甘肅省武威市高中生物 第5章 DNA和蛋白質(zhì)技術(shù) 5.1 DNA的粗提取與鑒定課件1 新人教版選修1 .ppt

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1、DNA的粗提取與鑒定,通過本節(jié)課的學(xué)習(xí)我們要 知道DNA提取原理 據(jù)原理設(shè)計DNA提取方法 能對DNA進(jìn)行鑒定 掌握本實驗的基本操作方法,DNA粗提取與鑒定,基礎(chǔ)知識,提取DNA的方法,1、提取生物大分子的基本思路,選用一定的物理或化學(xué)方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子,2、生物大分子,主要指蛋白質(zhì)、酶和核酸,3、提取DNA的基本思路,利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分,DNA提取原理,資料一：1 . DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同 蛋白質(zhì)在0.14mol/L中的溶解度大，在高鹽濃度下溶解度小,2.DNA不溶于酒精，細(xì)胞中某

2、些蛋白質(zhì)則溶于酒精。 資料二: 洗滌劑瓦解細(xì)胞膜。 動物細(xì)胞吸水會脹破。,資料三 1.酶的專一性——蛋白酶水解蛋白質(zhì)而不會對DNA產(chǎn)生影響 。 2.蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。溫度值為60～80℃，因為該溫度值蛋白質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性。,資料四:DNA的鑒定原理,當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是DNA時，需要使用什么指示劑進(jìn)行鑒定？,在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。,注意:二苯胺要現(xiàn)配現(xiàn)用,使用時取4ml二苯胺加一滴已乙醛搖勻再倒入待測樣液,DNA的鑒定操作步驟,A、B試管中先分別加入物質(zhì)的量的濃度為2mol/L 的NaCl溶液5ml。 其中A試管加入DNA絲狀物，B不加絲狀物。 各加

3、入二苯胺4ml 試劑。 沸水中加熱5min。 待試管冷卻后，比較兩只試管中溶液顏色的變化。,實驗設(shè)計,據(jù)資料二思考:如何使DNA從細(xì)胞里釋放出來得到含有DNA的濾液? 利用什么原理可以使動物細(xì)胞或植物細(xì)胞破裂?,植物細(xì)胞可以加入一定量的食鹽和洗滌 劑。 動物細(xì)胞吸水會脹破。這樣能得到含 有DNA的濾液,食鹽和洗滌劑的用途分別是什么?,食鹽溶解DNA,洗滌劑溶解細(xì)胞膜,實驗設(shè)計,根據(jù)資料提供的DNA理化性質(zhì)，你能思考提取DNA的基本方法嗎？,例：根據(jù)蛋白質(zhì)、DNA熱穩(wěn)定性不同。溫度值為60～80℃，因為該溫度值蛋白質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性,方案一： 將濾液放在 的恒溫水浴箱中保溫10～

4、15min，注意嚴(yán)格控制溫度范圍，使 沉淀而 分子還未變性，可以將DNA與蛋白質(zhì)分離。,60～67℃,蛋白質(zhì),DNA,根據(jù)資料一思考,1.DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點？要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？,在0.14mol/L時溶解度最小；較高濃度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。 在溶解細(xì)胞中的DNA時，通?？蛇x用2mol/LNaCl溶液；將DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋NaCl溶液。,如何利用這一性質(zhì)設(shè)計提取方案,方案二：通過控制 NaCl 的濃度去除蛋白質(zhì) 30mL濾

5、液＋2mol/NaCl40mL→同方向攪拌，DNA溶解→加入蒸餾水0.14mol/NaCl→DNA析出→過濾得到過濾物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液,2采用DNA不溶于酒精的原理，可以達(dá)到什么目的？,將DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。,方案三： 直接向濾液中加入 ，反應(yīng)10～15min， 中的 能夠分解蛋白質(zhì)。 ？此方案利用了酶的什么特性？,嫩肉粉（木瓜蛋白酶）,嫩肉粉,蛋白酶,專一性,實驗拓展 你還能作些什么探究？,交流,1.動物組織和植物在提取方法上有什么不同? 為什么? 2、用同樣的方法提取時,哪種材料較好? 3、用同種材料同樣方法時洗滌劑與NaCl比例不同，有沒有影響？ 4．用玻璃燒杯和塑料燒杯哪種效果好？ 5、你有什么疑惑嗎？或者有更好的建議？？,結(jié)果分析與評價,1、你提取出了白色絲狀物嗎？用二苯胺鑒定的結(jié)果如何？ 2如果鑒定結(jié)果不出現(xiàn)藍(lán)色,討論可能是什么原因. 3、你能分析出粗提取的DNA可能含有哪些雜質(zhì)嗎？ 4.哪些因素會影響實驗效果?,從核DNA數(shù)目來看，豬38條，雞78條，哺乳動物血0條，獼猴桃58條，洋蔥16條，香蕉 33條，菠菜12條，大腸桿菌1條。你能分析你的實驗結(jié)果嗎？,