吐血奉獻(xiàn)2014年高考生物必備《基因工程和細(xì)胞工程》

《吐血奉獻(xiàn)2014年高考生物必備《基因工程和細(xì)胞工程》》由會(huì)員分享，可在線閱讀，更多相關(guān)《吐血奉獻(xiàn)2014年高考生物必備《基因工程和細(xì)胞工程》（13頁(yè)珍藏版）》請(qǐng)?jiān)谘b配圖網(wǎng)上搜索。

1、文檔供參考，可復(fù)制、編制，期待您的好評(píng)與關(guān)注！ 高考專(zhuān)題演練(十五)　基因工程和細(xì)胞工程 時(shí)間：45分鐘　 分值：100分 一、選擇題(每題5分，共50分) 1．(2013·江蘇單科)小鼠雜交瘤細(xì)胞表達(dá)的單克隆抗體用于人體試驗(yàn)時(shí)易引起過(guò)敏反應(yīng)，為了克服這個(gè)缺陷，可選擇性擴(kuò)增抗體的可變區(qū)基因(目的基因)后再重組表達(dá)。下列相關(guān)敘述正確的是(雙選)(　　) A．設(shè)計(jì)擴(kuò)增目的基因的引物時(shí)不必考慮表達(dá)載體的序列 B．用PCR方法擴(kuò)增目的基因時(shí)不必知道基因的全部序列 C．PCR體系中一定要添加從受體細(xì)胞中提取的DNA聚合酶 D．一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細(xì)胞 解析

2、　本題主要考查PCR技術(shù)的有關(guān)知識(shí)。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列設(shè)計(jì)引物，但不需知道目的基因的全部序列，需要考慮載體的序列；因PCR反應(yīng)在高溫條件下進(jìn)行，故反應(yīng)體系中需加入耐高溫的DNA聚合酶；因某些目的基因編碼的產(chǎn)物需經(jīng)特殊的加工修飾過(guò)程，故一定要根據(jù)目的基因編碼產(chǎn)物的特性選擇合適的受體細(xì)胞。 答案　BD 2．(2013·廣東理綜)從某海洋動(dòng)物中獲得一基因，其表達(dá)產(chǎn)物為一種抗菌性和溶血性均較強(qiáng)的多肽P1。目前在P1的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強(qiáng)但溶血性弱的多肽藥物，首先要做的是(　　) A．合成編碼目的肽的DNA片段 B．構(gòu)建含目的肽DN

3、A片段的表達(dá)載體 C．依據(jù)P1氨基酸序列設(shè)計(jì)多條模擬肽 D．篩選出具有優(yōu)良活性的模擬肽作為目的肽 解析　由題中信息“在Pl的基礎(chǔ)上研發(fā)抗菌性強(qiáng)但溶血性弱的多肽藥物”可推知本題考查蛋白質(zhì)工程的相關(guān)知識(shí)。根據(jù)蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列(基因)，可推知答案為C。 答案　C 3．(2013·江蘇單科)某種極具觀賞價(jià)值的蘭科珍稀花卉很難獲得成熟種子。為盡快推廣種植，可應(yīng)用多種技術(shù)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗，下列技術(shù)中不能選用的是(　　) A．利用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗 B．采用花粉粒組織培養(yǎng)獲得單倍體苗

4、C．采集幼芽嫁接到合適的其他種類(lèi)植物體上 D．采用幼葉、莖尖等部位的組織進(jìn)行組織培養(yǎng) 解析　本題考查對(duì)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗的多種技術(shù)手段的分析。為了使優(yōu)質(zhì)苗的生物性狀不發(fā)生性狀分離，可采用莖段扦插誘導(dǎo)生根技術(shù)快速育苗，也可采用將幼芽嫁接到合適的其他種類(lèi)植物體上的方法或用莖尖或幼葉等部位的組織進(jìn)行植物組織培養(yǎng)獲得大量?jī)?yōu)質(zhì)苗；花粉粒是減數(shù)分裂的產(chǎn)物，利用花粉粒離體培養(yǎng)得到的是單倍體苗，其高度不育，且會(huì)發(fā)生性狀分離，因此B項(xiàng)方案不能選用。 答案　B 4．(2013·重慶理綜)某興趣小組擬用組織培養(yǎng)繁殖一種名貴花卉，其技術(shù)路線為“取材→消毒→愈傷組織培養(yǎng)→出芽→生根→移栽”。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　

