自動(dòng)生化分析技術(shù)ppt課件

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第五章 自動(dòng)生化分析技術(shù),1,自動(dòng)生化分析技術(shù)是指將生物化學(xué)分析過程中的取樣、加試劑、去干擾、混合、保溫反應(yīng)、自動(dòng)檢測、結(jié)果計(jì)算、數(shù)據(jù)處理和打印報(bào)告，以及實(shí)驗(yàn)后的清洗等步驟自動(dòng)化的分析檢測技術(shù)。,,2,自動(dòng)生化分析儀種類繁多，根據(jù)不同分類標(biāo)準(zhǔn)，可分成不同的種類。,3,半自動(dòng)分析儀：分析過程中的部分操作需手工進(jìn)行，而其他部分操作可由儀器自動(dòng)完成。分析速度慢，適用于樣品數(shù)量少、化驗(yàn)項(xiàng)目少的小型醫(yī)院。,全自動(dòng)分析儀：指從加樣至打印結(jié)果的全過程，均由儀器程序控制自動(dòng)完成。 適用于樣品數(shù)量多檢測項(xiàng)目多而且復(fù)雜的綜合性大醫(yī)院的臨床生化檢驗(yàn)室應(yīng)用。,4,5,,干片式：將測定一個(gè)項(xiàng)目所需的試劑固定在固相載體上，加上定量血清后，干片的背面即產(chǎn)生顏色反應(yīng)，用反射光度計(jì)檢測便可進(jìn)行定量分析。,6,7,8,,第二節(jié) 半自動(dòng)生化分析儀,一、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與設(shè)計(jì)原理 特點(diǎn)：體積小，結(jié)構(gòu)簡單，靈活性大，價(jià)格便宜；一般不受試劑、方法的限制。 工作原理：連續(xù)流動(dòng)式分析，其流動(dòng)管道中的特定位置有一微型比色杯稱為流動(dòng)比色杯，無不同比色杯之間的吸光度差異。,9,二、分析儀性能評價(jià),鍵盤 顯示器 多功能軟件 參數(shù)設(shè)置 全自動(dòng)方式波長選擇 結(jié)果存儲(chǔ) 測試方法類型 質(zhì)控 恒溫裝置 微量流動(dòng)比色杯 比路式泵 結(jié)果打印,10,三、操作程序及注意事項(xiàng) 1.開機(jī)前的準(zhǔn)備工作 2.開啟儀器 3.沖洗流動(dòng)比色池 4.設(shè)定儀器系統(tǒng)參數(shù) 5.設(shè)定質(zhì)控參數(shù) 6.設(shè)定試驗(yàn)參數(shù) 7.進(jìn)行試驗(yàn)操作 8.打印分析結(jié)果,11,注意事項(xiàng)： 1.由于檢測所加試劑及樣品量都很少，要特別注意取樣和加試劑的準(zhǔn)確性； 2.使用過程中，嚴(yán)禁吸入強(qiáng)酸試劑； 3.每次使用完畢，必須用蒸餾水沖洗比色杯和管道； 4.應(yīng)用連續(xù)檢測法檢測時(shí)，非線性反應(yīng)不得超過所定范圍（10%）；,12,5.做酶動(dòng)力學(xué)檢測時(shí)，要特別注意起始的吸光度值，應(yīng)注意每次試驗(yàn)檢測試劑空白； 6.如反復(fù)多次吸入蒸餾水后，不能調(diào)整零點(diǎn)或吸光度不穩(wěn)，應(yīng)使用清潔液浸泡比色池后再用水清洗； 7.儀器若長時(shí)間不使用，應(yīng)在一個(gè)月內(nèi)至少通電一次。,13,四、保養(yǎng)和維護(hù) 1.日常保養(yǎng)：每天工作結(jié)束之前進(jìn)行的儀器保養(yǎng)。 （1）拔去電源插頭后，用微濕的抹布輕抹儀器的外殼，注意不要讓水滴入儀器； （2）檢查打印機(jī)的電纜線是否接上，打印紙是否足夠第二天使用； （3）將廢液瓶中液體倒掉并進(jìn)行清洗； （4）按儀器規(guī)定要求用清潔劑和蒸餾水依次清洗管道及比色杯， 2.定期維護(hù)：吸光度的調(diào)零檢測或儀器部件的檢查與更新。,14,一、分立式分析儀 目前臨床實(shí)驗(yàn)室所用的大部分分析儀都屬于分立式，具有結(jié)構(gòu)簡單、檢測速度快等優(yōu)點(diǎn)。,日立7180型分析儀,15,分立式自動(dòng)生化分析儀是按手工操作的方式編排程序，并以有序的機(jī)械操作代替手工操作，用加樣探針將樣品加入各自的反應(yīng)杯中，試劑探針按一定時(shí)間自動(dòng)定量加入試劑，經(jīng)攪拌器充分混勻后，在一定條件下反應(yīng)，反應(yīng)后進(jìn)行比色測定。