn)而生長(zhǎng)發(fā)育成植株。愈傷組織細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)豐富、液泡小而細(xì)胞核大。(4)若要判斷轉(zhuǎn)基因抗

12、除草劑大豆是否培育成功，比較簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法是用一定濃度的除草劑噴灑，觀察轉(zhuǎn)基因大豆的生長(zhǎng)情況。 6．某研究小組欲將已知抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體培育抗鹽菊科植物。請(qǐng)回答： (1)為獲得大量抗鹽基因，可通過(guò)____________技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增，也可將其連接到____________上，通過(guò)大腸桿菌培養(yǎng)擴(kuò)增。 (2)制備葉片原生質(zhì)體的酶混合液中，一般含較高濃度的甘露醇，其目的是避免制備的原生質(zhì)體____________。酶混合液需通過(guò)____________________________滅菌，才能用于無(wú)菌原生質(zhì)體的制備，整個(gè)無(wú)菌操作過(guò)程需在______________中進(jìn)行。 (3)可通過(guò)__

13、______________方法，直接將抗鹽基因?qū)朐|(zhì)體的細(xì)胞核。此外，還可用聚乙二醇融合、電擊等方法導(dǎo)入。導(dǎo)入后的原生質(zhì)體需再生出____________，經(jīng)持續(xù)分裂獲得愈傷組織，進(jìn)一步分化獲得再生植株并擴(kuò)大繁殖。 (4)利用帶有標(biāo)記的抗鹽基因特殊片段與從轉(zhuǎn)基因植株提取的RNA進(jìn)行________________，驗(yàn)證抗鹽基因是否被整合到受體細(xì)胞中并轉(zhuǎn)錄。通過(guò)將擴(kuò)大繁殖的再生植株轉(zhuǎn)接到含有________________________的培養(yǎng)基，根據(jù)生長(zhǎng)狀況初步篩選出抗鹽植株。 (5)為了獲得大量該轉(zhuǎn)基因植株，可將帶腋芽的莖段轉(zhuǎn)入適宜培養(yǎng)基中，獲得大量________，然后轉(zhuǎn)入生根培

14、養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，形成再生植株。再生植株需進(jìn)行________(不定項(xiàng)選擇：A.無(wú)菌處理　B．鍛煉　C．去除根部殘留的培養(yǎng)基　D．逐步提高濕度處理)后才能移種大田。 答案　(1)PCR　質(zhì)粒　(2)吸水脹破　過(guò)濾(G6玻璃砂漏斗)　超凈臺(tái)　(3)顯微注射　細(xì)胞壁　(4)分子雜交 較高濃度NaCl(鹽)　(5)叢狀苗　B、C 解析　(1)抗鹽菊科植物的培育采用了基因工程技術(shù)和植物組織培養(yǎng)等技術(shù)。在基因工程技術(shù)中，抗鹽基因?yàn)槟康幕?，可以采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增目的基因，也可以通過(guò)將連接有目的基因的質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌中使其擴(kuò)增。(2)原生質(zhì)體的制備一定要放在高滲溶液中，避免植物細(xì)胞去壁后

15、原生質(zhì)體過(guò)度吸水而脹破；酶在高溫下易失活，所以酶混合液無(wú)法采用高壓蒸汽滅菌法滅菌，可用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾除菌。(3)植物細(xì)胞去壁后可采用顯微注射法導(dǎo)入目的基因。原生質(zhì)體培養(yǎng)過(guò)程中必須首先再生出細(xì)胞壁，然后再經(jīng)過(guò)脫分化形成愈傷組織，最后經(jīng)過(guò)再分化形成植株。(4)若抗鹽基因成功整合并轉(zhuǎn)錄出RNA，則相應(yīng)的RNA能夠跟抗鹽基因的模板鏈互補(bǔ)配對(duì)，所以可用分子雜交的方法進(jìn)行鑒定，而抗鹽基因成功表達(dá)的抗鹽植株，則應(yīng)該通過(guò)種植利用其可以耐受高濃度食鹽的特性進(jìn)行篩選。(5)在植物組織培養(yǎng)過(guò)程中，應(yīng)該將帶芽莖段先放在生芽培養(yǎng)基中得到叢狀苗，然后再轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中得到再生植株幼苗，幼苗要去除根部殘留的培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)

16、逐漸降低濕度的鍛煉后才能在大田種植。 考點(diǎn)二　動(dòng)物的克隆 1．動(dòng)物細(xì)胞、組織培養(yǎng) (1)動(dòng)物克隆的技術(shù)基礎(chǔ)是動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng)。 (2)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程 ①概述：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)包括組織塊的切取、組織細(xì)胞的分散及細(xì)胞培養(yǎng)三個(gè)階段。分散組織細(xì)胞常用的方法有機(jī)械消化法和胰酶消化法。 ②原理：細(xì)胞增殖。 ③條件：a.充足的營(yíng)養(yǎng)供給——微量元素、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、血清等。 b．適宜的溫度：36.5 ℃±0.5 ℃；適宜的pH：7.2～7.4 c．氣體環(huán)境 d．無(wú)菌、無(wú)毒環(huán)境 ④流程 取材：從動(dòng)物組織切片中切取小片樣品 　↓機(jī)械消化或胰酶消化 單個(gè)細(xì)胞懸浮

17、液 　↓轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液 原代培養(yǎng)：從機(jī)體取出后立即進(jìn)行的細(xì)胞、組織培養(yǎng) 　↓分瓶 傳代培養(yǎng)：將原代培養(yǎng)細(xì)胞分成若干份，接種到若干份 培養(yǎng)基中，使其繼續(xù)生長(zhǎng)、增殖 (3)動(dòng)物成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程：切取組織小片→胰蛋白酶酶解→原代培養(yǎng)→傳代培養(yǎng)。 2．細(xì)胞系和細(xì)胞株 (1)細(xì)胞系的類(lèi)型：連續(xù)細(xì)胞系(惡性細(xì)胞系：具有異體致瘤性；不死性細(xì)胞系：保留接觸抑制現(xiàn)象，不致癌)和有限細(xì)胞系。 (2)細(xì)胞株：通過(guò)一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞?？煞譃檫B續(xù)細(xì)胞株和有限細(xì)胞株。 3．克隆培養(yǎng)法 (1)概念：把一個(gè)單細(xì)胞從群體中分離出來(lái)單獨(dú)培養(yǎng)，使之繁衍成一個(gè)新

