分子生物學 期末考試復習題.doc

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一、判斷題 1、原核細胞和真核細胞的差別之一是前者無染色體結構，后者有染色體結構。（ √） 2、基因組是指某一種生物所具有的全部基因的總稱。（ ） 3、真核生物基因的大小通常是外顯子的數目和長度決定的。（ ） 4、在所有的真核生物中，內含子的長度和序列是高度保守的。（ ） 5、酵母的基因普遍要比人的基因小，因此，酵母基因組編碼的蛋白質普遍要比人基因組編碼的蛋白質要小。（ ） 6、在自由的四種核苷酸混合溶液中，任何堿基之間都可以形成氫鍵而發(fā)生配對。 7、PCR只能擴增雙鏈DNA，不能擴增單鏈DNA。（ ） 8、富含GC的DNA雙螺旋比富含AT的DNA雙螺旋穩(wěn)定的主要原因是GC堿基對比AT堿基對多一個氫鍵。（ √ ） 9、用氯化銫梯度超離心純化質粒DNA時，蛋白質在離心管的最上部，RNA懸浮在中間，而DNA沉在底部。（ ） 10、mRNA的剪接總是產生套索結構。（ ） 11、岡崎片段只由DNA組成。（ ） 12、端粒酶帶有自己的DNA模板。（ ） 13、細胞內的DNA復制既需要DNA聚合酶，也需要RNA聚合酶。（ ） 14、同源重組和位點特異性重組都形成Holliday中間體結構。（ √ ） 15、與tRNA相連的氨基酸本身在決定何種氨基酸參入到正在延伸的肽鏈上不起任何作用。（ √ ） 16、轉座重組既可以導致基因的失活，也可以導致基因的激活。（ √ ） 17、只有用相同的限制性酶獲得的DNA片段末端才能用DNA連接酶連接起來。 18、在一個基因的編碼區(qū)內發(fā)生的核苷酸的插入或缺失總是導致移碼突變。 19、PCR和末端終止法測序都需要RNA引物。（ ） 20、只有用相同的限制性酶獲得的DNA片段末端才能用DNA連接酶連接起來。 21、管家基因在細胞里始終表達，因此沒有也不需要對其表達進行調控。（ ） 22、內含子在剪接反應中被切除，所以一種蛋白質的基因如果在內含子內發(fā)生突變，一般不會影響到這種蛋白質的功能。（√ ） 23、限制性酶只能切開雙鏈DNA。（ √ ） 24、RNA病毒因為無DNA基因組，其生活史省去了從DNA到RNA的過程。 25、細菌中弱化子的作用方式是在翻譯水平來控制轉錄。（ ） 26、單核苷酸多態(tài)性（SNP）可導致限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）。√ 27、激活蛋白參與正調控，其濃度越高，激活基因表達的效果就越好。（ ） 28、CCGG和GGCC序列受同一種限制性酶的識別、切割。（ ） 29、如果將細胞質中的mRNA導入到線粒體基質內翻譯，通常得不到有功能的蛋白質產物。（ ） 30、內含子大都是遺傳“垃圾”，所以在RNA剪接的時候不必進行精確的切除。 31、密碼子第一位堿基發(fā)生的突變要比第三位發(fā)生的突變的危害要大得多。 √ 32、抑制轉肽酶活性的抗生素通常與核糖體的大亞基結合。（ √ ） 33、根據擺動法則，tRNA上的反密碼子在第三個位置的核苷酸處于搖擺的位置。 34、核糖體大亞基的主要功能是催化肽鍵的形成，而小亞基主要是結合mRNA和tRNA。（ ） 35、Southern印跡和Northern印跡的主要差別是前者使用特定的DNA分子為探針，后者使用RNA分子為探針。（ ） 36、編碼區(qū)以外的突變不會導致細胞或生物體表型改變。（ ） 37、T4 DNA連接酶和E.coli連接酶作用時都需要ATP和NAD+作為輔助因子。