2022年高三生物總復(fù)習(xí) 第40講微生物的利用教案

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1、2022年高三生物總復(fù)習(xí) 第40講微生物的利用教案 【考綱要求】 微生物的利用 考綱要求 具體內(nèi)容 (1)進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng) (2)測定某種微生物的數(shù)量 (3)研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 (4)探討微生物的利用 Ⅱ Ⅱ Ⅱ Ⅱ 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 (1)培養(yǎng)基的配制 (2)高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌 (3)倒平板操作 (4)平板劃線操作和稀釋涂布平板法 (5)應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物 實(shí)驗(yàn)與探究能力 【考點(diǎn)分析】 考點(diǎn) 試卷類型 分值 題型 (1)

2、進(jìn)行微生物的分離和培養(yǎng) (2)測定某種微生物的數(shù)量 (3)研究培養(yǎng)基對微生物的選擇作用 (4)探討微生物的利用 (1)培養(yǎng)基的配制 (2)高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌 (3)倒平板操作 (4)平板劃線操作和稀釋涂布平板法 (5)應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物 xx 寧夏 15 非選擇題 xx 江蘇 2 選擇題 xx 山東 8 非選擇題 xx 江蘇 3 選擇題 xx 廣東 15 非選擇題 xx 寧夏 15 非選擇題 xx 廣東 10 非選擇題 xx 廣東 10 非選擇題 xx 廣東 10 非選擇題 xx 遼寧、寧夏 15

3、非選擇題 xx 上海 9 非選擇題 【考點(diǎn)預(yù)測】 從近幾年高考試題看,微生物的營養(yǎng)、培養(yǎng)基的種類和配制、進(jìn)行微生物的培養(yǎng)與分離等內(nèi)容是命題的素材。培養(yǎng)基的種類與配制是本模塊的重點(diǎn)內(nèi)容,今年高考命題可能會從下面三個方面展開: 1.培養(yǎng)基及其無菌技術(shù) 2.應(yīng)用選擇培養(yǎng)基分離某種特定的微生物 3.有關(guān)的實(shí)驗(yàn)原理、方法、步驟和預(yù)測 本專題內(nèi)容側(cè)重考查學(xué)生的實(shí)際應(yīng)用能力,由于很多課題的開展具有一定的難度,從考試的角度上講也很難實(shí)現(xiàn)動手能力的考查。從近幾年掰課標(biāo)地區(qū)生物試題看注重考查基礎(chǔ)知識,同時進(jìn)行簡單應(yīng)用的考查。 考查知識點(diǎn)分布主要集中在微生物的營養(yǎng)

4、、培養(yǎng)基種類和配制、程序及其注意事項(xiàng)、無菌技術(shù)、微生物的選擇和鑒別培養(yǎng)等。以非選擇題為主,為選做題之一。 【知識梳理】 一、 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1、培養(yǎng)基 2、無菌技術(shù) 3、試驗(yàn)操作 二、土壤中分解尿素的細(xì)菌分離與計數(shù) 1、試驗(yàn)設(shè)計 2、設(shè)置對照 3、篩選菌株 三、分解纖維素的微生物的分離 1、纖維素 2、試驗(yàn)設(shè)計 【重點(diǎn)解析】 微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng) 1、 微生物的營養(yǎng)物質(zhì)及功能 碳源 氮源 生長因子 水 無機(jī)攔 概念 凡能為微生物提供所需碳元素的營養(yǎng)物質(zhì) 凡能為微生物提供所需氮元素的營養(yǎng)物質(zhì) 微生物生長不可缺少的

5、微量有機(jī)物 來源 無機(jī)碳源:C02、NaHC03等;有機(jī)碳源:糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等 無機(jī)氮源:N2、氨、銨鹽、硝酸鹽等;有機(jī)氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨 基酸等 酵母膏、蛋白胨、動植物組織提取液 作用 主要用于構(gòu)成微生物的細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物;異養(yǎng)微生物的主要能源物質(zhì) 主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物 酶和核酸的組成成分 溶劑、生化反應(yīng)的介質(zhì) 酶的成分、調(diào)節(jié)滲透壓等 說明 不同種類的微生物,對碳源的需要差別較大。例:甲基營養(yǎng)菌只利用甲醇、甲烷;假單胞菌利用90多種含碳 化合物 對于異養(yǎng)微生物,含C、 H、0、N