18、的細(xì)胞群體的技術(shù)。 (2)基本要求：必須肯定所建成的克隆來(lái)源于單個(gè)細(xì)胞。 (3)提高細(xì)胞克隆形成率的措施有：①選擇適宜的培養(yǎng)基；②添加血清；③以滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)；④激素(胰島素等)刺激；⑤使用CO2培養(yǎng)箱；⑥調(diào)節(jié)pH等。 4．動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)及其應(yīng)用 (1)細(xì)胞融合 ①概念：是指在一定的條件下將兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞融合成一個(gè)細(xì)胞的現(xiàn)象。 ②原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性。 ③誘導(dǎo)融合的方法 a．物理方法和化學(xué)方法：電激法、聚乙二醇等。 b．生物方法：滅活的病毒(如仙臺(tái)病毒)。 (2)細(xì)胞雜交 ①概念：基因型不同的細(xì)胞間的融合就是細(xì)胞雜交。 ②過(guò)程 ③應(yīng)用：由于細(xì)胞雜交中染色

19、體容易丟失，利用雜交細(xì)胞檢測(cè)特定染色體丟失與特定基因產(chǎn)物(蛋白質(zhì))減少的對(duì)應(yīng)關(guān)系可以進(jìn)行基因定位。 (3)雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體的制備過(guò)程 ①根據(jù)上圖完善下面的過(guò)程 ②為什么選擇B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合？ 答案　a．選擇B淋巴細(xì)胞：若采取單個(gè)的B淋巴細(xì)胞進(jìn)行無(wú)性繁殖形成細(xì)胞群，這樣的細(xì)胞群就能產(chǎn)生化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體。b.選擇骨髓瘤細(xì)胞：在體外培養(yǎng)的條件下，腫瘤細(xì)胞(如骨髓瘤細(xì)胞)具有無(wú)限增殖的特性。 5．動(dòng)物的克隆繁殖 (1)動(dòng)物細(xì)胞全能性的表現(xiàn)程度 ①受精卵具有全能性。 ②多能細(xì)胞只具有分化出多種組織細(xì)胞的潛能。 ③單能細(xì)胞只能分化為一種細(xì)胞。 ④

20、高度分化的細(xì)胞不再分化為其他細(xì)胞。 (2)動(dòng)物難以克隆的根本原因 在動(dòng)物的個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞分化使得細(xì)胞發(fā)生了基因的差異表達(dá)，細(xì)胞基因組中基因的活動(dòng)很不完全。 (3)細(xì)胞核移植實(shí)驗(yàn)和動(dòng)物的克隆繁殖 ①核移植：利用一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核來(lái)取代另一個(gè)細(xì)胞中的細(xì)胞核，形成一個(gè)重建的“合子”。 ②動(dòng)物的克隆繁殖 提醒?、賱?dòng)物難以克隆的根本原因：分化了的動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中的調(diào)節(jié)蛋白，關(guān)閉了細(xì)胞核中與個(gè)體發(fā)育有關(guān)的基因。 ②重組卵發(fā)育成一個(gè)新個(gè)體，體現(xiàn)了細(xì)胞核的全能性而非動(dòng)物細(xì)胞的全能性。 ③重建合子的細(xì)胞質(zhì)必須來(lái)自卵細(xì)胞的原因：卵細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中沒(méi)有與關(guān)閉個(gè)體發(fā)育有關(guān)基因的調(diào)節(jié)蛋白。 ④

21、動(dòng)物克隆屬于無(wú)性繁殖，產(chǎn)生新個(gè)體的性別、絕大多數(shù)性狀與供核親本一致。 思考討論 1．區(qū)分原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng) (1)原代培養(yǎng) ①細(xì)胞懸浮液第一次在瓶中培養(yǎng)，沒(méi)有分瓶培養(yǎng)之前的細(xì)胞培養(yǎng)。 ②有時(shí)把最初的若干次傳代歸入原代培養(yǎng)范圍。 (2)傳代培養(yǎng) ①細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)一段時(shí)間后，分瓶再進(jìn)行的細(xì)胞培養(yǎng)。 ②將細(xì)胞從一個(gè)培養(yǎng)瓶轉(zhuǎn)移或移植到另一個(gè)培養(yǎng)瓶，就稱(chēng)為傳代培養(yǎng)。 2．比較細(xì)胞系和細(xì)胞株 種類(lèi) 來(lái)源 特點(diǎn) 細(xì)胞系 有限細(xì)胞系 通常由二倍體細(xì)胞傳代培養(yǎng)建成 有接觸抑制；不能連續(xù)培養(yǎng) 連續(xù)細(xì)胞系 由傳代細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)建成 發(fā)生了轉(zhuǎn)化，多數(shù)具有異倍體核型；有些具有異體致瘤

22、性；有些具有不死性，但不致癌 細(xì)胞株 有限細(xì)胞株 通過(guò)一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞 傳代次數(shù)有限 一般具有恒定的染色體組型、同功酶類(lèi)型、病毒敏感性和生化特性等 連續(xù)細(xì)胞株 可連續(xù)多次傳代 3.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，也需要將動(dòng)物細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)，這與觀察植物細(xì)胞的有絲分裂中的解離作用類(lèi)似。兩種處理方法的結(jié)果最大的區(qū)別是什么？ 提示　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的處理，動(dòng)物細(xì)胞還保持活性；但在植物細(xì)胞的解離過(guò)程中，細(xì)胞被解離液殺死，已經(jīng)失去活性。 4．單克隆抗體的制備分析 (1)細(xì)胞融合完成的標(biāo)志是什么？ 提示　細(xì)胞核融合成一個(gè)核。 (2)雜交