5、　) A．消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害 B．在愈傷組織培養(yǎng)中加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，可獲得染色體加倍的細(xì)胞 C．出芽是細(xì)胞再分化的結(jié)果，受基因選擇性表達(dá)的調(diào)控 D．生根時(shí)，培養(yǎng)基通常應(yīng)含α－萘乙酸等生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑 解析　本題主要考查植物組織培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。在愈傷組織中，因植物細(xì)胞含有細(xì)胞壁，阻礙了細(xì)胞融合，所以此時(shí)加入細(xì)胞融合的誘導(dǎo)劑，不能獲得染色體加倍的細(xì)胞；消毒的原則是既殺死材料表面的微生物，又減少消毒劑對(duì)細(xì)胞的傷害；愈傷組織出芽是細(xì)胞分化的結(jié)果，而細(xì)胞分化的實(shí)質(zhì)是基因的選擇性表達(dá)；生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素，生根時(shí)

6、，培養(yǎng)基通常含有α－萘乙酸等生長(zhǎng)素類(lèi)調(diào)節(jié)劑。故B項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案　B 5．(2013·浙江理綜)實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞培養(yǎng)(非克隆培養(yǎng))的基本過(guò)程如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．甲過(guò)程需要對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒 B．乙過(guò)程對(duì)皮膚組織可用胰蛋白酶消化 C．丙過(guò)程得到的細(xì)胞大多具有異倍體核型 D．丁過(guò)程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性 解析　本題主要考查了動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的相關(guān)知識(shí)。取小鼠皮膚組織進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)需對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行消毒；通過(guò)胰蛋白酶消化皮膚組織可獲得皮膚細(xì)胞；丙過(guò)程為最初的傳代培養(yǎng)，得到的細(xì)胞大多具有正常二倍體核型；來(lái)源于多個(gè)細(xì)胞的非克隆培養(yǎng)所得到的細(xì)胞系具有異質(zhì)性，該實(shí)驗(yàn)小鼠皮膚細(xì)胞屬于非

7、克隆培養(yǎng)，丁過(guò)程得到的細(xì)胞具有異質(zhì)性。 答案　C 6．(2013·重慶理綜)如圖是單克隆抗體制備流程的簡(jiǎn)明示意圖。下列有關(guān)敘述，正確的是(　　) A．①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞 B．②中使用胰蛋白酶有利于雜交瘤細(xì)胞的形成 C．③同時(shí)具有脾臟細(xì)胞和鼠骨髓瘤細(xì)胞的特性 D．④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群 解析　本題主要考查單克隆抗體制備的相關(guān)知識(shí)。①是從已免疫的小鼠脾臟中獲得的漿細(xì)胞；②中使用聚乙二醇或滅活的病毒等，有利于雜交瘤細(xì)胞的形成；③同時(shí)具有漿細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的特性；④是經(jīng)篩選培養(yǎng)獲得的能分泌特異性抗體的細(xì)胞群。故D項(xiàng)正確。 答案　D

8、7．芥酸會(huì)降低菜籽的品質(zhì)。油菜有兩對(duì)獨(dú)立遺傳的等位基因(H和h，G和g)控制菜籽的芥酸含量，下圖是獲得低芥酸油菜新品種(HHGG)的技術(shù)路線。已知油菜單個(gè)花藥由花藥壁(2n)及大量花粉(n)等組分組成，這些組分的細(xì)胞都具有全能性。 據(jù)圖分析，下列敘述錯(cuò)誤的是(　　) A．①、②兩過(guò)程均需要植物激素來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞脫分化 B．與④過(guò)程相比，③過(guò)程可能會(huì)產(chǎn)生二倍體再生植株 C．圖中三種途徑中，利用花粉培養(yǎng)篩選低芥酸植株(HHGG)的效率最高 D．F1減數(shù)分裂時(shí)，H基因所在染色體會(huì)與G基因所在染色體發(fā)生聯(lián)會(huì) 解析?、佗趦蛇^(guò)程是脫分化過(guò)程，培養(yǎng)基中需要加入生長(zhǎng)素類(lèi)和細(xì)胞分裂素類(lèi)激素來(lái)誘導(dǎo)細(xì)胞

9、脫分化，故A項(xiàng)正確；③過(guò)程是利用植物花藥離體培養(yǎng)獲得植株的過(guò)程，其中花藥壁細(xì)胞屬于正常的二倍體體細(xì)胞，由其獲得的植株為二倍體正常植株，④過(guò)程是利用花粉粒離體培養(yǎng)獲得的，花粉細(xì)胞只有一個(gè)染色體組，由其獲得的植株為單倍體植株，故B項(xiàng)正確；圖中的三種途徑中，利用花粉培養(yǎng)獲得的只有四種品種，比例為1：1：1：1，易篩選出所需品種，故C項(xiàng)正確；H、h和G、g分別是兩對(duì)獨(dú)立遺傳的等位基因，故兩者是位于非同源染色體上的，在減數(shù)分裂時(shí)，H和G基因所在的染色體不會(huì)發(fā)生聯(lián)會(huì)，故D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案　D 8．天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花，這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B，而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列已知的基因B?，F(xiàn)用基