6、的化合物既是碳 源,又是氮源 微生物需要補(bǔ)充生長因 子是由于缺乏合成這些 物質(zhì)所需要的酶或合成 能力有限 2、 培養(yǎng)基的種類 劃分標(biāo)準(zhǔn) 培養(yǎng)基種類 特點(diǎn) 用途 按物理 性質(zhì) 液體培養(yǎng)基 不加凝固劑 工業(yè)生產(chǎn) 固體培養(yǎng)基 加凝固劑,(如瓊脂) 微生物分離、鑒定,活菌計數(shù),保藏菌種 按 用 途 選擇培養(yǎng)基 培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長,促進(jìn)所需要的微生物的生長 培養(yǎng)、分離出特定微生物如培養(yǎng)酵母菌和霉菌,可在培養(yǎng)基中加入青霉素;培養(yǎng)金黃色葡萄球菌,可在培養(yǎng)基中加入高濃度食鹽 鑒別培養(yǎng)基 根據(jù)微生

7、物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品 鑒別不同種類的微生物,如可用伊紅一美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有,菌落呈深紫色,并帶有金屬光澤) 3、 無菌技術(shù)———消毒與滅菌 概念 常用方法 應(yīng)用的范圍 消 毒 使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽孢和 孢子) 煮沸消毒法:在100℃煮沸5~6 min 一般物品 巴氏消毒法:70℃~75℃煮 30 min或在80℃煮15min 對于一些不耐高溫的液體,如牛奶 化學(xué)藥劑消毒法 如用體積分?jǐn)?shù)70%~75%

8、的酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等 紫外線消毒:30 W 紫外燈照射30 min 接種室空氣 滅 菌 使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物(包括芽孢和孢子) 灼燒滅菌:酒精燈火焰 接種工具的滅菌 干熱滅菌:160℃~l70℃ 下滅菌1~2 h 玻璃器皿、金屬工具的滅菌 高壓蒸汽滅菌:121℃100 kPa條件下,滅菌15~30 min 培養(yǎng)基及容器的滅菌 4.制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基操作分析 (1)培養(yǎng)基需冷卻至50℃時開始倒平板 ①原因:瓊脂是一種多糖,在98℃以上熔化,在44℃以下凝固,倒平板時高于50℃則會燙手,低于50℃

9、時若不能及時操作,瓊脂就會凝固。 ②估計培養(yǎng)基溫度的方法是:培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出冷卻一段時間后用手觸摸,感覺上以剛不燙手為準(zhǔn)。 (2)平板倒置原因:平板皿蓋上會凝結(jié)水珠,培養(yǎng)基表面的溫度也較高,平板倒置后,既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可防止肛蓋上的水珠落入培養(yǎng)基,造成污染。 5.純化大腸桿菌操作過程中的注意事項(xiàng) 微生物的接種方法中最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。 (1)平板劃線法 ①操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前接種環(huán)都需要進(jìn)行火焰灼燒滅菌,劃線操作結(jié)束時,仍需灼燒接種環(huán),每次灼燒目的如下表: 第一次操作 每次

10、劃線之前 劃線結(jié)束 目的 殺死接種環(huán)上原有的微生物 殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種,使下次劃線的菌種直接來源于上次劃線的末端,使每次劃 線菌種數(shù)目減少 殺死接種環(huán)上殘存的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者 ②從第二次以后的劃線操作總是從上一次劃線末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐漸減少,最終得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。 (2)稀釋涂布平板法 稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜,且各個細(xì)節(jié)均需保證“無菌”.應(yīng)特別注意: ①酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。 ②吸管頭不要接觸任何其他物體。 ③吸管要在酒精燈火焰周圍使用。

11、例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細(xì)菌的污染情況而進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)包括制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此實(shí)驗(yàn)相關(guān)的問題。 (1)培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細(xì)菌培養(yǎng)提供了 和 。除此之外,培養(yǎng)基還必須含有的基本:成分是 和 。 (2)對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌,應(yīng)該采用的方法是 。 (3)為了盡快觀察到細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,應(yīng)將接種了湖水樣品的平板置于 中培養(yǎng),培養(yǎng)的溫度設(shè)定在37 ℃。要使該實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果可靠,還應(yīng)該同時在另一平板上接種