23、瘤細(xì)胞的特性是什么？ 提示　既能無(wú)限增殖，又能產(chǎn)生大量特異抗體。 (3)獲取單克隆抗體的兩個(gè)場(chǎng)所在哪里？ 提示　若在培養(yǎng)基中進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)，則從培養(yǎng)液中提?。蝗粼谛∈蠡蚱渌麆?dòng)物腹腔中培養(yǎng)，則從腹水中提取。 (4)在單克隆抗體制備過(guò)程中，一般認(rèn)為有兩次篩選過(guò)程，請(qǐng)說(shuō)明。 提示　第一次是篩選出雜交瘤細(xì)胞(用選擇培養(yǎng)基)，第二次是進(jìn)一步篩選出能產(chǎn)生人們所需抗體的雜交瘤細(xì)胞。 (5)用特定的選擇培養(yǎng)基篩選：未融合的細(xì)胞和同種細(xì)胞融合后形成的細(xì)胞(“BB”細(xì)胞、“瘤瘤”細(xì)胞)都會(huì)死亡，只有融合的雜交瘤細(xì)胞(“B瘤”細(xì)胞)才能生長(zhǎng)。 (6)單克隆抗體有哪些優(yōu)點(diǎn)？ 提示　特異性強(qiáng)、靈敏度

24、高，可大量制備。 5．通過(guò)動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)獲得的克隆動(dòng)物，其遺傳物質(zhì)是否和供核細(xì)胞的遺傳物質(zhì)完全一樣？ 提示　不完全一樣。細(xì)胞核遺傳物質(zhì)一樣，但細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)和提供去核卵細(xì)胞的個(gè)體幾乎完全一樣(分析遺傳物質(zhì)來(lái)源時(shí)，一定要注意細(xì)胞核遺傳物質(zhì)和細(xì)胞質(zhì)遺傳物質(zhì)的區(qū)別)。 題型一　動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)與克隆繁殖 1．下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，正確的是(　　) A．連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多具有二倍體核型 B．某些癌細(xì)胞在合適條件下能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞 C．由多個(gè)祖細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆 D．未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系細(xì)胞具有相同的性狀 答案　B 解析　連續(xù)細(xì)胞系的細(xì)胞大多數(shù)具有異倍體核

25、型；癌細(xì)胞仍能逆轉(zhuǎn)為正常細(xì)胞，如小鼠畸胎癌細(xì)胞能分化為各種正常體細(xì)胞；由一個(gè)共同的祖細(xì)胞培養(yǎng)形成的細(xì)胞群為一個(gè)克隆；未經(jīng)克隆化培養(yǎng)的細(xì)胞系具有異質(zhì)性。 2．(2015·安徽，31Ⅱ)科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過(guò)乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線(xiàn)如圖。 請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)由過(guò)程①獲得的A為_(kāi)______________________________________________________。 (2)在核移植之前，必須先去掉受體卵細(xì)胞的核，目的是______________________________。受體應(yīng)選用_____

26、_______期卵母細(xì)胞。 (3)進(jìn)行胚胎移植時(shí)，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生______________，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。 (4)采用胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)限個(gè)轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因?yàn)? ________________________________________________________________________。 答案　(1)含目的基因的重組DNA分子　(2)保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞　MⅡ中　(3)免疫排斥反應(yīng)　(4)整合有目的基因的成纖維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng) 解析　(1)根據(jù)題意可知，

27、要將人凝血因子IX基因?qū)刖d羊胎兒成纖維細(xì)胞，必須構(gòu)建基因表達(dá)載體，所以由過(guò)程①獲得的A為含目的基因的重組DNA分子。(2)在核移植之前，為了保證核遺傳物質(zhì)來(lái)自含目的基因的成纖維細(xì)胞，必須先去掉受體卵細(xì)胞的核。受體應(yīng)選用減數(shù)第二次分裂中期(MⅡ中期)的卵母細(xì)胞。(3)進(jìn)行胚胎移植時(shí)，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。(4)采用胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無(wú)限個(gè)轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因?yàn)檎嫌心康幕虻某衫w維細(xì)胞可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 比較動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)、核移植與動(dòng)物細(xì)胞融合 比較 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 核移植 動(dòng)物細(xì)胞

28、融合 原理 細(xì)胞增殖 動(dòng)物細(xì)胞核的全能性 細(xì)胞膜的流動(dòng)性 過(guò)程 細(xì)胞A、B 融合 雜交細(xì)胞 有絲 分裂 多個(gè)相同 雜交細(xì)胞 結(jié)果 相同分化程度的細(xì)胞群 與供體基本相同的個(gè)體 雜交細(xì)胞 關(guān)鍵 環(huán)節(jié) 細(xì)胞增殖(分裂)、細(xì)胞癌變 核融合、細(xì)胞分化 人工誘導(dǎo)細(xì)胞膜融合 應(yīng)用 ①生產(chǎn)生物制品； ②基因工程； ③檢測(cè)有毒物質(zhì) ①加速良種繁育； ②保護(hù)瀕危物種； ③生產(chǎn)醫(yī)用蛋白； ④提供克隆器官、組織等 獲得雜種細(xì)胞，制備細(xì)胞產(chǎn)物，如單克隆抗體 題型二　單克隆抗體的制備 3．關(guān)于下面制備單克隆抗體過(guò)程示意圖的敘述，不正確的是(　　)