各環(huán)節(jié)用傳送帶連接，按順序依次操作。,16,,,全自動(dòng)生化分析儀工作流程圖,17,分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)包括：樣品盤（架）、取樣裝置、試劑室（瓶）、取液裝置、反應(yīng)盤、混勻裝置、溫控裝置、光學(xué)監(jiān)測系統(tǒng)、清洗系統(tǒng)和計(jì)算機(jī)控制系統(tǒng)等。,試劑盤2,試劑盤1,試劑針2,試劑針1,樣品針,樣品盤,反應(yīng)盤,攪拌器,清洗裝置,18,1.樣品盤或樣品架 樣品盤：放置一定數(shù)量的樣品，通過樣品盤的轉(zhuǎn)動(dòng)來控制不同樣品的進(jìn)樣。 樣品架：由步進(jìn)馬達(dá)控制移動(dòng)，以樣品架上的條形碼或底部編碼孔識(shí)別樣品架及樣品位置號(hào)。,傳送條帶狀樣品架,圓盤狀樣品架,19,2.取樣裝置：由注射器、步進(jìn)馬達(dá)或傳動(dòng)泵、加樣臂和樣品探針等組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯中。 取樣容量：一般2μl-35μl，步進(jìn)0.1μl不等 交叉污染：在吸取不同樣品時(shí)可產(chǎn)生攜帶交叉污染 防止措施：對樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行水沖洗 特殊功能： 液面感應(yīng)：取樣針尖上設(shè)有電子感應(yīng)器 防碰撞裝置：遇到阻礙時(shí)取樣針立即停止運(yùn)動(dòng)并報(bào)警 阻塞報(bào)警：某些取樣針有,20,21,3.試劑室：存儲(chǔ)試劑，大多數(shù)試劑室具有冷藏裝置，條形碼檢測系統(tǒng)。 （1）試劑轉(zhuǎn)盤式：放置一定形狀試劑瓶，數(shù)量不等，試劑盤轉(zhuǎn)動(dòng)可使某個(gè)試劑瓶到達(dá)特定的試劑吸取位置。 （2）試劑架形式：放置大容量任意形狀的試劑瓶，由每個(gè)試劑瓶內(nèi)引出一條試劑管路及其噴嘴，不同試劑間無交叉污染,22,①③試劑 ②④條碼閱讀器,試劑室,23,4.取液裝置：用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯。 取試劑量：一般為20-380μl，步進(jìn)1-5μl不等 交叉污染：吸取不同樣品時(shí)可產(chǎn)生攜帶交叉污染 防止措施：對樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行水沖洗 特殊功能： 液面感應(yīng) 防碰撞裝置 預(yù)熱試劑,24,5.反應(yīng)盤：由100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成，有的分析儀具有兩圈反應(yīng)杯 反應(yīng)盤作恒速圓周運(yùn)動(dòng)，轉(zhuǎn)動(dòng)到某些特定位置時(shí)短暫停止，在反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻 反應(yīng)杯：是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場所 由透光性好的硬質(zhì)玻璃或石英玻璃制成,25,26,6.混勻裝置：反應(yīng)杯里的樣品與試劑需要混勻 （1）混勻方式： 攪拌混勻：用攪拌棒，多數(shù) 超聲混勻：可杜絕攜帶污染，極大程度較少泡沫產(chǎn)生 （2）攪拌棒 攪拌棒形狀：扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面疏水材料 工作方式：旋轉(zhuǎn)式攪拌 震動(dòng)攪拌 防交叉污染：水洗,27,28,7.恒溫裝置：反應(yīng)杯需浸浴在恒溫環(huán)境中，一般固定在37℃，溫度波動(dòng)不能大于±0.1℃。 溫浴方式： （1）空氣浴恒溫：升溫速度快，不穩(wěn)定，受環(huán)境溫度影響大。 （2）水浴循環(huán)恒溫式：溫度穩(wěn)定，需加防腐劑保持水潔凈，并要定期更換循環(huán)水。 （3）恒溫液循環(huán)間接加熱式：兼具空氣和水浴的優(yōu)點(diǎn)，用一種無污染、惰性的不蒸發(fā)液體，用很小的縫隙的空氣把比色杯與恒溫液隔開。,29,30,8.清洗系統(tǒng) （1）樣品針、試劑針和攪拌棒的隨時(shí)清洗 在用于下一個(gè)樣品、試劑或反應(yīng)杯前需清洗一次，多數(shù)為去離子水沖洗 （2）反應(yīng)杯的隨時(shí)清洗 多數(shù)全自動(dòng)生化分析儀具有反應(yīng)杯清洗裝置 一個(gè)反應(yīng)杯內(nèi)的化學(xué)反應(yīng)和吸光度檢測結(jié)束后該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時(shí)沖洗 沖洗過程：吸液針吸去廢液→排液針注入清洗液1（堿性）→吸去廢液→水洗并吸干→注入清洗液2（酸性）→吸去廢液→水洗并吸干→擦干→吸光度檢查,31,32,反應(yīng)杯清洗裝置,33,9.光學(xué)監(jiān)測系統(tǒng)：由光源、單色器和信號(hào)檢測器組成 （1）光源：一般采用鹵素?zé)艋蝠逕?，?dāng)燈的發(fā)光強(qiáng)度不夠時(shí)，儀器會(huì)自動(dòng)報(bào)警，應(yīng)及時(shí)更換。 （2）單色器：多采用光柵分光，常在340-800nm范圍內(nèi)設(shè)10-12種固定的單色光 分光方式： 前分光：光源→分光元件→單色光→反應(yīng)液→檢測器 后分光：光源→反應(yīng)液→分光元件→單色光→檢測器 分光后取多個(gè)固定單色光同時(shí)通過各自的信號(hào)傳送通路傳輸?shù)綄?yīng)的信號(hào)檢測器 優(yōu)點(diǎn)：單色器中沒有轉(zhuǎn)動(dòng)部分提高了檢測精確到和速度 后分光的特點(diǎn)： （1）不需移動(dòng)儀器光學(xué)系統(tǒng)中的任何部件。 （2）可同時(shí)選用雙波長或多波長進(jìn)行測定，這樣可降低比色的噪聲。 （3）提高分析的精確度和減少故障率,34,35,（3）信號(hào)檢測系統(tǒng) 光信號(hào)→光敏二極管→電信號(hào)→放大電路→模數(shù)轉(zhuǎn)換電路→數(shù)字信號(hào)→微處理器 按各測定項(xiàng)目的分析參數(shù)選擇其波長的吸光度值 可選擇1或2個(gè)波長,36,37,二、干片式分析儀 應(yīng)用干化學(xué)技術(shù)將測定一個(gè)項(xiàng)目所需要的試劑固定在待定載體上，成為干片試劑。 測定方式： 在干片試劑上滴加液態(tài)樣品，載體上試劑溶解并與樣品中待測成分發(fā)生反應(yīng)，測定檢測信號(hào)的反射光強(qiáng)度 “干化學(xué)”技術(shù)是相對于經(jīng)典的“濕化學(xué)”而言，實(shí)際上干化學(xué)也是在一定潮濕狀態(tài)下的化學(xué)反應(yīng),38,干片式分析儀與配套試劑組成一個(gè)檢測系統(tǒng) 包括： 血糖儀 血氨測定儀 尿液化學(xué)分析儀 全自動(dòng)干化學(xué)分析儀：急診化驗(yàn)室常用 優(yōu)點(diǎn)：體積小、操作簡便。標(biāo)本用量少、檢測結(jié)果快速、準(zhǔn)確 缺點(diǎn)：成本偏高,39,根據(jù)試劑載體的復(fù)雜程度可將干化學(xué)分析技術(shù)分為雙層膜法和多層膜法，專用小型生化分析儀使用的試紙條為雙層膜法，大型全自動(dòng)生化分析儀的干片為多層膜法。多層膜法是目前生化檢驗(yàn)中最具代表性的干化學(xué)法。 多層膜法干片試劑的結(jié)構(gòu)從上到下共有四個(gè)功能層，依次為擴(kuò)散層、試劑層、顯色劑層、和支持層。,擴(kuò)散層,指示劑層,反射光,入射光,試劑層,支持層,40,1.擴(kuò)散層：快速吸附液體樣品并使之迅速。均勻地滲透，阻擋固體物質(zhì)和大分子物質(zhì)進(jìn)入試劑層，同時(shí)為反射光檢測提供反射背景。 2.試劑層：根據(jù)實(shí)際測定的需要，由數(shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)功能試劑層組成。實(shí)現(xiàn)試劑與待測物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。 3.