（ ） 38、DNA多態(tài)性就是限制性片段長度多態(tài)性。（ ） 二、單項選擇題 1、有關蛋白質組不正確的敘述是（ C ） A、翻譯后加工可導致同一個翻譯產物形成幾種不同的蛋白質 B、蛋白質之間的相互作用可形成組織特異性蛋白質復合物 C、環(huán)境因素對一個細胞的蛋白質組無影響 D、一個病態(tài)細胞的蛋白質組可能與一個健康細胞的蛋白質組有所不同 2、下列哪項不是原核生物DNA復制是所必需的 ( C ) A. 單鏈結合蛋白.B DNA聚合酶Ⅲ C. DNA聚合酶Ⅱ D.Dna G蛋白 E. ATP 3、噬菌體基因組DNA上的堿基發(fā)生糖基化和甲基化修飾的主要功能是（ B ） A、促進基因組DNA整合到宿主基因組上 B、保護病毒DNA不受到限制性酶的水解 C、有利于核酸正確的排列 D、穩(wěn)定DNA，防止突變 4、雙螺旋DNA具有的典型特征包括（ C ） A、沿著一條鏈是大溝，另外一條鏈是小溝 B、堿基對的排列與螺旋軸平行 C、嘌呤堿基和嘧啶堿基的數目相同 D、螺旋的方向總是右手 5、在許多不同物種中，具有高度保守的序列一般是（ D ） A、假基因 B、特定的間隔序列 C、不重要的蛋白質的基因 D、非常重要的蛋白質的基因 6、原核生物DNA復制不需要（ D ） A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA解鏈酶 C、DNA連接酶 D、端粒酶 7、大腸桿菌染色體DNA復制所需要的DNA聚合酶有（ D ） A、DNA聚合酶Ⅰ B、DNA聚合酶Ⅱ C、DNA聚合酶Ⅲ D、DNA聚合酶Ⅰ和Ⅲ 8、DNA連接酶需要被連接的兩個DNA片段分別具有（ A ） A、3’-OH和5’- B、5’-OH和3’- C、3’-OH和5’-OH D、5’-和3’- 9、端粒酶是一種（ C ） A、依賴于DNA的DNA聚合酶 B、依賴于DNA的RNA聚合酶 C、依賴于RNA的DNA聚合酶 D、依賴于RNA的RNA聚合酶 10、細胞內的突變主要發(fā)生在（ A ） A、DNA復制 B、DNA修復 C、轉錄 D、翻譯 11、堿基類似物導致DNA發(fā)生突變的主要原因是（ C ） A、插入到堿基之間，使DNA發(fā)生斷裂 B、使C變成T C、能夠與不同的堿基配對 D、促進DNA的脫嘌呤 12、SNP的實質是 （ C ） A．堿基缺失 B．堿基插入 C．堿基替換 D．移碼突變 E．轉錄異常 13、在正常的生長條件下，某一細菌基因的啟動子的普里布諾框由TCGACT突變成TATACT，由此而引起該基因轉錄水平發(fā)生變化，以下正確的是（ A ） A、該基因的轉錄增加 B、該基因的轉錄降低 C、該基因不能轉錄 D、該基因的轉錄沒有變化 14、如果你想設計一種新的抗菌藥物，其作用對象是原核細胞的RNA聚合酶，那么，你所設計的藥物作用的最佳靶點應該是（ C ） A、α亞基 B、β亞基 C、ω亞基 D、σ因子 15、真核細胞的TATA框（B ） A、與-35區(qū)一道起作用 B、存在于所有編碼蛋白質基因的啟動子上 C、將RNA聚合酶定位到啟動子上 D、存在于-10區(qū) 16、原核細胞內受RNA聚合酶全酶濃度的提高而加速的轉錄步驟是（ B ） A、封閉的轉錄起始復合物的形成 B、啟動子清空 C、轉錄延伸 D、轉錄終止 17、RNA聚合酶和DNA聚合酶所具有的共同性質是（ C ） A、都需要模板和引物 B、都具有自我校對的活性 C、都需要Mg2+ D、都能夠導致DNA發(fā)生解鏈 18、以下屬于轉錄后基因表達調控的機制是（ C ） A、DNA分子上的C發(fā)生甲基化修飾 B、轉錄因子與啟動子結合 C、RNA分子上的C脫氨基轉變成U D、基因擴增 19、大腸桿菌16S rRNA的3’端序列是5’-CACCUCCUUAOH-3’，那么mRNA分子上的SD序列是（ D ） A、UCCUU B、UCCUCC C、GGAAU D、AGGAGG 20、在核糖體上，mRNA的結合部位和轉肽酶的活性中心分別位于（ D ） A、兩個亞基之間；大亞基 B、兩個亞基之間；小亞基 C、大亞基；小亞基 D、小亞基；大亞基 21、在一個真核細胞內，由一種特定的mRNA翻譯出來的蛋白質的量部分取決于( B ) A、DNA甲基化的程度 B、mRNA降解的速率 C、某些轉錄因子的存在 D、mRNA含有的內含子的數目 22、已知雙鏈DNA的結構基因中，信息鏈的部分序列是5AGGCTGACC3，其編碼的RNA相應序列是 ( D ) A. 5AGGCTGACC3 B. 5UCCGACUGG3 C. 5AGGCUGACC3 D. 5GGUCAGCCU3 E. 5CCAGUCGGA3 23、以下關于RNAi的敘述中，錯誤的是（ D ） A、可特異性地導致mRNA的降解 B、可特異性地抑制mRNA的翻譯C、只存在于真核生物 D、通常抑制特定mRNA的轉錄 24、一種典型的限制性酶切割DNA，切點切開后的結構是（ C ） A、上面一條鏈是5’-，下面一條鏈是3’- B、上面一條鏈是3’-，下面一條鏈是5’- C、兩條鏈都是5’- D、兩條鏈都是3’- 25、PCR實驗不需要的成分是（ A ） A、RNA引物 B、DNA模板C、dNTP D、變性和復性循環(huán) 26、以下用來確定人肝細胞所有的基因的表達水平的技術手段是（ C ） A、Northern印跡 B、Western印跡 C、基因芯片 D、噬菌體展示 6、下列最可能是限制性酶識別位點的堿基序列是（ B ） A、AGTC B、ACGT C、ATCG D、AACC 27、在大腸桿菌中用于表達外源基因的載體在啟動子下游通常含有SD序列，這個序列的作用是（ A ） A、為核糖體提供識別位點 B、提供轉錄位點 C、增強啟動子活性 D、提高RNA穩(wěn)定性 28、原核和真核生物共有的轉錄調控序列是 ( B ) A. poly (A) 信號 B. 啟動子 C. 操縱子 D. 終止子 E. 增強子 29. 上游啟動子元件是 （ A ） A. 一段核酸序列 B. TATA盒的組成部分 C. 位于轉錄起始點下游 D. 不一定被轉錄 E. 轉錄后可以被剪接加工 30. 關于開放讀框敘述正確的是 ( A ) A. 是mRNA的組成部分 B. 內部有間隔序列 C. 真核生物的開放讀框往往串聯(lián)在一起 D. 內部靠近5 端含有翻譯起始調控序列 E. 由三聯(lián)體反密碼子連續(xù)排列而成 31. 哪種情況會導致移碼突變 ( C ) A. 倒位 B. 顛換 C. 插入一個堿基 D. 連續(xù)缺失三個堿基 E. 以上都不對 三、填空 1、1．在DNA合成中負責復制和修復的酶是 DNA 聚合酶Ⅲ 。 2．染色體中參與復制的活性區(qū)呈Y開結構，稱為復制叉 。 3．在DNA復制和修復過程中，修補DNA螺旋上缺口的酶稱為 DNA聚合酶Ⅰ 在DNA復制過程中，連續(xù)合成的子鏈稱為前導鏈 ，另一條非連續(xù)合成的子鏈稱為后滯鏈 。 4 在 DNA修復過程中，需要第二種酶， DNA 連接酶 ，作用是將 DNA中相鄰的堿基 連接 起來。 原核生物 DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有兩種外切核酸酶的活性，它們分別從 5‘-3’ 和 3‘-5’降解 DNA。