29、 A．①表示已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞均是從小鼠的脾臟中提取的 B．②促進(jìn)細(xì)胞融合的方法可以利用聚乙二醇作介導(dǎo) C．④中的篩選是通過(guò)抗原—抗體反應(yīng)進(jìn)行的 D．⑤可以無(wú)限增殖 答案　A 解析　已免疫的B淋巴細(xì)胞可以從小鼠的脾臟中提取，也可以從血漿中提取，骨髓瘤細(xì)胞是從小鼠的骨髓中提取的。單克隆抗體是利用已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合形成的雜交瘤細(xì)胞得到的，融合方法可以用化學(xué)方法——聚乙二醇，生物方法——滅活的病毒等。如果要篩選能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群，可以通過(guò)檢測(cè)抗原—抗體反應(yīng)，如果有反應(yīng)說(shuō)明產(chǎn)生了抗體。融合細(xì)胞具有雙親的特點(diǎn)，既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生單一抗體。 4．(201

30、7·嘉興期末)如圖是制備抗體的兩個(gè)途徑的模式圖，下列敘述正確的是(　　) A．圖中獲得的抗體1和抗體2結(jié)構(gòu)完全相同 B．抗體1和抗體2的制備過(guò)程均涉及細(xì)胞篩選 C．Y細(xì)胞的增殖過(guò)程需要提供適量的O2，不需要提供CO2 D．①和④過(guò)程的原理分別是細(xì)胞增殖和堿基互補(bǔ)配對(duì)原則 答案　B 解析　抗體1和抗體2的氨基酸排列順序相同，但空間結(jié)構(gòu)不一定相同，抗體1由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生，其形成經(jīng)過(guò)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體的加工，抗體2是在大腸桿菌中產(chǎn)生，其內(nèi)沒(méi)有內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，A項(xiàng)錯(cuò)誤；②處需要通過(guò)選擇培養(yǎng)基的篩選，得到既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生特異性抗體的Y細(xì)胞；重組DNA分子的構(gòu)建和導(dǎo)入過(guò)程的成功率較低，

31、所以也需要篩選，B項(xiàng)正確；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要?dú)怏w環(huán)境，培養(yǎng)液中需要提供氧氣和二氧化碳。所需的氣體CO2的作用是維持培養(yǎng)液的pH，C項(xiàng)錯(cuò)誤；①過(guò)程表示動(dòng)物細(xì)胞融合，其結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是細(xì)胞膜的流動(dòng)性，D項(xiàng)錯(cuò)誤。 模擬演練 1．下列各項(xiàng)中屬于克隆技術(shù)的是(　　) A．把鯉魚(yú)胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移到去核鯽魚(yú)成熟卵中 B．體外培養(yǎng)基底層干細(xì)胞來(lái)培植皮膚用于植皮手術(shù) C．將小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞 D．將人工授精的受精卵體外培養(yǎng)形成胚胎 答案　B 解析　把鯉魚(yú)胚胎細(xì)胞的細(xì)胞核移到去核鯽魚(yú)成熟卵中屬于核移植，A項(xiàng)錯(cuò)誤；體外培養(yǎng)基底層干細(xì)胞來(lái)培植皮膚用于植皮手術(shù)屬于克隆技術(shù)，B項(xiàng)正確；將小

32、鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞結(jié)合成雜交瘤細(xì)胞屬于細(xì)胞融合技術(shù)，C項(xiàng)錯(cuò)誤；將人工授精的受精卵體外培養(yǎng)形成胚胎，屬于有性生殖，D項(xiàng)錯(cuò)誤。 2．下圖表示利用棉花葉肉細(xì)胞原生質(zhì)體培養(yǎng)進(jìn)行遺傳改良的過(guò)程，據(jù)圖分析下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是(　　) A．①過(guò)程需在適宜條件下用纖維素酶和果膠酶的混合物處理 B．②過(guò)程能定向誘導(dǎo)原生質(zhì)體產(chǎn)生優(yōu)良性狀的突變 C．③過(guò)程中葉肉細(xì)胞失去了其特有的結(jié)構(gòu)和功能 D．④過(guò)程需用適宜配比的植物激素處理 答案　B 解析　植物細(xì)胞壁主要是由纖維素和果膠組成的，常選用纖維素酶和果膠酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的原生質(zhì)體。紫外線(xiàn)照射誘變育種所依據(jù)的原理是基因突變，這種突變是不定向的

33、。③過(guò)程是脫分化，指已經(jīng)分化的植物器官、組織或細(xì)胞，當(dāng)受到創(chuàng)傷或進(jìn)行離體(也受到創(chuàng)傷)培養(yǎng)時(shí)，已停止分裂的細(xì)胞又重新恢復(fù)分裂，細(xì)胞改變?cè)械姆只癄顟B(tài)，失去原有的結(jié)構(gòu)和功能，成為具有未分化特性的細(xì)胞。④是再分化，需用適宜配比的植物激素誘導(dǎo)。 3．(2017·鄞州中學(xué)測(cè)試)下列關(guān)于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是(　　) A．在培養(yǎng)基中加入胰島素可提高動(dòng)物細(xì)胞克隆形成率 B．細(xì)胞克隆可以從普通細(xì)胞系中分離出缺乏特殊基因的突變細(xì)胞系 C．連續(xù)細(xì)胞系可認(rèn)為是發(fā)生了轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，大多數(shù)具有二倍體核型 D．無(wú)限細(xì)胞系比有限細(xì)胞系更容易克隆 答案　C 解析　胰島素可促進(jìn)葡萄糖等物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入組織細(xì)胞

