液相色譜法測(cè)奶制品中的防腐劑含量

單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,單擊此處編輯母版標(biāo)題樣式,單擊此處編輯母版文本樣式,第二級(jí),第三級(jí),第四級(jí),第五級(jí),*,主講人：馬靜,班級(jí)：食品,2,班,學(xué)號(hào)：,02,奶制品中防腐劑山梨酸和苯甲酸的測(cè)定,高效液相色譜法,主要內(nèi)容,實(shí)驗(yàn)背景,食品防腐劑可以抑制食品中的微生物的繁殖或殺滅食品中的微生物，苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鈉鹽是常用的食品防腐劑。但如果添加過量，會(huì)破壞食品中的營(yíng)養(yǎng)成分，不僅能破壞維生素,B1,還能使鈣形成不溶性物質(zhì),影響人體對(duì)鈣的吸收,同時(shí)對(duì)人的胃腸有刺激作用,過量食用還可引發(fā)癌癥。苯甲酸的毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于山梨酸,但因苯甲酸在酸性條件下抑菌范圍廣,以及價(jià)格低廉,仍作為主要防腐劑加入到食品中。但是苯甲酸是不允許在乳制品中添加的。然而近年來中國(guó)奶制品大多被檢出苯甲酸，雖然含量不高，但足以影響嬰兒等特殊人群的健康。,性狀與性能,山梨酸,苯甲酸,無色晶體粉末，相對(duì)分子質(zhì)量為：,112.13,，熔點(diǎn),132,135,，沸點(diǎn),228,，耐光耐熱性好，難溶于水，溶于乙醇，乙醚，花生油和丙酮。,白色晶體，相對(duì)分子質(zhì)量為,144.11,，熔點(diǎn),121.7,，沸點(diǎn),249.2,，常溫下難溶于水，溶于熱水，乙醇，氯仿，乙醚，丙酮，二硫化碳等。,食品中測(cè)定防腐劑方法的比較,食品中測(cè)定防腐劑方法的選擇,檢測(cè)苯甲酸和山梨酸一般采用薄層色譜法、氣相色譜法和液相色譜法。薄層色譜法是一種定性半定量的測(cè)定方法，雖然靈敏度高但重現(xiàn)性差。氣相色譜樣品處理工作量大、試劑毒性強(qiáng)，且該方法由于填充柱的吸附及柱效能差別較大，使標(biāo)準(zhǔn)系列線性差，最低檢出限較高。對(duì)于含量低或稀釋倍數(shù)大的樣品無法檢測(cè)，而液相色譜法樣品處理相對(duì)簡(jiǎn)單。另外，高效液相色譜因采用高壓輸液泵和小顆粒的填料，與經(jīng)典的液相色譜相比具有很高的柱效和分離能力。故本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法測(cè)定防腐劑的含量。,高效液相法的測(cè)定過程,儀器及試劑,儀器：高效液相色譜儀（紫外檢測(cè)器）微量進(jìn)樣器（,100um,）,超聲波發(fā)生器,;,溶劑過濾器,;,0.45,m,濾膜,;,容量瓶,;,恒溫水浴鍋,試劑：液態(tài)奶飲料；奶粉；甲醇（色譜純）；稀氨水（,1:1,）,氫氧化鈉溶液（,0.1mol/L,）,;,亞鐵氰化鉀溶液（,0.2mol/L,）,醋酸鋅溶液；磷酸鹽緩沖溶液；標(biāo)準(zhǔn)貯備液：苯甲酸,(1mg/mL),山梨酸（,1mg/mL,）,;,混合標(biāo)準(zhǔn)工作液（苯甲酸,+,山梨酸）,0.2mg/mL,山梨酸、苯甲酸的提取,置于,加入,溶解,加入,加入,靜置,液相色譜條件,柱子,:Eclipse XD13-C18,柱,(4.6mm150mm,，,5m);,流動(dòng)相,:,磷酸鹽緩沖溶液,-,甲醇,(V/V90:10);,等梯度洗脫,;,流速,0.3ml/min;,保留時(shí)間,15min;,柱溫,35;,進(jìn)樣量,20 ul;,紫外檢測(cè)波長(zhǎng),227nm,；,實(shí)驗(yàn)步驟,1.,混合標(biāo)準(zhǔn)液的配置,分別移取混合標(biāo)準(zhǔn)工作,0.00ml,1.00ml,2.00ml,3.00ml,4.00ml,5.00ml,5.00ml,于,6,個(gè)容量瓶（,10ml,），稀釋定容。,2.,流動(dòng)相處理,流動(dòng)相用,0.45 um,水相濾膜進(jìn)行減壓過濾和超聲脫氣處理,3.,開機(jī) 出現(xiàn)平直基線 進(jìn)樣,4.,定性分析,分別進(jìn)苯甲酸,山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液,10uL,確定各個(gè)峰保留時(shí)間,5.,標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定,分別吸取,60uL,的苯甲酸和山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)液進(jìn)樣，建立定量分析表,6.,樣品分析,取樣品,60uL,進(jìn)樣，記錄保留時(shí)間和峰面積,標(biāo)準(zhǔn)色譜圖,液相色譜儀使用注意事項(xiàng),(1),使用高效液相色譜級(jí)的溶劑與試劑，溶劑和水必須進(jìn)行過濾。,(2),必須對(duì)含有緩沖鹽的流動(dòng)相進(jìn)行過濾（,0.45um,）。,(3),流動(dòng)相使用前必須脫氣。,(4),改變流動(dòng)相時(shí)防止交叉污染。,(5),不要使用陳舊的流動(dòng)相，定期清洗流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶。,(6),定期清洗燒結(jié)不銹鋼吸濾頭。,(7),防止過高壓力沖擊色譜柱。,(8),每次使用后要沖洗干凈進(jìn)樣閥中殘留的樣品和緩沖鹽，防止無機(jī)鹽沉積和樣品微粒磨損閥轉(zhuǎn)子。,(9),嚴(yán)禁使用氣相色譜那樣的尖頭針進(jìn)樣。,(10),在注射針前加裝針式過濾器，防止樣品中的微粒進(jìn)入進(jìn)樣閥,(11),色譜柱不用卸下前,:a.,必須洗去緩沖液；,b.,防止產(chǎn)生微生物；,c.,用大于,10%,的有機(jī)溶劑充滿整個(gè)色譜柱；,d.,柱卸下后用柱堵頭將色譜柱首尾密封。,參考文獻(xiàn),1.,祝偉霞,魏蔚,楊冀州,劉亞風(fēng),高效液相色譜法測(cè)定乳飲料和奶制品中苯甲酸和山梨酸,中國(guó)國(guó)境衛(wèi)生檢疫雜志,2005,年,10,月第,28,卷第,5,期,2.,周毅剛,龍?zhí)K,王曉春,等,.,高效液相法測(cè)定食品中苯甲酸和山梨酸含量,.,中國(guó)醫(yī)師雜志,2001,13(3):184-188,3.,全國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì),.GB/T5009.29-2003,食品中山梨酸、蘋甲酸測(cè)測(cè)定方法,.,北京,:,中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2003,The End,