指示劑層：包含染料或相似的指示劑，使反應(yīng)產(chǎn)物到達(dá)指示劑成后生成了有色化合物，其顏色變化與分析物濃度成比例。 4.支持層：由透明塑料制成，起支持其他層的作用，且允許光線百分之百透過。,41,三、離心式分析儀 運(yùn)行特點(diǎn)： 樣品和試劑分別置于轉(zhuǎn)盤中各自相應(yīng)的凹槽內(nèi)，樣品在外側(cè)，試劑在內(nèi)側(cè)，離心使內(nèi)側(cè)試劑受離心力甩向外側(cè)凹槽內(nèi)，與樣品相互混合發(fā)生反應(yīng)，最后流入轉(zhuǎn)盤外圈的比色凹槽內(nèi)由比色計(jì)檢測。 分析過程中，樣品與試劑的混合、反應(yīng)和檢測等每一步驟幾乎都是同時(shí)完成，故又稱“同步分析”。 缺點(diǎn)：同一個(gè)離心盤一般只能同時(shí)分析一個(gè)項(xiàng)目 反應(yīng)盤無自動(dòng)清洗功能 分析速度慢,42,離心式生化分析儀工作原理示意圖,43,四、連續(xù)流動(dòng)式分析儀 測定項(xiàng)目相同的各待測樣品與試劑混合后的化學(xué)反應(yīng)，均在同一管道中經(jīng)流動(dòng)過程完成，又稱管道式分析儀 。,單通道管道式自動(dòng)分析儀結(jié)構(gòu)示意圖,44,第四節(jié) 自動(dòng)生化分析方法和校準(zhǔn),一、自動(dòng)生化分析的方法 用自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行的生物化學(xué)物質(zhì)檢測的方法稱自動(dòng)生化分析方法。 1.終點(diǎn)法：被測物質(zhì)經(jīng)過一定反應(yīng)時(shí)間后，當(dāng)反應(yīng)達(dá)到平衡時(shí)測定吸光度，根據(jù)終點(diǎn)吸光度大小求出被測物濃度，稱為終點(diǎn)法。包括一點(diǎn)終點(diǎn)法和兩點(diǎn)終點(diǎn)法。,45,（1）一點(diǎn)終點(diǎn)法：指加入標(biāo)本和試劑后，當(dāng)反應(yīng)達(dá)到一定階段時(shí)（或終點(diǎn)）測定吸光度值計(jì)算待測物質(zhì)濃度的方法。主要用于總蛋白、白蛋白、血糖、甘油三酯和膽固醇等項(xiàng)目測定。 計(jì)算公式：CU=（待測吸光度AU-試劑空白吸光度AB）×K,K為校正系數(shù)。,一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線,46,（2）兩點(diǎn)終點(diǎn)法：主要用于雙試劑分析中，在第二試劑加入以前，選擇某一點(diǎn)讀取吸光度A1，相當(dāng)于樣品空白。追加第二試劑，反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)后選擇第二個(gè)點(diǎn)，讀取吸光度A2，兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果，稱兩點(diǎn)終點(diǎn)法。二點(diǎn)法又稱為二點(diǎn)終點(diǎn)法，使用雙試劑進(jìn)行分析時(shí)多采用二點(diǎn)法主要用于總膽紅素、直接膽紅素、甘油三酯和膽固醇等項(xiàng)目測定。,計(jì)算公式：CU=（待測吸光度A1-待測吸光度A2）×K,兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線,能有效地消除溶血、黃疸和脂濁等樣品本身光吸收造成的干擾。,47,兩點(diǎn)終點(diǎn)法的意義： 一定條件下可降低樣品對反應(yīng)或反應(yīng)本身的特異性于擾(主要指色度干擾溶血（hemolysis）、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）)。常采用雙試劑，多以加R2前某一點(diǎn)作測定始點(diǎn)；某些情況下，也可以加R2后一點(diǎn)作測定始點(diǎn)。,48,2.固定時(shí)間法：指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)測光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算，稱為固定時(shí)間法（fixed-time essay），其計(jì)算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同，為CU=(A2-A1)×K。