34、，A項(xiàng)正確；細(xì)胞克隆即克隆培養(yǎng)法，是將單一細(xì)胞從細(xì)胞群體中分離出來(lái)單獨(dú)培養(yǎng)形成純系的技術(shù)，從普通細(xì)胞系中分離出單個(gè)突變細(xì)胞即可采用這種方法培養(yǎng)成細(xì)胞系，B項(xiàng)正確；連續(xù)細(xì)胞系大多具有異倍體核型，C項(xiàng)錯(cuò)誤；無(wú)限細(xì)胞系增殖能力更強(qiáng)，更易克隆，D項(xiàng)正確。 4．(2016·青島質(zhì)檢)某實(shí)驗(yàn)室做了如圖所示的實(shí)驗(yàn)研究，下列與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的敘述正確的是(　　) A．過(guò)程①導(dǎo)入的誘導(dǎo)基因使成纖維母細(xì)胞發(fā)生基因突變 B．丙細(xì)胞既能持續(xù)分裂，又能分泌單一的抗體 C．過(guò)程②屬于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的原代培養(yǎng) D．過(guò)程③④所用的培養(yǎng)基中都含有聚乙二醇 答案　B 解析　外源基因的導(dǎo)入過(guò)程屬于基因重組，A項(xiàng)錯(cuò)誤

35、；丙細(xì)胞能產(chǎn)生單克隆抗體，說(shuō)明丙細(xì)胞具有連續(xù)分裂且能分泌單一抗體的能力，B項(xiàng)正確；②表示細(xì)胞分化過(guò)程，C項(xiàng)錯(cuò)誤；③是誘導(dǎo)細(xì)胞融合的過(guò)程，所用的培養(yǎng)基含有聚乙二醇或滅活的仙臺(tái)病毒，而④過(guò)程不用聚乙二醇，D項(xiàng)錯(cuò)誤。 5．下圖是煙草葉片原生質(zhì)體分離和培養(yǎng)的流程圖。請(qǐng)回答： 煙草葉片消毒→酶解→獲得原生質(zhì)體→原生質(zhì)體檢測(cè)→原生質(zhì)體培養(yǎng)→獲得愈傷組織 (1)酶解時(shí)，在纖維素酶和果膠酶的混合液中，還需添加________來(lái)提高混合液的滲透壓，以便獲得完整的原生質(zhì)體。 (2)獲得原生質(zhì)體后，可用__________________法檢測(cè)原生質(zhì)體是否存活。然后將原生質(zhì)體制成懸浮液，滴加在_______

36、_____________上，用顯微鏡觀察并計(jì)數(shù)。要判定原生質(zhì)體是否已形成細(xì)胞壁，可用________________法鑒別。 (3)欲通過(guò)原生質(zhì)體培養(yǎng)得到愈傷組織，從培養(yǎng)基的成分(除瓊脂外)考慮，配制培養(yǎng)基時(shí)需要注意的主要方面是_________________________________________________________。 答案　(1)甘露醇　(2)紅墨水染色　血細(xì)胞計(jì)數(shù)板　質(zhì)壁分離　(3)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的適當(dāng)配比 解析　(1)為防止原生質(zhì)體吸水脹破，可加入適宜濃度的甘露醇溶液來(lái)提高混合液的滲透壓。(2)活細(xì)胞的質(zhì)膜具有選擇透性，紅墨水非細(xì)胞生長(zhǎng)所需物質(zhì)，

37、不會(huì)被吸收，而死細(xì)胞的質(zhì)膜變?yōu)槿感裕t墨水可進(jìn)入使細(xì)胞染色；細(xì)胞顯微計(jì)數(shù)的常用裝置為血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，形成細(xì)胞壁的細(xì)胞置于較高濃度的溶液中會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象。(3)植物組織培養(yǎng)過(guò)程中需要適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)，才能順利發(fā)生脫分化，形成愈傷組織。 課時(shí)訓(xùn)練 一、選擇題 1．(2017·臺(tái)州中學(xué)統(tǒng)考)下列過(guò)程不涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)的是(　　) A．由馬鈴薯的莖尖培育出無(wú)病毒植株 B．白菜和甘藍(lán)經(jīng)體細(xì)胞雜交過(guò)程培育出雜種植株 C．轉(zhuǎn)入抗卡那霉素基因的煙草細(xì)胞培育出轉(zhuǎn)基因植株 D．二倍體水稻剛萌發(fā)的種子經(jīng)秋水仙素處理后培育出四倍體植株 答案　D 解析　植物組織培養(yǎng)屬于無(wú)

38、性繁殖技術(shù)。將離體的植物組織、細(xì)胞培養(yǎng)成完整植株，需制備相應(yīng)的培養(yǎng)基并添加適當(dāng)配比的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑誘導(dǎo)，即必須依賴(lài)植物組織培養(yǎng)技術(shù)，故A、B、C項(xiàng)均涉及該技術(shù)；用秋水仙素處理二倍體水稻剛萌發(fā)的種子即可得到四倍體植株，無(wú)須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，故選D項(xiàng)。 2．(2017·江蘇，11)牛雄性胚胎中存在特異性H-Y 抗原，可在牛早期胚胎培養(yǎng)液中添加H-Y 單克隆抗體，篩選胚胎進(jìn)行移植，以利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥。下列相關(guān)敘述正確的是(　　) A．H-Y 單克隆抗體由骨髓瘤細(xì)胞分泌 B．應(yīng)選用原腸胚做雌雄鑒別 C．鑒別后的雄性胚胎可直接做胚胎移植 D．用H-Y 抗原免疫母?？?/p>

39、獲得相應(yīng)抗體 答案　D 解析　H-Y 單克隆抗體是由已免疫的B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞形成的雜交瘤細(xì)胞分泌的，A項(xiàng)錯(cuò)誤；一般選用囊胚期的滋養(yǎng)層細(xì)胞做性別鑒定，B項(xiàng)錯(cuò)誤；利用乳腺生物反應(yīng)器進(jìn)行生物制藥，應(yīng)選擇雌性胚胎，C項(xiàng)錯(cuò)誤；用H-Y 抗原免疫母牛，可使母牛針對(duì)該抗原產(chǎn)生相應(yīng)抗體，D項(xiàng)正確。 3．科學(xué)家將豹蛙的囊胚期細(xì)胞的細(xì)胞核移植到去核的卵細(xì)胞中，形成重組細(xì)胞，然后培養(yǎng)重組細(xì)胞形成囊胚，最終發(fā)育為成體豹蛙。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．“多莉”羊培育方法與題中獲得成體豹蛙方法本質(zhì)相似 B．囊胚期細(xì)胞已發(fā)生分化，但細(xì)胞核中的基因組完整 C．重組細(xì)胞形成成蛙過(guò)程需要進(jìn)行胚胎移植，但不