12、 作為對照進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 (4)培養(yǎng)20小時后,觀察到平板上有形態(tài)和顏色不同的菌落,這說明湖水樣品中 種細(xì)菌。一般說來,菌落總數(shù)越多,湖水遭受細(xì)菌污染的程度越 。 (5)如果提高培養(yǎng)基中NaCl的濃度,可以用于篩選耐 細(xì)菌,這種培養(yǎng)基被稱為 。 解析:(1)蛋白胨主要是為細(xì)菌提供氮源,淀粉只能為細(xì)茵提供碳源,其實(shí),兩者還都能為細(xì)菌提供能源。雖然各種培養(yǎng)基的具體配方不同,但一般都含有水、碳源、氮源和無機(jī)鹽。(2)培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌,接種環(huán)等用灼燒滅茵,玻璃器皿等適于用干熱滅菌。(3)適宜的溫度條件下微生物

13、繁殖速度快,恒溫箱可通過設(shè)定維持適宜的溫度;對照組應(yīng)接種不含細(xì)菌的樣品,比如接種無菌水。(4)每一種類型的菌落就表示有一種類型的細(xì)菌。茵落總數(shù)與湖水遭受細(xì)菌污染的程度呈正相關(guān)。(5)加入NaCl可制作篩選耐鹽細(xì)菌的選擇培養(yǎng)基。蛋白質(zhì)中含有氮元素和碳元素,為細(xì)菌的生長提供了氮源和碳源,而淀粉只能提供碳源。培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽進(jìn)行滅茵。不同的微生物形成的茵落不同,有多種茵落即有多種細(xì)菌;污染越重,茵落總數(shù)就越多。耐鹽細(xì)茵可以在高濃度的NaCl培養(yǎng)基中生存,而其他的細(xì)菌則很難生存。 答案:(1)氮源(碳源不作要求) 碳源 無機(jī)鹽 水(2)高壓蒸汽滅菌 (3)恒溫培養(yǎng)箱無菌水 (4)多

14、高 (5)鹽(或NaCl)選擇性培養(yǎng)基 例2苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì),自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工 廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚,為了降解廢水中的苯酚,研究人員從土壤中篩選出只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株,篩選的主要步驟如圖所示,①為土壤樣品。請問答下列問題: (1)②中培養(yǎng)目的菌株的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入 作為碳源,②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基 (A.影響;B.不影響)細(xì)菌的數(shù)量,如果要測定②中活細(xì)菌數(shù)量,常采用 法。 (2)④為對照,微生物在④中不生長,在⑤中生長,④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于

15、 使用 法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細(xì)菌時為什么進(jìn)行倒置培養(yǎng)? (3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小? (4)實(shí)驗(yàn)過程中如何防止其他微生物的污染? 解析:本題以實(shí)驗(yàn)材料作為背景考查微生物培養(yǎng)及相關(guān)實(shí)驗(yàn)分析和設(shè)計能力等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹瑥耐寥乐泻Y選獲得了只能降解利用苯酚的細(xì)菌菌株,說明苯酚是該種細(xì)菌的碳源。如何比較

16、不同菌株降解苯酚能力的大小?該問中應(yīng)注意自變量為不同菌株,苯酚的濃度是無關(guān)變量。由于苯酚顯酸性,不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同,pH值會不同??煽紤]用pH試紙來檢測作為因變量。實(shí)驗(yàn)中為防止微生物污染,應(yīng)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程保持無菌操作,如用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌等。 答案:(1)苯酚A.影響稀釋涂布平板法。 (2)④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源,⑤培養(yǎng)基中加入苯酚作為碳源稀釋涂布平板法或平板劃線法 以防止培養(yǎng)基冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。 (3)5支潔凈培養(yǎng)瓶一分別加入相同培養(yǎng)基(加等量的苯酚,用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培