主要用于Jaffe法測定肌酐。,固定時(shí)間法反應(yīng)曲線,49,固定時(shí)間法與兩點(diǎn)終點(diǎn)法的區(qū)別只是在： 測定讀數(shù)的末點(diǎn)不在反應(yīng)平衡區(qū)段，而是根據(jù)方法學(xué)選擇。如血清肌酐(苦味酸法)測定。,苦味酸法測定肌酐，反應(yīng)的最初30s內(nèi)，血清中快反應(yīng)干擾物（如微生物、丙酮酸、乙酰乙酸等）能與堿性苦味酸反應(yīng)；在第二個(gè)30s時(shí)堿性苦味酸主要與肌酐反應(yīng)，且此段時(shí)間－吸光度曲線的線性較好（故也可用連續(xù)監(jiān)測法測定肌酐）；在80～120s及其以后，堿性苦味可與蛋白質(zhì)以及其它慢反應(yīng)干擾物反應(yīng)。,50,,3.連續(xù)監(jiān)測法：根據(jù)酶促反應(yīng)的特點(diǎn)，當(dāng)?shù)孜餄舛茸銐虼髸r(shí)，當(dāng)酶促反應(yīng)達(dá)到最大時(shí)，單位時(shí)間內(nèi)底物的消耗量和產(chǎn)物的生成量維特不變，即單位時(shí)間內(nèi)吸光度變化值不變，在酶促反應(yīng)的零級反應(yīng)區(qū)內(nèi)選取兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，計(jì)算出出每分鐘吸光度變化，吸光度變化值同酶活性大小成正比。速率A法常應(yīng)用于酶活性的測定。 計(jì)算公式：CU=ΔA/min×K,單試劑連續(xù)監(jiān)測法,雙試劑連續(xù)監(jiān)測法,51,連續(xù)監(jiān)測法反應(yīng)曲線,52,二、自動(dòng)生化分析儀的校準(zhǔn) 生化分析儀應(yīng)定期進(jìn)行校準(zhǔn)（定標(biāo)），使儀器性能狀態(tài)符合儀器的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 1.用校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn) 用儀器廠商配套的試劑及校準(zhǔn)品進(jìn)行相應(yīng)測定項(xiàng)目的校準(zhǔn)，參考操作手冊，執(zhí)行校準(zhǔn)程序，當(dāng)已知濃度的校準(zhǔn)品吸光度測出后，儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算出校準(zhǔn)常數(shù)K，存儲(chǔ)于計(jì)算機(jī)中，供樣品測定時(shí)計(jì)算用。,53,用校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)應(yīng)注意： ①選擇合適的校準(zhǔn)品，以保證檢測結(jié)果的可溯源性； ②根據(jù)試驗(yàn)項(xiàng)目確定校準(zhǔn)的頻度，但每6個(gè)月至少進(jìn)行一次校準(zhǔn)； ③室內(nèi)質(zhì)控出現(xiàn)異常的趨勢或者偏移時(shí)的項(xiàng)目應(yīng)重新校準(zhǔn)； ④注意區(qū)別定值質(zhì)控血清和校準(zhǔn)品，絕不可用定值質(zhì)控血清代替校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn) 校準(zhǔn)方法可采用兩點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)。,54,2.用實(shí)際K值進(jìn)行校準(zhǔn) 多用于酶活性測定中，因酶活性尚無公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用，因而根據(jù)酶活性的國際單位定義得出酶活性的計(jì)算公式為：,U/L=ΔA/min×K,ε為理論摩爾吸光系數(shù)，由此計(jì)算的K值稱為理論K值。,55,采用理論K值得前提應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯的光徑準(zhǔn)確，溫度控制精確以及波長準(zhǔn)確等。 