40、能用原腸胚期的胚胎進(jìn)行移植 D．重組細(xì)胞最初分裂時(shí)雖然進(jìn)行了DNA復(fù)制，但基因轉(zhuǎn)錄并未開(kāi)始 答案　C 解析　豹蛙和“多莉”羊的培育過(guò)程都采用了細(xì)胞核移植技術(shù)，本質(zhì)相似，A項(xiàng)正確；細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)，遺傳物質(zhì)并未改變，基因組的完整性得以保留，B項(xiàng)正確；蛙類(lèi)屬于卵生動(dòng)物，無(wú)須進(jìn)行胚胎移植，C項(xiàng)錯(cuò)誤；重組細(xì)胞最初分裂時(shí)進(jìn)行了DNA復(fù)制，但基因轉(zhuǎn)錄尚未開(kāi)始，重組細(xì)胞開(kāi)始第三次分裂時(shí)核受體細(xì)胞的調(diào)節(jié)蛋白全部被卵細(xì)胞質(zhì)中的蛋白因子替代，核DNA重新編排，胚細(xì)胞基因才開(kāi)始表達(dá)，D項(xiàng)正確。 4．(2017·奉賢區(qū)二模)如圖是單克隆抗體制備流程的簡(jiǎn)明示意圖。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　)

41、 A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的B淋巴細(xì)胞 B．②過(guò)程實(shí)現(xiàn)的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性 C．③一定是雜交瘤細(xì)胞 D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群 答案　C 解析?、偈菑囊衙庖叩男∈笃⑴K中獲得的具有免疫能力的B淋巴細(xì)胞，A項(xiàng)正確；②過(guò)程為B淋巴細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合的過(guò)程，原理是細(xì)胞膜具有一定的流動(dòng)性，B項(xiàng)正確；如果只考慮兩兩融合，③可能有3種融合細(xì)胞，即雜交瘤細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞自身融合的細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞自身融合的細(xì)胞，C項(xiàng)錯(cuò)誤；④過(guò)程表示用抗體陽(yáng)性檢測(cè)篩選出能無(wú)限增殖并能分泌特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞群，D項(xiàng)正確。 二、非選擇題 5．(2017·紹興柯橋中學(xué)期

42、中)如圖可表示細(xì)胞融合技術(shù)的一些過(guò)程，請(qǐng)據(jù)圖回答： (1)若A、B到C過(guò)程是體外受精過(guò)程，則對(duì)已取得的精子必須先進(jìn)行________處理，若需獲取更多的卵細(xì)胞一般要對(duì)雌性個(gè)體注射____________，使其______________。 (2)若該過(guò)程是制備單克隆抗體的過(guò)程，在A、B到C的過(guò)程中，A細(xì)胞為骨髓瘤細(xì)胞，B細(xì)胞為能產(chǎn)生抗體的B淋巴細(xì)胞，那么D細(xì)胞稱(chēng)為_(kāi)_________細(xì)胞。從融合細(xì)胞中選擇出它的方法是在特定的選擇培養(yǎng)基中培養(yǎng)，篩選出該類(lèi)細(xì)胞后還需進(jìn)行__________培養(yǎng)和抗體檢測(cè)，經(jīng)多次篩選可獲得數(shù)量足夠的能分泌所需抗體的細(xì)胞。 (3)若A、B細(xì)胞為植物細(xì)胞，D細(xì)

43、胞在植物組織培養(yǎng)時(shí)，先配制__________培養(yǎng)基，再加入一定比例的植物激素，當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較少時(shí)，愈傷組織可發(fā)育形成______________________。 (4)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，則可采用________________法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞中。受體細(xì)胞應(yīng)該是________(A.體細(xì)胞　B．卵細(xì)胞　C．受精卵　D．雄配子)。為了得到農(nóng)桿菌的單菌落，常采用的分離方法有兩種，即__________________和________________。 (5)植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都需要無(wú)菌操作，下列不適宜用高壓蒸汽滅菌的是_____。 A．接種環(huán)和鑷子 B．三角瓶和廣口瓶

44、 C．發(fā)芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基 D．用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽 答案　(1)獲能　促性腺激素　超數(shù)排卵　(2)雜交瘤　克隆化　(3)MS　叢狀苗　(4)農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化　A　劃線(xiàn)分離法　涂布分離法　(5)D 解析　(1)受精之前，對(duì)已取得的精子先進(jìn)行獲能處理；若需更多的卵細(xì)胞，一般要對(duì)雌性個(gè)體注射促性腺激素，使其超數(shù)排卵。(2)依據(jù)題中信息可確定圖中D細(xì)胞為雜交瘤細(xì)胞；對(duì)獲得的雜交瘤細(xì)胞需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)以擴(kuò)大數(shù)量。(3)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，則可采用誘導(dǎo)生芽或生根的培養(yǎng)基(MS培養(yǎng)基)培養(yǎng)；當(dāng)生長(zhǎng)素相對(duì)較少時(shí)，愈傷組織可發(fā)育形成叢狀苗。(4)若要培育轉(zhuǎn)基因植物，通常采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞

