《實(shí)驗(yàn)9過氧化氫酶活性測(cè)定》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《實(shí)驗(yàn)9過氧化氫酶活性測(cè)定（11頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。
1、實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 一 實(shí) 驗(yàn) 目 的 掌 握 和 學(xué) 習(xí) 測(cè) 定 過 氧 化 氫 酶 活 性 的 原 理和 方 法 ；2 了 解 過 氧 化 氫 酶 的 作 用 。 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 二 實(shí) 驗(yàn) 原 理 過 氧 化 氫 酶 （ catalase） 屬 于 血 紅 蛋白 酶 ， 含 有 鐵 ， 它 能 催 化 過 氧 化 氫 分 解為 水 和 分 子 氧 ， 在 此 過 程 中 起 傳 遞 電 子的 作 用 ， 過 氧 化 氫 既 是 氧 化 劑 又 是 還 原劑 。 可 根 據(jù) H2O2的 消
2、 耗 量 或 O2的 生 成 量 測(cè)定 該 酶 活 力 大 小 。 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 在 反 應(yīng) 系 統(tǒng) 中 加 入 一 定 量 （ 反 應(yīng) 過 量 ） 的 過 氧 化氫 溶 液 ， 經(jīng) 酶 促 反 應(yīng) 后 ， 用 標(biāo) 準(zhǔn) 高 錳 酸 鉀 溶 液 （ 在 酸性 條 件 下 ） 滴 定 多 余 的 過 氧 化 氫 。 即 可 求 出 消 耗 的 H2O2的 量 。反應(yīng)式 5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 5O 2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 三 實(shí) 驗(yàn) 器 材n 10%H2SO4；n 0.2 mol/L p
3、H7.8磷 酸 緩 沖 液 ；n 0.1mol/L KMnO4標(biāo) 準(zhǔn) 液 ： 稱 取 KMnO4（ AR） 3.1605g， 用 新 煮沸 冷 卻 蒸 餾 水 配 制 成 1000mL， 再 用 0.1mol/L 草 酸 溶 液 標(biāo) 定 ； n 0.1mol/L H2O2： 取 30%H2O2 （ 17.6mol/L） 溶 液 5.68mL， 稀釋 至 1000mL， 用 標(biāo) 準(zhǔn) 0.02mol/L KMnO4溶 液 （ 在 酸 性 條 件 下 ）標(biāo) 定 。1 試 劑 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 2 材 料 :小 麥 葉 片3 主 要 設(shè) 備 ： 離 心 機(jī) ， 恒 溫 箱
4、， 酸式 滴 定 管 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 四 方 法 步 驟1、 酶液提取 取 小 麥 葉 片 2.5g加 入 pH7.8的 磷 酸 緩 沖 溶 液少 量 ， 研 磨 成 勻 漿 ， 轉(zhuǎn) 移 至 25ml容 量 瓶 中 ，用 該 緩 沖 液 沖 洗 研 缽 ， 并 將 沖 洗 液 轉(zhuǎn) 至 容量 瓶 中 ， 用 同 一 緩 沖 液 定 容 ， 4000轉(zhuǎn) 離 心15min， 上 清 液 即 為 過 氧 化 氫 酶 的 粗 提 液 。 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 2 、 滴 定 ： 取 50mL三 角 瓶 3個(gè) （ 2個(gè) 測(cè) 定 ， 另 1個(gè) 為 對(duì) 照
5、 ） ， 測(cè) 定 瓶 中 加 入 酶 液 2.5mL， 對(duì)照 加 煮 死 酶 液 2.5mL， 再 加 入 0.1mol/L H2O2 2.5mL ， 同 時(shí) 計(jì) 時(shí) ， 于 30 恒 溫 水 浴 中 保 溫10min， 立 即 加 入 10%H2SO42.5mL。 3、 用 0.1mol/L KMnO4標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 滴 定 ， 至 出 現(xiàn)粉 紅 色 （ 在 30s內(nèi) 不 消 失 ） 為 終 點(diǎn) 。 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 酶活性：每g鮮重樣品1min內(nèi)分解H 2O 2的mg數(shù)表示tVW 1.7VB)(A）mg/g.minOH過氧化氫酶活性（ S T22 式 中 ： A 對(duì) 照 KMnO4滴 定 mL數(shù) ； B 酶 反 應(yīng) 后 KMnO4滴 定 mL數(shù) ； VT 提 取 酶 液 總 量 （ mL） ； VS 反 應(yīng) 時(shí) 所 用 酶 液 量 （ mL） ； W 樣 品 鮮 重 （ g） ； T 反 應(yīng) 時(shí) 間 （ min） ； 1.7 1mL0.1mol/L KMnO 4相 當(dāng) 于 1.7mgH2O2。 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定 六 思 考 題 簡(jiǎn) 述 測(cè) 定 過 氧 化 氫 酶 的 生 理 意 義 ？下 周 實(shí) 驗(yàn) ： 實(shí) 驗(yàn) 36谷 物 種 子 萌 發(fā) 時(shí) 淀 粉 酶 活 力 的 測(cè) 定 實(shí) 驗(yàn) 9過 氧 化 氫 酶 活 性 測(cè) 定
實(shí)驗(yàn)9過氧化氫酶活性測(cè)定