事實(shí)上由于各型分析儀的性能不一，特別是儀器的加樣系統(tǒng)、分光系統(tǒng)等方面的差異，以及溫度的影響，使儀器達(dá)不到理論上的最佳狀態(tài)，從而導(dǎo)致該儀器的實(shí)際K值與理論K值不一致，因而有必要獲得實(shí)際的摩爾吸光系數(shù)，然后用來計(jì)算的K值稱為實(shí)際K值。 使用實(shí)際K值應(yīng)注意：①不同的儀器，實(shí)際K值不同 ②同一儀器的不同時(shí)期，特別是儀器進(jìn)行了維修甚至更換了重要部件，實(shí)際K值不同 ③不同的檢測系統(tǒng)K值不同,56,第五節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的參數(shù)設(shè)置,儀器的參數(shù)就是儀器工作的指令，參數(shù)的正確設(shè)置和合理使用是儀器正常工作的前提條件。 封閉式生化分析儀的參數(shù)及開放式生化分析儀的有些參數(shù)由廠家提供無需設(shè)定。開放式生化分析儀的部分參數(shù)，應(yīng)在使用前根據(jù)各自實(shí)驗(yàn)室及各自使用儀器不同，正確設(shè)置。,57,（一）基本參數(shù)設(shè)置 1.試驗(yàn)名稱：指測定項(xiàng)目的標(biāo)示符，常以項(xiàng)目的英文縮寫來表示。 2.方法類型：自動(dòng)生化分析儀分析方法是在常規(guī)檢測方法的基礎(chǔ)上，借助儀器的機(jī)械和電子裝置做進(jìn)一步擴(kuò)展。 常用的方法一點(diǎn)終點(diǎn)法、兩點(diǎn)終點(diǎn)法、固定時(shí)間法、連續(xù)監(jiān)測法等。 根據(jù)被測物質(zhì)的檢測方法原理選擇其中相應(yīng)的分析方法。,58,3.反應(yīng)溫度：自動(dòng)生化分析儀通常設(shè)有25℃、30℃、37℃三種溫度，為了使反應(yīng)的溫度與體內(nèi)溫度一致，一般選用37℃。 4.測定波長：①單波長：當(dāng)測定體系中只有一種組分或混合溶液中待測組分的吸收峰與其他共存物質(zhì)的吸收峰無重疊時(shí)，可用單波長檢測。 ②自動(dòng)生化分析儀常用雙波長或多波長。根據(jù)光吸收曲線選擇被測物質(zhì)反應(yīng)產(chǎn)物最大吸收峰作為主波長，盡量避開或減少來自試劑空白和樣品空白的干擾；次波長的選擇原則是干擾物主波長的吸收與次波長吸光度越接近越好，測定時(shí)主波長的吸光度減去次波長的吸光度可消除溶血、濁度等干擾物的影響。,59,5.反應(yīng)方向：正向反應(yīng)和負(fù)向反應(yīng)，吸光度增加為正向反應(yīng)，吸光度下降為負(fù)向反應(yīng)。 6.樣品量和試劑量：樣品量與試劑量一般按照試劑說明書上的比例，并結(jié)合儀器的特性，即樣品和試劑最小加樣量及加樣范圍、最小反應(yīng)體積等，進(jìn)行設(shè)置。 亦可按比例縮減或重新設(shè)計(jì)，但需考慮儀器的檢測靈敏度及線性范圍，盡可能使稀釋倍數(shù)大些，以降低樣品中其他成分的影響。 7.總反應(yīng)容量：一般是180-350μl，總反應(yīng)容量太小，無法進(jìn)行吸光度測定。,60,8.樣品空白：終點(diǎn)法用，即依據(jù)是否需要扣除空白，選擇YES或NO。 9.孵育時(shí)間：終點(diǎn)法是樣品與試劑混勻開始至反應(yīng)終點(diǎn)為止的時(shí)間；固定時(shí)間法是第一吸光度選擇點(diǎn)開始至第二吸光度選擇點(diǎn)為止。 10.延遲時(shí)間：連續(xù)監(jiān)測法用，是樣品與反應(yīng)試劑（第二試劑）混勻至連續(xù)監(jiān)測期第一吸光度選擇點(diǎn)之間的時(shí)間。 11.連續(xù)監(jiān)測時(shí)間：在延遲時(shí)間之后即開始，一般為60-120s，不少于4個(gè)吸光度監(jiān)測點(diǎn)。,61,12.標(biāo)準(zhǔn)液濃度：已知線性較好者只需一個(gè)濃度，非線性方法學(xué)可5-6個(gè)濃度。 13.校準(zhǔn)K值或理論K值：通過校準(zhǔn)得到的K值為校準(zhǔn)K值，由計(jì)算得到的K值為理論K值。 14.計(jì)量單位 15.小數(shù)點(diǎn)位數(shù)：按有效數(shù)字設(shè)定。 16.線性范圍：用于設(shè)定吸光度的最大值和最小值。