17、養(yǎng)基的pH值,用苯酚調(diào)試使它們的pH值相等,苯酚是唯一的碳源)一分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種一在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同的時間一再用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值。苯酚顯酸性,不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同,5支;瓶內(nèi)培養(yǎng)基中的苯酚被分解的量不同,所以pH值不同。用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值,從而比較不同菌株降解苯酚能力的大小。 (4)從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實(shí)驗(yàn)過程保持無菌操作:a.對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)行清潔和消毒。b.將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種工具和培養(yǎng)基等進(jìn)行滅菌。c.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈的火焰附近進(jìn)行。d.實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)

18、滅菌處理的材料用具與周圍的物品接觸。 【實(shí)戰(zhàn)訓(xùn)練】 材料:飼料原料中的磷元素有相當(dāng)一部分存在于植酸中,豬、禽等動物由于缺乏有關(guān)酶,無法有效利用植酸,造成磷源浪費(fèi),而且植酸隨糞便排除后易造成環(huán)境有機(jī)磷污染。植酸酶能催化植酸水解成肌醇和磷酸,因此成為目前重要的飼料添加劑之一。 (09廣東卷)1.(10分)生物技術(shù)實(shí)踐 (1)商品化植酸酶主要來自微生物。在產(chǎn)酶菌株篩選過程中,常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板,植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生 ,可根據(jù)其大小選擇目的菌株,所得菌株需要進(jìn)一步測定植酸酶活性?;钚詼y定可以植酸鈉作為底物,活性可

19、用一定條件下單位時間 表示。 (2)利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如下圖: Ⅰ中的主要成分為 ;Ⅱ中包含多種酸酶等多種蛋白質(zhì)。請寫出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)。 (3)為建設(shè)基因工程菌,可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因。PCR反應(yīng)包含多次循環(huán),每次循環(huán)包括三步: 。反應(yīng)過程中打開模板DNA雙鏈的方法是 。 (4)除植酸酶外,微生物還應(yīng)用在 的生產(chǎn)中。 答案: (1)透明圈 植酸鈉的消耗量(肌醇和磷酸的生成量) (2)小分子雜質(zhì) 凝膠色譜法:根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小,

20、吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化。(或電泳法:根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷,分子大小等差異進(jìn)行純化。) (3)變性,復(fù)性,和延伸 加熱 (4)蛋白酶,脂肪酶,纖維素酶 解析:本題考查對微生物的分離和培養(yǎng),蛋白質(zhì)的純化,酶活性鑒定等知識,結(jié)合實(shí)際應(yīng)用。 (09遼寧、寧夏卷)2.【生物——選修1生物技術(shù)實(shí)踐】(15分) (1)在大腸桿菌培養(yǎng)過程中,除考慮營養(yǎng)條件外,還要考慮______、______和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、______、______等優(yōu)點(diǎn),因此常作為遺傳學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)材料。 (2)在微生物培養(yǎng)操作過程中,為防止雜菌污染,需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)

21、行________(消毒、滅菌);操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和______;靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅,其原因是紫外線能使蛋白質(zhì)變性,還能__________。 (3)若用稀釋涂布平板法計數(shù)大腸桿菌活菌的個數(shù),要想使所得估計值更接近實(shí)際值,除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外,還應(yīng)保證待測樣品稀釋的_______。 (4)通常,對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的____________。 (5)培養(yǎng)大腸桿菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是_________。 (6)若用大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn),使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過____

22、___處理后才能丟棄,以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。 答案: (1)溫度 酸堿度 易培養(yǎng) 生活周期短 (2)滅菌 消毒 損傷DNA的結(jié)構(gòu) (3)比例合適 (4)鑒定(或分類) (5)將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生. (6)滅菌 解析: (1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易培養(yǎng)、生活周期短 等優(yōu)點(diǎn),培養(yǎng)過程中,除考慮營養(yǎng)條件外,還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。 (2)滅菌使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,所以對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進(jìn)行滅菌,消毒使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有