45、中；受體細(xì)胞應(yīng)該是植物體細(xì)胞；為了得到農(nóng)桿菌的單菌落，常采用的分離方法有兩種，即劃線(xiàn)分離法和涂布分離法。(5)四個(gè)選項(xiàng)中不適宜用高壓蒸汽滅菌的是用于培養(yǎng)的幼莖和幼芽。 6．(2017·寧波九校期末聯(lián)考)苦蕎富含黃酮類(lèi)化合物等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，在降血糖、降血脂等方面功效顯著。查爾酮合成酶(CHS)是黃酮類(lèi)化合物合成的關(guān)鍵酶，如圖為將CHS基因?qū)肟嗍w，培育高產(chǎn)黃酮苦蕎品系示意圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題： (1)基因工程的核心是________________________。 (2)可利用__________________、____________________方法獲取CHS基因。 (3)過(guò)程

46、①中切開(kāi)質(zhì)粒的酶是__________。它能在質(zhì)粒特定的部位切割的原因是__________。 (4)過(guò)程②③分別是_________?？嗍w細(xì)胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是___________________。 (5)為培育轉(zhuǎn)基因苦蕎植物，還可將該植物幼葉消毒后，用_________________酶混合液處理，獲得原生質(zhì)體。酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，其作用是_________________。將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過(guò)____________________得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成________________，生長(zhǎng)發(fā)育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。 (6)愈傷

47、組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力，下列原因錯(cuò)誤的是________。 A．愈傷組織發(fā)生遺傳變異 B．愈傷組織不能分散成單細(xì)胞 C．愈傷組織中激素平衡發(fā)生改變 D．愈傷組織對(duì)外源激素敏感性發(fā)生改變 答案　(1)形成重組DNA分子　(2)從基因文庫(kù)中獲取　化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增　(3)限制性核酸內(nèi)切酶　能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的位點(diǎn)切割DNA分子　(4)脫分化、再分化　植物細(xì)胞的全能性(或細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因)　(5)纖維素酶和果膠(寫(xiě)全才可)　維持滲透壓　液體懸浮培養(yǎng)　胚狀體　(6)B 解析　(1)基因工程的核心是基因工程的第二步，即形成重組DN

48、A分子。(2)CHS基因?yàn)槟康幕颍浍@取方法有從基因文庫(kù)中獲取、化學(xué)方法合成或PCR擴(kuò)增。(3)質(zhì)粒的化學(xué)本質(zhì)是DNA，切開(kāi)質(zhì)粒的酶是限制性核酸內(nèi)切酶；由于限制性核酸內(nèi)切酶能識(shí)別特定的核苷酸序列并在特定的切點(diǎn)上切割DNA分子，所以它能在質(zhì)粒特定的部位切割。(4)過(guò)程②③為植物的組織培養(yǎng)過(guò)程，分別是脫分化、再分化；由于植物細(xì)胞具有全能性，所以苦蕎細(xì)胞能培養(yǎng)成植株。(5)植物細(xì)胞用纖維素酶和果膠酶處理，去除細(xì)胞壁，獲得原生質(zhì)體；制備原生質(zhì)體時(shí)，酶混合液中含有適宜濃度的甘露醇，有利于維持滲透壓；將目的基因?qū)氲皆|(zhì)體，經(jīng)培養(yǎng)形成愈傷組織，再通過(guò)液體懸浮培養(yǎng)得到分散的胚性細(xì)胞，發(fā)育成胚狀體，生長(zhǎng)發(fā)

49、育后獲得該轉(zhuǎn)基因植株。(6)愈傷組織繼代次數(shù)過(guò)多會(huì)發(fā)生遺傳變異、激素平衡的改變、對(duì)外源激素敏感性的改變，使得愈傷組織喪失細(xì)胞全能性的表達(dá)能力。 7．(2017·臺(tái)州模擬)請(qǐng)回答雜交瘤技術(shù)和單克隆抗體制備的有關(guān)問(wèn)題： (1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)，利用一定的物質(zhì)，如生物誘導(dǎo)劑__________________作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的__________________培養(yǎng)，獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行__________________檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。 (2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，在體外培養(yǎng)時(shí)需要特別加入的天然

50、成分是__________________。 (3)有關(guān)雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)的敘述，正確的是_____________________________。 A．用固體培養(yǎng)基培養(yǎng) B．用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng) C．能進(jìn)行傳代培養(yǎng) D．需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物 (4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入到受體細(xì)胞，該技術(shù)的核心步驟是___________，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的_______。 答案　(1)滅活的(仙臺(tái))病毒　克隆化　抗體　(2)動(dòng)物血清　(3)C　(4)形成重組DNA分子　載體 解析　(1)雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體時(shí)

51、，利用一定的物質(zhì)，如生物誘導(dǎo)劑滅活的(仙臺(tái))病毒作介導(dǎo)，使經(jīng)免疫的小鼠B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出融合的細(xì)胞再進(jìn)行細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)，獲得純系細(xì)胞，同時(shí)還要進(jìn)行抗體檢驗(yàn)，以保證獲得的是所需的特定雜交瘤細(xì)胞。(2)獲得雜交瘤細(xì)胞后，在體外培養(yǎng)時(shí)需要特別加入的天然成分是動(dòng)物血清。(3)雜交瘤細(xì)胞體外用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)，A項(xiàng)錯(cuò)誤；用滋養(yǎng)細(xì)胞支持生長(zhǎng)，不是用滋養(yǎng)層細(xì)胞支持生長(zhǎng)，B項(xiàng)錯(cuò)誤；雜交瘤細(xì)胞能進(jìn)行傳代培養(yǎng)，C項(xiàng)正確；抗體為分泌蛋白，不需要對(duì)細(xì)胞進(jìn)行研磨破碎獲得產(chǎn)物，D項(xiàng)錯(cuò)誤。故選C。(4)現(xiàn)在欲利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體，科研小組將與抗體形成有關(guān)的關(guān)鍵基因通過(guò)噬菌體導(dǎo)入到受體細(xì)胞，該技術(shù)的