DNA聚合酶 Ⅱ 只有 3‘-5’ 外切核酸酶活性。 5．如果DNA聚合酶把一個不正確的核苷酸加到3′端，一個含3′→5′活性的獨立催化區(qū)會將這個錯配堿基切去。這個催化區(qū)稱為 校正核酸外切酶 酶。 6．DNA后隨鏈合成的起始要一段短的 RNA引物 ，它是由 DNA引發(fā)酶 以核糖核苷酸為底物合成的。 四 簡答 切除修復：通過切除－修復內切酶使DNA損傷消除的修復方法。一般是切去損傷區(qū)，然后在DNA聚合酶的作用下以露出的單鏈為模板合成新的互補鏈，最后用連接酶將缺口連接起來。 sos修復：SOS修復是指DNA受到嚴重損傷、細胞處于危急狀態(tài)時所誘導的一種DNA修復方式，修復結果只是能維持基因組的完整性，提高細胞的生成率，但留下的錯誤較多，故又稱為錯誤傾向修復，使細胞有較高的突變率 同源重組：同源重組是指發(fā)生在非姐妹染色單體之間或同一染色體上含有同源序列的DNA分子之間或分子之內的重新組合。同源重組反應通常根據交叉分子或Holliday結構的形成和拆分分為三個階段，即前聯(lián)會體階段、聯(lián)會體形成和Holliday 結構的拆分。 位點特異性重組：DNA節(jié)段的相對位置發(fā)生了移動，從而得到不同的結果─DNA序列發(fā)生重排。位點特異性重組不依賴于DNA順序的同源性（雖然亦可有很短的同源序列），而依賴于能與某些酶相結合的DNA序列的存在。 逆轉錄酶：以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。 選擇性剪接：（也叫可變剪接）是指從一個mRNA前體中通過不同的剪接方式。選擇不同的剪接位點組合產生不同的mRNA剪接異構體的過程，而最終的蛋白產物會表現(xiàn)出不同或者是相互拮抗的功能和結構特性，或者，在相同的細胞中由于表達水平的不同而導致不同的表型。 RNA 編輯：在mRNA水平上改變遺傳信息的過程。具體說來，指基因轉錄產生的mRNA分子中，由于核苷酸的缺失，插入或置換，基因轉錄物的序列不與基因編碼序列互補，使翻譯生成的蛋白質的氨基酸組成，不同于基因序列中的編碼信息現(xiàn)象。 開放閱讀框：是結構基因的正常核苷酸序列，從起始密碼子到終止密碼子的閱讀框可編碼完整的多肽鏈，其間不存在使翻譯中斷的終止密碼子。 SD 序列：mRNA中用于結合原核生物核糖體的序列。 分子伴侶：細胞核內能與組蛋白結合并能介導核小體有序組裝的核質素。廣泛存在于原核生物和真核生物的一類保守蛋白，分布于細胞的各個區(qū)域。 衰減子：是位于細菌操縱子上游的一段核苷酸序列。原核生物中通過翻譯前導肽而實現(xiàn)控制DNA的轉錄的調控方式稱衰減作用。 RNA 干擾：在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA誘發(fā)的、同源mRNA高效特異性降解的現(xiàn)象。 增色效應：由于DNA變性引起的光吸收增加，也就是變性后DNA 溶液的紫外吸收作用增強的效應。 減色效應：若變性DNA復性形成雙螺旋結構后，其260nm紫外吸收會降低,這種現(xiàn)象叫減色效應 限制性核酸內切酶：是可以識別DNA的特異序列，并在識別位點或其周圍切割雙鏈DNA的一類內切酶，簡稱限制酶。 啟動子：是基因（gene）的一個組成部分，控制基因表達（轉錄）的起始時間和表達的程度。 