當(dāng)吸光度在線性范圍時(shí)，認(rèn)為吸光度和物質(zhì)濃度成正比。超過線性范圍應(yīng)增加樣品量或減少樣品量重測。,62,17.底物耗盡：在負(fù)反應(yīng)的酶活性測定中可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個(gè)吸光度下限。若低于此限時(shí)底物已太少，不足以維持零級反應(yīng)而導(dǎo)致檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。 18.參考值范圍：對超出此范圍的檢測結(jié)果，儀器會(huì)打印出提示。 質(zhì)控參數(shù) 通常每個(gè)項(xiàng)目要求至少兩個(gè)水平的質(zhì)控品。 每個(gè)質(zhì)控品的名稱、批號(hào)、每個(gè)檢測項(xiàng)目的靶值和標(biāo)準(zhǔn)差均需設(shè)置于自動(dòng)生化分析儀中。 （二）特殊分析參數(shù)設(shè)置,63,（二）特殊分析參數(shù) 試劑空白吸光度范圍 試劑空白速率 樣品預(yù)稀釋 前區(qū)檢查 方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù) 底物耗盡限值,64,第六節(jié) 自動(dòng)生化分析儀的性能指標(biāo),性能指標(biāo)是評價(jià)儀器的主要依據(jù)，正確評價(jià)儀器的性能，合理選用適合自己實(shí)驗(yàn)室的儀器，對每個(gè)實(shí)驗(yàn)室來說，都非常重要。 在自動(dòng)生化分析儀的發(fā)展過程中，儀器的結(jié)構(gòu)和性能不斷完善，功能和技術(shù)指標(biāo)不斷更新，自動(dòng)程度越來越高，檢測速度越來越快，檢測結(jié)果的精密度和準(zhǔn)確度也越來越高。,65,（一）自動(dòng)化程度 自動(dòng)化程度指儀器能夠獨(dú)立完成生化檢驗(yàn)操作程序的能力。一般而言，自動(dòng)化程度越高的儀器使用越簡單，但維護(hù)要求很高。 生化分析儀自化程度的高低，取決于儀器的計(jì)算機(jī)處理功能和軟件的智能化程度，表現(xiàn)為： 1.能否自動(dòng)處理樣品、自動(dòng)加樣、自動(dòng)清洗、自動(dòng)開關(guān)機(jī)等。 2.單位時(shí)間處理樣品的能力、可同步分析的項(xiàng)目數(shù)量等。 3.軟件支持功能是否強(qiáng)大，例如，是否有樣品針和試劑針的自動(dòng)報(bào)警功能、試劑剩余量的預(yù)示功能、數(shù)據(jù)分析和處理能力、故障自我診斷功能等。,66,（二）分析效率 分析效率是指在分析方法相同的情況下分析速度的快慢，反應(yīng)單位時(shí)間內(nèi)儀器可處理標(biāo)本的能力。 效率的高低取決于一次測定中可測樣品的多少和可測項(xiàng)目的多少。 不同類型的自動(dòng)生化分析儀，由于其結(jié)果和設(shè)計(jì)原理以及微機(jī)應(yīng)用程度不同，分析效率差別很大。,67,1.單通道自動(dòng)生化分析儀一次只能檢測一個(gè)項(xiàng)目，分析效率低；多通道自動(dòng)生化分析儀可同時(shí)檢測多個(gè)項(xiàng)目，分析效率較高。目前，全自動(dòng)生化分析儀多數(shù)采用同步分析設(shè)計(jì)原理，加樣品、加試劑、混勻、比色、清洗管道和比色杯同時(shí)進(jìn)行，大大提高了分析效率。 2.小型生化分析儀使用單針加樣和加試劑，速度較慢，分析效率較低。目前，全自動(dòng)生化分析儀使用樣品針和試劑針分別加樣加試劑，甚至使用多針采樣方式，使分析效率大大提高。,68,（三）準(zhǔn)確度和檢測精密度 準(zhǔn)確度是一臺(tái)分析儀最重要的性能指標(biāo)。是決定自動(dòng)生物化學(xué)分析儀檢測結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性的主要因素，其高低取決于分析儀個(gè)部件的加工精密度和精確的工作狀態(tài)。 吸樣、加試劑、溫控準(zhǔn)確度，以及光路系統(tǒng)如波長、檢測器準(zhǔn)確度和波譜帶寬等都能影響檢測準(zhǔn)確度，這些因素往往使相同項(xiàng)目的檢測結(jié)果向同一方向偏離。 