52、核心步驟是形成重組DNA分子，噬菌體是這些關(guān)鍵基因的載體。 8．人的血清白蛋白在臨床上需求量很大，通常從人血中提取。由于艾滋病病毒(HIV)等人類(lèi)感染性病原體造成的威脅與日俱增，使人們對(duì)血液制品顧慮重重。如果將人的血清白蛋白基因?qū)肽膛＜?xì)胞中，那么利用牛的乳汁來(lái)生產(chǎn)血清白蛋白就成為可能。大致過(guò)程如下： a．將人的血清白蛋白基因?qū)氪菩阅膛Ｅ咛ゼ?xì)胞，形成重組細(xì)胞①； b．取出重組細(xì)胞①的細(xì)胞核，注入牛去核卵細(xì)胞中形成重組細(xì)胞②； c．電脈沖刺激重組細(xì)胞②，促使其形成早期胚胎； d．將胚胎移植到母牛的子宮中，最終發(fā)育成轉(zhuǎn)基因小牛。 請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)重組細(xì)胞①的獲得是利用了

53、__________技術(shù)，它實(shí)現(xiàn)了奶牛胚胎細(xì)胞中的DNA與______________的重組。 (2)重組細(xì)胞②的獲得是利用了克隆技術(shù)中的________技術(shù)，使重組細(xì)胞①的細(xì)胞核與牛的____________融合。 (3)由圖可知，動(dòng)物克隆技術(shù)的基礎(chǔ)是________。 A．動(dòng)物細(xì)胞融合 B．動(dòng)物細(xì)胞的全能性 C．動(dòng)物細(xì)胞和組織培養(yǎng) D．核移植 (4)利用轉(zhuǎn)基因牛乳汁提取藥物工藝簡(jiǎn)單，甚至可直接飲用治病。如果將藥物蛋白基因移到動(dòng)物(如牛)的膀胱上皮細(xì)胞中，利用轉(zhuǎn)基因牛的尿液生產(chǎn)提取藥物比乳汁提取藥物的更大優(yōu)越性是：_____________、____________。 (5)

54、重組細(xì)胞②培養(yǎng)成早期胚胎利用了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。下列與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)無(wú)密切關(guān)系的是______。 A．細(xì)胞全能性的揭示 B．噬菌體的研究 C．細(xì)胞周期調(diào)節(jié)控制機(jī)理的分析 D．對(duì)癌變機(jī)理和衰老原因的研究 答案　(1)基因工程　人的血清白蛋白基因　(2)核移植　去核卵細(xì)胞　(3)C　(4)處于不同發(fā)育時(shí)期的動(dòng)物都可生產(chǎn)　雌性和雄性動(dòng)物都可生產(chǎn)　(5)B 解析　(1)基因工程可將目的基因——人的血清白蛋白基因與受體細(xì)胞牛胚胎細(xì)胞的DNA進(jìn)行重組。(2)克隆技術(shù)中的細(xì)胞核移植技術(shù)可將去核的牛卵細(xì)胞與含有目的基因的供體細(xì)胞核融合構(gòu)建重組細(xì)胞②。(4)建立膀胱生物反應(yīng)器的好處是可以不分動(dòng)物的

55、性別及不同生長(zhǎng)發(fā)育期，均可產(chǎn)生所需藥物。(5)噬菌體是細(xì)菌病毒，無(wú)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，A、C、D項(xiàng)所述的內(nèi)容都與細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)密不可分。 9．下圖為動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本過(guò)程示意圖，請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)容器A中放入的一般是幼齡動(dòng)物的器官或組織，原因是其細(xì)胞________________、易于培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)先要剪碎，然后用___________分散細(xì)胞，制成B瓶中的細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入C瓶中進(jìn)行的初次培養(yǎng)稱(chēng)為_(kāi)_______________。 (2)在D瓶中正常培養(yǎng)了一段時(shí)間后，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞絕大部分死亡，只有極少數(shù)細(xì)胞存活并可無(wú)限增殖，這樣的細(xì)胞系被稱(chēng)為_(kāi)_____________，它們大多數(shù)具有

56、____________核型。 (3)為保證無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境，B、C、D瓶中的培養(yǎng)基中需要添加一定量的________；還需要提供O2和CO2等氣體環(huán)境，CO2的作用主要是___________________________________。 (4)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)，通常要在培養(yǎng)基中補(bǔ)充一定濃度的某些物質(zhì)。下圖表示血清對(duì)正常細(xì)胞和癌細(xì)胞培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 據(jù)圖可知，培養(yǎng)________細(xì)胞一定需要添加血清。 答案　(1)分裂能力強(qiáng)　胰蛋白酶　原代培養(yǎng)　(2)連續(xù)細(xì)胞系　異倍體　(3)抗生素　維持培養(yǎng)液的pH　(4)正常 解析　(1)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)是利用細(xì)胞增殖能力以獲取大量動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)。幼齡動(dòng)物的器官或組織中的細(xì)胞分裂能力強(qiáng)，適宜培養(yǎng)；胰蛋白酶處理可去除細(xì)胞粘連蛋白，使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)；從機(jī)體中取出的細(xì)胞經(jīng)分散處理后立即進(jìn)行的培養(yǎng)稱(chēng)為原代培養(yǎng)。(2)能夠連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱(chēng)為連續(xù)細(xì)胞系，題中明確說(shuō)明這些細(xì)胞可無(wú)限增殖，故屬于連續(xù)細(xì)胞系；連續(xù)細(xì)胞系被認(rèn)為是發(fā)生了轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，大多具有異倍體核型。(3)加入一定量的抗生素可殺滅病菌，防止對(duì)動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖造成影響；CO2的作用主要是維持動(dòng)物細(xì)胞正常生長(zhǎng)所需的pH。(4)據(jù)圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，是否添加血清對(duì)癌細(xì)胞的數(shù)量影響不大，但明顯影響正常細(xì)胞的數(shù)量，故正常細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程一定要添加血清。 21