終止子：是給予RNA聚合酶轉錄終止信號的DNA序列 Southern 雜交、Northern雜交、FISH 、Western雜交區(qū)別 Southern 雜交(637)：利用標記的核酸做探針，與轉化細胞的DNA進行雜交，直接篩選和鑒定目的序列克隆 Northern雜交（637）：利用標記的核酸做探針，與轉化細胞的RNA進行雜交，直接篩選和鑒定目的序列克隆 FISH：熒光標記的原位雜交技術，一種用能和染色體特定序列高度特異性結合的熒光標記的探針來鑒定和定位染色體上特定DNA序列的存在或缺失 Western雜交： 利用標記的抗體和特定目標蛋白結合以檢測組織勻漿樣本或提取物樣本中特定蛋的一種技術 蛋白質糖基化類型與功能 一,類型：N-糖基化,O-糖基化 二，功能：（火把一定分解） 1.活性必需 介導某些蛋白質的生物活性起直接作用（HCG） 2.靶向轉運 幫助目的蛋白到達其功能場所(溶酶體酶轉運） 3.分子識別 直接參與配體-受體識別，底物-酶結合（某些細胞因子受體與細胞因子的識別） 4.結構穩(wěn)定 寡糖有助于穩(wěn)定蛋白質構象，保護其免受蛋白酶攻擊，延長壽命。 5.易于溶解 增強蛋白質的水溶性 6.定向嵌膜 避免膜蛋白在轉運和發(fā)揮作用時翻轉 蛋白質泛素化的生理意義：在蛋白質的定位、代謝、功能、調節(jié)和降解中都起著十分重要的作用.參與細胞周期、增殖、凋亡、分化、轉移、基因表達、轉錄調節(jié)、信號傳遞、損傷修復、炎癥免疫等幾乎一切生命活動的調控.通過泛素化的修飾能使一些生命過程中起決定作用的酶特定識別要作用的蛋白質以發(fā)生作用,意義重大. 原核基因表達在翻譯水平上的調控機制:（SM飯飯盒飯） 1、 SD序列（核糖體結合位點）的影響 2、 mRNA的穩(wěn)定性 3、 翻譯阻遏 4、 反義RNA 5、 核糖開關 6、 翻譯移碼 真核細胞翻譯水平的調控方式有哪些：（是M小框林干） (1) 對翻譯起始的調控，包括阻遏蛋白的調控、翻譯起始因子(IF)的功能調控、起始密碼子及上游5’-UTR和下游3’-UTR對翻譯的調控； (2) mRNA穩(wěn)定性與翻譯控制； (3) 小分子RNA對翻譯的影響。 (4) 上游開放閱讀框 (5) 翻譯起始因子，核糖體蛋白磷酸化 (6) RNA干擾 五 綜述就本學期自己所學知識,談談分子生物學在中醫(yī)中藥研究中的應用 分子生物學是從分子水平來研究生命現(xiàn)象的一門基礎學科.把分子生物學的新技術引入到中醫(yī)藥研究中 ,不僅為闡釋中醫(yī)藥理論、加深對疾病本質的認識、探討中藥的作用機理和研制新藥提供了一種新的研究工具和手段 ,而且還將啟迪新的思想和發(fā)展新的診療技術 ,并將對中醫(yī)藥學的變革和進步起到巨大的推動作用. Sextama盒：原核生物啟動子上-35bp處的TTGACA區(qū)，又稱-35區(qū)。RNA聚合酶轉錄起始的識別序列。 Probnow盒：原核生物中，在啟動子上游有一個由5-6個核苷酸組成的共有序列位于起點上游10bp處，所以又稱—10序列，是轉錄的解旋功能部位，具有高度保守性和一致性。 TATA盒：是構成真核生物啟動子的元件之一。其一致順序為TATAATAAT（非模板鏈序列）。它約在多數真核生物基因轉錄起始點上游約-30bp（-25~-32bp）處，基本上由A-T堿基對組成，是決定基因轉錄始的選擇，為RNA聚合酶的結合處之一，RNA聚合酶與TATA框牢固結合之后才能開始轉錄。 共翻譯轉運：內質網膜上的膜結合核糖體在合成蛋白質時，由于蛋白質N端的信號序列的作用，使得在多肽鏈合成完成之前就在進行轉運。 翻譯后轉運：合成的蛋白質穿過生物膜的轉移。