23、害的微生物,操作者的雙手需要進(jìn)行清洗和消毒, 紫外線能使蛋白質(zhì)變性,還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。 (3)稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面,進(jìn)行培養(yǎng),應(yīng)保證樣品稀釋的比例適合。 (4)對獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形狀、大小等菌落特征對細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。 (5)培養(yǎng)大腸桿菌時,在接種前需要檢測培養(yǎng)基是否被污染。對于固體培養(yǎng)基應(yīng)采用的檢測方法是將未接種的培養(yǎng)基在適宜的溫度下放置適宜的時間,觀察培養(yǎng)基上是否有菌落產(chǎn)生。 (6)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會釋放一種強(qiáng)烈的毒素,并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀,使用過的培養(yǎng)基及其培養(yǎng)物必須經(jīng)過滅菌處理后

24、才能丟棄,以防止培養(yǎng)物的擴(kuò)散。 (09上海卷)3 .(9分)氯苯化合物是重要的有機(jī)化工原料,原因不易降解,會污染環(huán)境。某研究小組依照下列實(shí)驗(yàn)方案(圖1)篩選出能高效降解氯苯的微生物SP1菌,培養(yǎng)基配方如表1。 (1)配制Ⅱ號固體培養(yǎng)基時,除添加Ⅱ號液體培養(yǎng)基成分外,還應(yīng)添加1%的____________。 (2)培養(yǎng)基配制時,滅菌與調(diào)PH的先后順序是____________。 (3)從用途上來說,Ⅰ號培養(yǎng)基和Ⅱ號培養(yǎng)基分別屬于____________培養(yǎng)基和____________培養(yǎng)基。在Ⅱ號培養(yǎng)基中,為SP1菌提供氮源的成分是____________。 (4)在營養(yǎng)缺乏或環(huán)境

25、惡劣時,SP1的菌體會變成一個圓形的休眠體,這種休眠體被稱為 ____________。 (5)將SP1菌接種在含不同濃度氯苯的Ⅲ號培養(yǎng)液中培養(yǎng),得到生長曲線(如圖2)。從圖2可知SP1菌在____________培養(yǎng)條件下最早停止生長,其原因是____________。 答案: (1)瓊脂 (2)先調(diào)PH,后滅菌 (3)通用 選擇 硝酸銨 (4)芽孢 (5)20mg/L氯苯 硝酸最早耗盡 解析:本題主要考查微生物相關(guān)知識。 (1)固體培養(yǎng)基必須含有適量的瓊脂; (2)配置培養(yǎng)基時應(yīng)先調(diào)PH后滅菌; (3)Ⅰ號培養(yǎng)基是為了獲得更多的菌株,屬于通用培養(yǎng)基,

26、Ⅱ號培養(yǎng)基是為選擇出SP1菌株屬于選擇培養(yǎng)基,Ⅱ號培養(yǎng)基成分中含N物質(zhì)為硝酸銨,則應(yīng)由它為SP1菌株提供氮源; (4)在惡劣環(huán)境下一些菌體會形成芽孢休眠體,來度過不良環(huán)境; (5)SP1菌株是以氯苯為碳源,當(dāng)氯苯消耗盡菌株因缺少碳源而不能繼續(xù)生存,故氯苯含量越少,SP1菌株越早停止生長。 【名師點(diǎn)撥】 1.無菌技術(shù)及其常用的方法 滅菌是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物,包括芽孢和孢子。 常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線滅菌法等 在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán),因?yàn)椴僮鞯牡谝徊阶茻臃N環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在

27、的微生物污染培養(yǎng)物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端,從而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少,以便得到菌落。 劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種,避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后,要等其冷卻后再進(jìn)行劃線,以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。 2.微生物的純化培養(yǎng)的兩種方法:平板劃線法和稀釋涂布平板法 (1)平板劃線法 在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán),在劃線操作結(jié)束時,仍然需要灼燒接種環(huán)。在灼燒接種環(huán)之后,要等其冷卻后再進(jìn)行劃線,以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。由于劃線后,線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端開始,能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少,最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。 (2)稀釋涂布平板法 涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。每一個稀釋度下涂布三個平板作為重復(fù)組,不同稀釋度下涂布的平板形成對照組,且每個平板所用的樣液不超過0.1毫升。統(tǒng)計實(shí)驗(yàn)結(jié)果時注意選取菌落數(shù)介于30~300個之間的平板進(jìn)行計數(shù),且重復(fù)組結(jié)果要有相近性。

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