吸樣精度以及樣品針、試劑針、反應(yīng)杯的交叉污染是影響精密度的主要因素。,69,1.目前自動(dòng)生化分析儀采用先進(jìn)的液體感應(yīng)探針，準(zhǔn)確吸樣，使樣品攜帶率低于0.5%。 2.特殊的不粘特力倫材料制作的攪拌裝置，采用旋轉(zhuǎn)的攪拌方式，可調(diào)整攪拌針的轉(zhuǎn)速和旋轉(zhuǎn)方式，不僅使混勻更充分，同時(shí)提高了抗交叉污染的能力。 3.探針的自動(dòng)清洗裝置，各種清洗方式的使用，反應(yīng)杯的溫水清洗、擦干、風(fēng)干等，使交叉污染的程度控制在最低限度，從而保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。 4.恒溫方式和測光方式不斷改進(jìn)，使自動(dòng)生化分析儀的分析準(zhǔn)確度達(dá)到相當(dāng)?shù)母叨取?70,（四）應(yīng)用范圍 應(yīng)用范圍是衡量自動(dòng)生化分析儀的一個(gè)綜合指標(biāo)，與儀器設(shè)計(jì)原理及結(jié)構(gòu)有關(guān)。 自動(dòng)生化分析儀的應(yīng)用范圍包括可測試的生化項(xiàng)目、反應(yīng)的類型及分析方法的種類等。 1.可測試的生化項(xiàng)目：應(yīng)用范圍廣的分析儀不僅能檢測多種臨床生化檢驗(yàn)指標(biāo)，而且還可進(jìn)行藥物濃度檢測和各種特種蛋白分析，微量元素測定等。,71,2.分析方法：除了分光光度法外，還能進(jìn)行比濁法、離子選擇電極法、熒光光度法等。既能用終點(diǎn)法，又可用連續(xù)檢測法測定。 3.雙波長或多波長光路設(shè)計(jì)：目前很多自動(dòng)生化分析儀采用了獨(dú)特的雙波長或多波長光路設(shè)計(jì)，可有效消除“背景噪聲”，排除樣品中溶血、脂血、黃疸及膽紅素等成分的干擾。 4.雙試劑功能：雙試劑功能的出現(xiàn)為消除樣品的溶血、脂血、黃疸及內(nèi)源性物質(zhì)的干擾提供了有利條件，使儀器的精密度和準(zhǔn)確度大大提高。,72,第六節(jié) 自動(dòng)生化分析儀試劑盒（片）的選擇和評價(jià),,73,,生化試劑盒的發(fā)展 生化試劑盒的種類 生化試劑盒性能的評價(jià)指標(biāo) 生化試劑盒性能的評價(jià)方法 生化試劑盒性能的選擇,74,生化試劑盒的發(fā)展,自配試劑向商品化試劑盒過度 液體試劑盒逐漸取代干粉試劑盒 單液體試劑盒向液體雙試劑發(fā)展 專用配套試劑盒,75,生化試劑盒的種類,一、干試劑： 干粉試劑 凍干試劑 片狀試劑 二、單液體試劑 適合于半自動(dòng)生化分析儀及小型自動(dòng)生化分析儀 三、雙液體試劑 按比例混合后等同于單液體試劑，但分開保存穩(wěn)定性明顯優(yōu)于單液體試劑。 樣品空白： 消除內(nèi)源性干擾 有些方法必須分兩步進(jìn)行,76,生化試劑盒性能的評價(jià)指標(biāo),準(zhǔn)確性：方法原理的先進(jìn)性、配方的優(yōu)化、原料 重復(fù)性：批內(nèi)重復(fù)性 批間重復(fù)性 穩(wěn)定性：試劑盒保存的穩(wěn)定性 工作液的穩(wěn)定性 實(shí)用性 ：儀器的適用性，方便性，價(jià)格,77,生化試劑盒性能的評價(jià)方法,試劑空白吸光度 試劑的質(zhì)量指標(biāo)之一 試劑空白吸光度變化速率： 底物水解過快 副反應(yīng)過多 時(shí)間進(jìn)程曲線 終點(diǎn)法要求 速率法要求 基質(zhì)效應(yīng) 準(zhǔn)確度 偏差、回收、對比 抗干擾能力 干擾試驗(yàn) 穩(wěn)定性觀察 校正K值變化 升溫加速實(shí)驗(yàn) 靈敏度 K值 合適的靈敏度 與 樣品量/試劑量 單波長/雙波長有關(guān),78,生化試劑盒的選擇,1．方法學(xué) 選用參考方法 WHO推薦的常規(guī)方法 已被檢驗(yàn)界所認(rèn)可的方法 2.選擇生產(chǎn)廠家 衛(wèi)生部的批準(zhǔn)文號(hào)、產(chǎn)品注冊證、檢驗(yàn)合格證 質(zhì)量信譽(yù)好、售后服務(wù)好、供貨及時(shí) 有完善的質(zhì)量管理體系和強(qiáng)大的技術(shù)支持 3.價(jià)格適宜 4.選擇劑型、包裝 5 .試劑的性能評價(jià)和比對實(shí)驗(yàn),79,THE END,,80,