游離核糖體上合成的蛋白質必須等蛋白質完全合成并釋放到胞質溶膠后才能被轉運,所以將這種轉運方式稱為翻譯后轉運。 順式作用原件：存在于基因旁側序列中能影響基因表達的序列。順式作用元件包括啟動子、增強子、調控序列和可誘導元件等，它們的作用是參與基因表達的調控。： 反式作用因子：是指能直接或間接地識別或結合在各類順式作用元件核心序列上參與調控靶基因轉錄效率的蛋白質。多為轉錄因子 正調控：當阻遏蛋白從操縱基因上脫離后，激活蛋白與啟動子結合以及和RNA聚合酶的相互作用，幫助結構基因的轉錄起始，促進相應蛋白的合成。 負調控：是指 阻遏蛋白與操縱基因的結合，阻止了RNA聚合酶對操縱子結構基因的轉錄。 鋅指結構：一種常出現(xiàn)在DNA結合蛋白中的一種結構基元。是由一個含有大約30個氨基酸的環(huán)和一個與環(huán)上的4個Cys或2個Cys和2個His配位的Zn2+構成，形成的結構像手指狀。 亮氨酸拉鏈：出現(xiàn)在DNA結合蛋白質和其它蛋白質中的一種結構基元，即模體。當來自同一個或不同多肽鏈的兩個兩用性的α-螺旋的疏水面相互作用形成一個圈對圈的二聚體結構時就形成了亮氨酸拉鏈。 原位PCR：在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優(yōu)點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。 多重PCR：又稱多重引物PCR或復合PCR，它是在同一PCR反應體系里加上二對以上引物，同時擴增出多個核酸片段的PCR反應，其反應原理，反應試劑和操作過程與一般PCR相同。 PCR—RFLP：RFLP是指基因型之間限制性片段長度的差異，這種差異是由限制性酶切位點上堿基的插入、缺失、重排或點突變所引起的。 PCR-SSCP：指單鏈構象多態(tài)性檢測是一種基于DNA構象差別來檢測點突變的方法。 定量PCR：是指用外標法（熒光雜交探針保證特異性）通過監(jiān)測PCR過程（監(jiān)測擴增效率）達到精確定量起始模板數的目的，同時以內對照有效排除假陰性結果（擴增效率為零）。 逆轉錄PCR：是聚合酶鏈式反應（PCR）的一種廣泛應用的變形。在RT-PCR中，一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA，再以此為模板通過PCR進行DNA擴增。 真核細胞染色質水平調控的方式有哪些 6 1. 染色質活化 2. 染色質缺失 3. 基因擴增 4. 基因重排 5. 基因組印記 6. 組蛋白修飾和DNA的甲基化 簡述基因診斷常用的方法技術（和PD雞心） ①核酸雜交 是從核酸分子混合液中檢測特定大小的核酸分子的傳統(tǒng)方法。 ②PCR技術 擴增微量核酸，用于檢測已知序列或已知部分序列的基因，簡便快捷，成本低廉。 ③DNA測序 目前在實驗室手工測序常用Sanger雙脫氧鏈終止法。 ④基因芯片技術 基因芯片技術是近年來發(fā)展十分迅速的大規(guī)模、高通量分子檢測技術。其基本原理是核酸雜交，其基本過程是將許多特定的寡核苷酸片段或基因片段作為探針，有規(guī)律的排列固定于支持物上，形成矩陣點。 PCR原理 該技術是在模板DNA、引物和四種脫氧核糖核苷酸存在下，依賴于DNA聚合酶的酶促合成反應。DNA聚合酶以單鏈DNA為模板，借助一小段雙鏈DNA來啟動合成，通過一個或兩個人工合成的寡核苷酸引物與單鏈DNA模板中的一段互補序列結合，形成部分雙鏈。在適宜的溫度和環(huán)境下，DNA聚合酶將脫氧單核苷酸加到引物3-OH末端，并以此為起始點，沿模板5→3方向延伸，合成一條新的DNA互補鏈。