10、因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰。下列操作正確的是(　　) A．提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA，再擴(kuò)增基因B B．利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B C．利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞 D．將基因B直接導(dǎo)入大腸桿菌，然后感染并轉(zhuǎn)入玫瑰細(xì)胞 解析　可以利用mRNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄合成目的基因后再進(jìn)一步擴(kuò)增，A項(xiàng)正確；因?yàn)殚_(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛基因B的序列是已知的，所以該目的基因宜采用化學(xué)方法合成或用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增，而不是從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取，B項(xiàng)錯(cuò)誤；目的基因必須與運(yùn)載體結(jié)合后才能導(dǎo)入受體細(xì)胞，且需要DNA連接酶縫合，C、

11、D項(xiàng)錯(cuò)誤。 答案　A 9．下列是應(yīng)用動(dòng)物細(xì)胞工程獲取單克隆抗X抗體的具體操作步驟，其中對(duì)單克隆抗體制備的相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是(　　) ①?gòu)幕脊撬枇龅男∈篌w內(nèi)獲取骨髓瘤細(xì)胞?、趯抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗X抗體的B淋巴細(xì)胞?、蹖㈦s交瘤細(xì)胞注入小鼠腹腔內(nèi)培養(yǎng)?、芎Y選出能產(chǎn)生抗X抗體的雜交瘤細(xì)胞?、堇眠x擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞?、迯男∈蟾顾刑崛】贵w?、呃么偌?xì)胞融合因子促使細(xì)胞融合 A．實(shí)驗(yàn)順序應(yīng)該是①②⑦⑤④③⑥ B．③過(guò)程產(chǎn)生多個(gè)雜交瘤細(xì)胞的過(guò)程稱(chēng)為克隆 C．⑦過(guò)程獲得的細(xì)胞均可無(wú)限增殖 D．利用細(xì)胞融合生產(chǎn)單克隆抗體的過(guò)程中通常要經(jīng)過(guò)兩次篩選 解析　利用促細(xì)胞融合因子促使

12、細(xì)胞融合，可獲得多種融合細(xì)胞。其中B淋巴細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞融合的細(xì)胞不能無(wú)限增殖。 答案　C 10．(2013·杭州模擬)下圖示植物組織培養(yǎng)過(guò)程。據(jù)圖分析下列敘述正確的是(　　) A．⑤植株根尖細(xì)胞的全能性比①植株根尖細(xì)胞的強(qiáng) B．②試管的培養(yǎng)基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，不含有有機(jī)物 C．③試管中的細(xì)胞能進(jìn)行減數(shù)分裂 D．調(diào)節(jié)④培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例可誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的植物器官 解析?、葜仓旮饧?xì)胞的全能性與①植株根尖細(xì)胞相同；②試管的培養(yǎng)基中含有植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和有機(jī)物等；③試管中的細(xì)胞進(jìn)行的分裂方式為有絲分裂；調(diào)節(jié)④培養(yǎng)基中植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的比例，可誘導(dǎo)產(chǎn)生根或芽。 答案　D

13、 二、非選擇題(共50分) 11．(10分)(2013·安徽馬鞍山第一次質(zhì)檢)絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因，可以合成一種抗TMV蛋白，葉片對(duì)TMV具有抗感染性。煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物，由于TMV的感染會(huì)導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如下圖所示。 (1)科學(xué)家首先從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因。圖中①過(guò)程表示________。 (2)由圖分析，在過(guò)程③構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是________基因，重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的方法是________。 (3)在過(guò)程⑤培養(yǎng)基中除含有卡那霉素

14、及植物必需的各種營(yíng)養(yǎng)成分外，還必須添加________，以保證受體細(xì)胞能培養(yǎng)成再生植株。 (4)過(guò)程⑥可采取________的方法，檢測(cè)植株是否合成了抗TMV蛋白。在個(gè)體水平的鑒定過(guò)程中，可通過(guò)__________的方法來(lái)確定植株是否具有抗性。 解析　(1)由圖可知，①表示逆轉(zhuǎn)錄(或反轉(zhuǎn)錄)。(2)由圖示⑤培養(yǎng)基中含有卡那霉素可知，Ti質(zhì)粒的標(biāo)記基因是卡那霉素抗性基因，將基因表達(dá)載體(重組Ti質(zhì)粒)導(dǎo)入植物細(xì)胞中常用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。(3)將受體細(xì)胞培養(yǎng)成再生植株需要進(jìn)行植物組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基中除含有卡那霉素及植物必需的各種營(yíng)養(yǎng)成分外，還必須添加植物激素。(4)通過(guò)抗原—抗體雜交的方法，

