分支桿菌

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第十五章分支桿菌及相似屬 分支桿菌屬為G 抗酸菌的代表 廣泛存在于自然界 許多是人和多種動物的病原菌 對動物有致病性的主要是 結(jié)核分枝桿菌牛分支桿菌禽分支桿菌副結(jié)核分支桿菌 代表種為結(jié)核分支桿菌 結(jié)核分枝桿菌 M tuberculosis 是結(jié)核病的病原菌 俗名結(jié)核桿菌 1882年由德國細(xì)菌學(xué)家科赫 Koch 發(fā)現(xiàn) 傳染源 痰中帶菌的病人傳播途徑呼吸道為主消化道泌尿生殖系統(tǒng)皮膚淋巴 血行播散易感人群 牛分支桿菌與人的結(jié)核分支桿菌以及禽分支桿菌的許多特性相近 本節(jié)一并介紹 下面主要介紹一下牛分支桿菌 細(xì)長 直或微彎曲 桿菌 大小約1 4 0 4um 單在 少數(shù)成叢 在該屬中 牛結(jié)核較短粗 其余則細(xì)長 禽分支桿菌呈多形性 在陳舊培養(yǎng)物及干酪性病灶中菌體呈分枝狀 一 形態(tài)及染色特性 結(jié)核桿菌一般常用萎 鈉氏 Ziehl Neelsen 抗酸性染色法染色 結(jié)核桿菌染成紅色 其他非抗酸性細(xì)菌及細(xì)胞漿質(zhì)等呈藍(lán)色 結(jié)核桿菌的抗酸性取決于胞壁內(nèi)所含分枝菌酸殘基和胞壁固有層的完整性有關(guān) 抗酸染色方法 首先在已經(jīng)固定好的抹片上滴加較多的石碳酸復(fù)紅染色液 加溫染色 維持產(chǎn)生蒸汽 3 5min 水洗 然后用3 鹽酸酒精脫色 至標(biāo)本無顏色脫出為止 充分水洗 再用堿性美蘭染色1min 水洗 干燥鏡檢 一 形態(tài)及染色特性 細(xì)胞壁組成 G 但其細(xì)胞壁除含G 細(xì)胞壁的肽聚糖成分外 還含特殊的糖酯 使革蘭氏染色不易著色 而抗酸染色為紅色 糖酯具有刺激哺乳動物免疫系統(tǒng)的作用 因此結(jié)核分支桿菌可做免疫增強劑或免疫佐劑 專性需氧 6 4 7 0 37 37 5 最適 對營養(yǎng)要求高 培養(yǎng)基常用的有 羅杰二氏 改良羅杰二氏 丙酮酸 小川培養(yǎng)基 內(nèi)含蛋黃 甘油 馬鈴薯 無機鹽 孔雀綠等 結(jié)核桿菌在上述培養(yǎng)基中14 15h分裂一次 5 甘油或5 10 CO2可促進 除牛結(jié)核外 的結(jié)核桿菌生長 二 培養(yǎng)特性 在適宜的培養(yǎng)基生長緩慢 10 30天才形成菌落 菌落粗糙隆起 不透明 邊緣不整齊 呈顆粒 結(jié)節(jié)或菜花狀 乳白或米黃色 類似于在組織中形成的病變形態(tài) 二 培養(yǎng)特性 結(jié)核桿菌在羅杰二氏培養(yǎng)基上的菌落特征 4星期 牛胸膜結(jié)核呈現(xiàn)的珍珠狀結(jié)節(jié) 二 培養(yǎng)特性 在液體培養(yǎng)基中由于其壁有糖酯 具疏水性 形成浮于液面的皺褶菌膜 結(jié)核桿菌對某些理化因子的抵抗力較強 在干痰中存活6 8個月 若粘附于塵埃上 保持傳染性8 10天 在3 HCl或NaOH溶液中能耐受30分鐘 因而常以酸堿中和處理嚴(yán)重污染的檢材 殺死雜菌和消化粘稠物質(zhì) 提高檢出率 但對濕熱 紫外線 酒精的抵抗力弱 在液體中加熱62 63 15分鐘 直射日光下2 3小時 75 酒精內(nèi)數(shù)分鐘即死亡 三 抵抗力 致病性 可引起多種動物的結(jié)核病 本菌為細(xì)胞內(nèi)寄生菌 病變?yōu)榫衷钚圆∽?當(dāng)細(xì)菌由呼吸道吸入時 進入肺泡時 被肺內(nèi)的巨噬細(xì)胞 塵細(xì)胞 吞噬 但不能被其消化降解 而是在其內(nèi)增殖形成病灶 產(chǎn)生干酪樣壞死 壞死灶被各種吞噬細(xì)胞 T B細(xì)胞包圍著病灶形成結(jié)核結(jié)節(jié) 免疫低下者這種局部病灶可以破潰 菌體通過氣管隨痰排出體外或病灶液化 擴散進入血流及其他器官 使機體死亡 免疫正常者局限性病灶在活化巨噬細(xì)胞作用下 使細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌停止生長 病灶鈣化而痊愈 四 致病機理及致病性 五 變異性 L型變異 即細(xì)胞壁消失 呈多形性 L型對異煙肼耐藥 異煙肼俗稱雷米封 為治療結(jié)核的首選藥物 R S變異 導(dǎo)致毒力減弱 強毒 弱毒的毒力減弱變異 制成卡介苗 卡介苗是經(jīng)230次傳代后而得的弱毒株 1 免疫性 1977年發(fā)現(xiàn)結(jié)核病的細(xì)胞免疫和體液免疫存在分離現(xiàn)象 在病情加重時細(xì)胞免疫功能減弱 而體液免疫增強 但恢復(fù)期的動物 已經(jīng)康復(fù)或病情得到控制的動物 其細(xì)胞免疫功能增強 而體液免疫水平較低 