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環(huán)丙沙星在魚體內(nèi)殘留的研究
葛虹
深圳市水產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心
518031
張楊 齊采霞
葛雷 陳霞
湖北省水產(chǎn)科學(xué)研究所
430071
環(huán)丙沙星是合成的第三代含氟的喹諾酮類抗菌素藥物 , 具有廣譜抗菌活性作用強、 體內(nèi)分布廣、 殺菌效果好、 對所有細(xì)菌的抗菌性均較諾氟沙星強 2-4 倍。因此近年來環(huán)丙沙星已廣泛的被應(yīng)用于動物產(chǎn)品養(yǎng)殖 , 特別是水產(chǎn)品養(yǎng)殖中對于致病性細(xì)菌病的治療。使用環(huán)丙沙星后 , 其藥物的殘留問題十分嚴(yán)重。環(huán)丙沙星對生物體的危害
2、是經(jīng)過藥物在魚體的殘留 , 又經(jīng)過食物鏈進入人體。攝入環(huán)丙沙星殘留較高的魚類會造成人體內(nèi)臟損傷 , 消化系統(tǒng)的出血 , 肝腎功能異常炎癥及衰竭 , 血液系統(tǒng)白血球減少癥 , 神經(jīng)系統(tǒng)的疾病和過敏癥也有發(fā)生。 環(huán)丙沙星在魚體中殘留研究較少 , 使用后殘留水平變化的報道不多。本文就環(huán)丙沙星在魚體給藥及停藥不同時間
的殘留水平做了初步研究 , 結(jié)果表明 , 環(huán)丙沙星在魚體內(nèi)的代謝速度較慢 , 富集后殘留在魚體有一個較長的過程。
本實驗安排了采用不同給藥期及不同休藥期環(huán)丙沙星藥餌連續(xù)投喂斑點叉尾鮰 , 檢測其魚體環(huán)丙沙星殘留量 , 并分析其代謝速度。同時做了一組空白和一組自行研
3、制的”腸炎靈”中藥餌投喂對照 , 進行養(yǎng)殖后魚肉樣本的檢測 , 魚體中環(huán)丙沙星殘留為未檢出。
1. 材料與方法
1.1 試驗材料
采用養(yǎng)殖場成批購進斑點叉尾鮰 ( 規(guī)格 60-100g/ 尾左右 ), 在室內(nèi)馴養(yǎng) 10天, 投
餌馴養(yǎng) , 剔除傷殘后分組 , 每組 12尾。
1.2 養(yǎng)殖藥餌試驗
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藥餌試驗組以投喂藥餌 7天、 14 天、 21 天、 25 天、 32 天以及停藥 7天、 14
天、 21 天、 25 天等分階段采集魚肉樣。
4、 中藥制劑組及空白對照組 , 隨試驗同時進行
投喂 , 按時采集魚肉。
1.2.1 藥餌
采用江西匯仁藥業(yè)公司生產(chǎn)的鹽酸環(huán)丙沙星片劑 ( 0 ． 25g/ 片 ) , 添加到魚飼料中 . 添加量為 1%,混勻 , 制成顆粒餌料 . 每天投喂 2 次。藥餌量為魚體重的 3%。
中藥組為投喂自行研制的”腸炎靈”中藥 , 為 3%的藥餌投喂。 ( 中藥餌為湖北省水產(chǎn)科學(xué)研究所承擔(dān)的省科技廳重大項目的研究成果 )
空白組僅喂普通餌料。
1.2.2 養(yǎng)殖時間
5月 13日至 5月 20日, 馴養(yǎng)期。設(shè)對照餌 ( 餌料配方相同
5、 ) 。
5月 20日開始投喂 , 實驗到 6月19日結(jié)束。實驗期間定時換水 , 定時充氧。實驗
期間各組實驗魚基本無死亡。
1.2.3 魚肉采集時間
5月 20日,
第一次采樣 ,
空白樣。同時開始投喂實驗餌。
5月 27日,
第一次采肉 ,
投藥餌 7天;
6月2日,
第二次采肉 ,
投藥 7天,
停藥 7天;
投藥 14天;
6月 9日 ,
第三次采肉 ,
投藥 14天,
停藥 7天;
投藥 7天,
停藥 14天; 投藥 21天。
6月 13日,
第四次采肉 ,
投藥 7天,
停
6、藥 18天 ;
6月 20日,
第五次采肉 ,
中藥組的魚肉樣對照 ; 投藥 7天,
停藥 25天 ; 投藥 32
天。
在各藥餌試驗組采肉樣的同時采集空白對照組。
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1.3 檢測方法與儀器
1.3.1 檢測方法
環(huán)丙沙星檢測方法按農(nóng)業(yè)部 公布的 236號文《12種動物性食品獸藥殘留檢測方
法》執(zhí)行。
本方法檢出限為 1.0 μg/kg 。
1.3.2 檢測儀器
采用 Agilent1100 液
7、相色譜儀 , 檢測器為熒光檢測儀 ( FLD) ,
EX=280nm, E m=280nm。
1.2.3 試劑
乙腈 , 甲醇均為色譜純 ;
正已烷 , 無水硫酸鈉 , 檸檬酸、 乙酸銨均為分析純。
1.2.4 色譜條件
色譜柱 : ODS C18柱( 4.6 150mm) ;
流動相 : 甲醇 : 檸檬酸 - 醋酸銨混合緩沖液 =25: 75;
流速 :1.2ml/min;
柱溫 : 40 ℃。
1.3.5 分析檢測步驟
取 5.0g 樣品 , 加入 1
8、0g無水硫酸鈉 , 加15ml酸化乙腈 , 用高速組織搗碎機勻漿 , 振搖 15min, 轉(zhuǎn)入離心管中以 4500 r/min 離心 10min, 取上清液。再用 15 ml酸化乙腈重復(fù)上述操作一次 , 合并上清液。上清液置于分液漏斗 , 加入 25ml
正已烷 , 烈劇振動 5min, 靜置分層 , 取下層乙腈層移入燒瓶 , 55 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至
干。用1ml流動相充分溶解殘渣。 經(jīng)0.45 μm微孔濾膜過濾, 供高效液相色譜儀測
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定。
1.3.6 實驗質(zhì)量控制
在
9、樣品測試時采用了加標(biāo)回收的方法。實驗回收率為 91％。
2．結(jié)果
2.1 投藥餌不同時間環(huán)丙沙星殘留結(jié)果見表 1。
表 1 投藥餌不同時間環(huán)丙沙星殘留 ( μg/kg)
投藥時間 ( 天 )
體內(nèi)殘留量 ( μg/kg)
7
1．64
14
61．88
21
47．00
32
71．20
2.2 投藥餌天后不同停藥期環(huán)丙沙星殘留量結(jié)果見表 2。
表 2 投藥餌 7 天后不同停藥期環(huán)丙沙星殘留 ( μg/kg)
投喂藥餌時間 ( 天)
停藥時間 ( 天 )
體內(nèi)殘留量 ( μg/kg)
7
7
8． 64
7
14
12． 08
7
18
8． 18
7
25
9． 32
14
7
9． 02
14
18
8． 18
2.3 對照組及中藥組魚體中環(huán)丙沙星殘留結(jié)果見表
3。
表3對照組及中藥組魚體中環(huán)丙沙星殘留
環(huán)丙沙星在魚體內(nèi)殘留的研究