15、檢測(cè)植株是否合成了抗TMV蛋白，在個(gè)體水平上，通過(guò)接種煙草花葉病毒的方法可以確定植株是否具有抗性。 答案　(1)逆轉(zhuǎn)錄 (2)卡那霉素抗性　農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法 (3)植物激素 (4)抗原—抗體雜交　接種煙草花葉病毒 12．(12分)(2013·天津理綜)花椰菜易受黑腐病菌的危害而患黑腐病。野生黑芥具有黑腐病的抗性基因。用一定劑量的紫外線處理黑芥原生質(zhì)體可使其染色體片段化，并喪失再生能力。再利用此原生質(zhì)體作為部分遺傳物質(zhì)的供體與完整的花椰菜原生質(zhì)體融合，以獲得抗黑腐病雜種植株。流程如下圖。據(jù)圖回答下列問(wèn)題： (1)過(guò)程①所需的酶是______________。 (2)過(guò)程②后，在顯微

16、鏡下觀察融合的活細(xì)胞中有供體的________存在，這一特征可作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。 (3)原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇以保持一定的滲透壓，其作用是______________。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)________再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。 (4)若分析再生植株的染色體變異類(lèi)型，應(yīng)剪取再生植株和________植株的根尖，通過(guò)________、________、染色和制片等過(guò)程制成裝片，然后在顯微鏡下觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。 (5)采用特異性引物對(duì)花椰菜和黑芥基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到兩親本的差異性條帶，可用于雜種植株的鑒定。下圖是用該引物對(duì)雙親及再生植株1

17、～4進(jìn)行PCR擴(kuò)增的結(jié)果。據(jù)圖判斷，再生植株1～4中一定是雜種植株的有________。 (6)對(duì)雜種植株進(jìn)行________接種實(shí)驗(yàn)，可篩選出具有高抗性的雜種植株。 解析　本題考查植物細(xì)胞工程、染色體變異的實(shí)驗(yàn)鑒定以及高抗性的雜種植株的篩選等相關(guān)知識(shí)。(1)去除細(xì)胞壁獲得原生質(zhì)體需要用纖維素酶和果膠酶處理。(2)葉肉細(xì)胞含有葉綠體，因此通過(guò)PEG誘導(dǎo)融合的雜種細(xì)胞應(yīng)含有葉綠體，以此作為初步篩選雜種細(xì)胞的標(biāo)志。(3)原生質(zhì)體失去了細(xì)胞壁的保護(hù)作用，因此原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，使原生質(zhì)體處于等滲溶液中，以維持原生質(zhì)體正常形態(tài)。原生質(zhì)體經(jīng)過(guò)細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成

18、愈傷組織。(4)要判斷染色體變異的類(lèi)型，應(yīng)剪取再生植株、花椰菜和黑芥植株的根尖，通過(guò)解離、漂洗、染色、制片等過(guò)程制成裝片，然后進(jìn)行顯微觀察比較染色體的形態(tài)和數(shù)目。(5)根據(jù)兩親本的差異性條帶，可知再生植株1、2和4既有花椰菜的條帶，又有黑芥的條帶，因此再生植株1、2和4一定為雜種植株。(6)要篩選出高抗性的雜種植株，應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)的病原體接種實(shí)驗(yàn)，即接種黑腐病菌。 答案　(1)纖維素酶和果膠酶 (2)葉綠體 (3)保持原生質(zhì)體完整性　細(xì)胞壁 (4)雙親(或花椰菜和黑芥)　解離　漂洗 (5)1、2、4 (6)黑腐病菌 13．(18分)(2013·海南單科)單純皰疹病毒I型(HSV－1)

19、可引起水泡性口唇炎。利用雜交瘤技術(shù)制備出抗HSV－1的單克隆抗體可快速檢測(cè)HSV－1。 回答下列問(wèn)題： (1)在制備抗HSV－1的單克隆抗體的過(guò)程中，先給小鼠注射一種純化的HSV－l蛋白，一段時(shí)間后，若小鼠血清中抗________的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性，說(shuō)明小鼠體內(nèi)產(chǎn)生了________反應(yīng)，再?gòu)男∈蟮腳_______中獲取B淋巴細(xì)胞。將該B淋巴細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合，再經(jīng)過(guò)篩選、檢測(cè)，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，該細(xì)胞具有的特點(diǎn)是______________________________。 (2)若要大量制備抗該蛋白的單克隆抗體，可將該雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的________中

20、使其增殖，再?gòu)腳_______中提取、純化獲得。 (3)通過(guò)上述方法得到的單克隆抗體可準(zhǔn)確地識(shí)別這種HSV－1蛋白，其原因是該抗體具有________和________等特性。 解析　(1)制備單克隆抗體時(shí)，需要先給小鼠注射特定抗原(HSV－1蛋白)，當(dāng)小鼠血清中抗HSV－1蛋白的抗體檢測(cè)呈陽(yáng)性時(shí)，就可從小鼠脾臟中獲取B淋巴細(xì)胞，將B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，經(jīng)過(guò)篩選和克隆化培養(yǎng)，最終獲得既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生專(zhuān)一抗體的雜交瘤細(xì)胞。(2)單克隆抗體的獲取有兩條途徑，一是從體外細(xì)胞培養(yǎng)液中提純獲得，二是將雜交瘤細(xì)胞注射到小鼠的腹腔中使其增殖，再?gòu)母顾刑崛　⒓兓@得。(3)單克隆抗體具有特異性

21、強(qiáng)、靈敏度高、純度高等特點(diǎn)。 答案　(1) HSV－1蛋白　體液免疫(其他合理答案也可)　脾臟(其他合理答案也可)　骨髓瘤　無(wú)限增殖且產(chǎn)生專(zhuān)一抗體(其他合理答案也可) (2)腹腔　腹水 (3)純度高 　特異性強(qiáng)(其他合理答案也可) 14．(10分)圖①表示含有目的基因D的DNA片段長(zhǎng)度(bp即堿基對(duì))和部分堿基序列，圖②表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識(shí)別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。請(qǐng)回答下列問(wèn)題： (1)圖①的一條脫氧核苷酸鏈中相鄰兩個(gè)堿基之間依次由

22、________________________連接。 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖①中DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長(zhǎng)度為_(kāi)___________________。 (3)若圖①中虛線方框內(nèi)的堿基對(duì)被T-A堿基對(duì)替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子分離出圖①及其對(duì)應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長(zhǎng)度的DNA片段。 (4)若將圖②中質(zhì)粒和目的基因D通過(guò)同種限制酶處理后進(jìn)行連接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是__________。在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培

23、養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。經(jīng)檢測(cè)，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中的目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是______________________________________。 解析　(1)在一條脫氧核苷酸鏈上，相鄰兩個(gè)脫氧核苷酸之間通過(guò)3,5-磷酸二酯鍵相連，所以相鄰堿基之間通過(guò)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖相連接。(2)SmaⅠ識(shí)別并切割的序列為CCC↓GGG，所以產(chǎn)生的末端為平末端，經(jīng)SmaⅠ切割后，DNA片段會(huì)形成三個(gè)小的DNA片段，按切割位點(diǎn)計(jì)算分別是：534 bp＋3 bp＝537 bp；796 bp－3 bp－3 bp＝790 bp；658 bp＋3 bp＝661 bp。(3)雜合子基

24、因型為Dd。用SmaⅠ切割基因D，會(huì)形成537 bp、790 bp、661 bp三種類(lèi)型。題圖①中虛線方框內(nèi)C—G被T—A替換，失去了一個(gè)酶切位點(diǎn)，則會(huì)被切割成534 bp＋796 bp－3 bp＝1 327 bp，和658 bp＋3 bp＝661 bp。所以一共會(huì)得到4種類(lèi)型的片段。(4)如果要獲得完整的目的基因可用BamHⅠ和MboⅠ切割，但是MboⅠ會(huì)破壞抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，質(zhì)粒會(huì)失去標(biāo)記基因，無(wú)法篩選，所以只能用BamHⅠ切割。用BamHⅠ切割后破壞了抗生素A抗性基因，所以質(zhì)粒上存在的標(biāo)記基因是抗生素B抗性基因，因此，在加入抗生素B的培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)、篩選，經(jīng)過(guò)同種限制酶切割后會(huì)產(chǎn)生相同的末端，部分目的基因與質(zhì)粒反向連接導(dǎo)致基因無(wú)法正常表達(dá)。 答案　(1)脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2)平　537 bp、790 bp、661 bp (3)4 (4)BamHⅠ　抗生素B　同種限制酶切割形成的末端相同，部分目的基因D與質(zhì)粒反向連接 13 / 13