重癥動物的細(xì)胞免疫反應(yīng)低下 甚至消失 而抗體顯著增加 六 免疫性與變態(tài)反應(yīng) 2 變態(tài)反應(yīng) 結(jié)核桿菌在刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的同時 也刺激機體產(chǎn)生變態(tài)反應(yīng) 二者均有T細(xì)胞介導(dǎo)產(chǎn)生 結(jié)核桿菌的結(jié)核菌素和細(xì)胞壁成分 可激活體內(nèi)產(chǎn)生巨噬細(xì)胞移動抑制因子的T細(xì)胞 導(dǎo)致變態(tài)反應(yīng)性炎癥的發(fā)生 而結(jié)核桿菌的核蛋白體RNA可激活產(chǎn)生結(jié)核桿菌生長抑制因子的T細(xì)胞 使機體產(chǎn)生免疫反應(yīng) 完整的結(jié)核桿菌可刺激MIF 巨噬細(xì)胞移動抑制因子 MycoIF 細(xì)菌生長抑制因子 的T細(xì)胞同時產(chǎn)生 因此檢測機體對結(jié)核桿菌是否發(fā)生變態(tài)反應(yīng) 即可判定是否有免疫力 結(jié)核菌素試驗正是根據(jù)這一原理設(shè)計的最常用的免疫學(xué)檢測手段 六 免疫性與變態(tài)反應(yīng) 結(jié)核菌素是結(jié)核桿菌的蛋白質(zhì)組分之一 用其進行皮內(nèi)注射或滴入眼結(jié)膜囊 可判定機體對結(jié)核桿菌是否引致變態(tài)反應(yīng) 常用的有兩種 1 一種是OT 舊結(jié)核菌素 2 另一種是PPD OT經(jīng)三氯醋酸沉淀后的純化物 六 免疫性與變態(tài)反應(yīng) 1 病料采集 取患病器官的組織結(jié)節(jié)及病變與非病變交界處組織 2 涂片鏡檢病料涂片 抗酸染色后鏡檢 若發(fā)現(xiàn)紅色成叢桿菌 可做初步診斷 七 微生物學(xué)診斷 3 分離培養(yǎng)常用羅杰二氏培養(yǎng)基 病料用6 H2SO4或4 NaOH液處理15min 經(jīng)中和離心 取少許沉淀物接種于培養(yǎng)基斜面 管口封嚴(yán) 37 培養(yǎng)8周 培養(yǎng)陽性者 進行生化試驗及培養(yǎng)特性鑒定 4 動物接種選用雞 兔 豚鼠接種 3 4周出現(xiàn)病變 皮下或腹腔注射 六 微生物學(xué)診斷 5 變態(tài)反應(yīng)采用PPD皮內(nèi)注射法 牛頸部皮內(nèi)注射結(jié)核菌素PPD0 1ml 10萬IU ml 72h后觀察 局部炎癥反應(yīng)明顯 皮腫脹厚度差 4mm為陽性 局部炎癥不反應(yīng)明顯 皮腫脹厚度差在2 4mm之間 為可疑 局部無炎癥反應(yīng) 皮腫脹厚度差在2mm以下 為陰性 凡判為疑似反應(yīng)牛 30d后需復(fù)檢一次 如仍為可疑 經(jīng)30 45d后再次復(fù)檢 若仍為可疑 判為陽性 6 血清學(xué)試驗 六 微生物學(xué)診斷 人類廣泛采用卡介苗免疫接種 牛則只檢疫 淘汰陽性牛 原因 接種疫苗的牛 一年后仍維持變態(tài)反應(yīng)陽性 在用結(jié)核菌素檢疫時 無法與自然感染牛區(qū)分 因此不宜推廣 七 免疫治療 本章小結(jié) 分枝桿菌屬是革蘭氏陽性菌中抗酸菌的代表 其細(xì)胞壁的特殊組成影響染色的特性 并作為經(jīng)典的免疫佐劑廣泛使用 牛分枝桿菌等培養(yǎng)困難 生長慢 感染人和動物 致結(jié)核病等 其細(xì)胞免疫和體液免疫存在分離現(xiàn)象 機體在感染本病時 體內(nèi)免疫反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng)同時存在 遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)被用于本病的檢測 本章參考復(fù)習(xí)題 1 試述分枝桿菌的染色特性與細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)的關(guān)系 2 結(jié)核桿菌的免疫有何特點 3 如何檢測牛是否感染分支桿菌 螺旋體是一類菌體細(xì)長 柔軟 彎曲呈螺旋狀 能活潑運動的原核單細(xì)胞微生物 介于細(xì)菌和原蟲之間 第十六章螺旋體 螺旋體呈螺旋狀或波浪狀圓柱形 具有 個以上完整的螺旋 大小懸殊 長5 250 m 寬0 1 3 m 可以通過細(xì)菌濾器 各種螺旋體的螺旋數(shù)目不同 螺間距不同 回旋角度也不同 具有種的特征 在分類上可作為一重要指標(biāo) 一 形態(tài)結(jié)構(gòu) 一 形態(tài)結(jié)構(gòu) 有螺旋體的結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似 只是在螺旋體的原生質(zhì)柱外有2 100根軸絲纏繞 原生質(zhì)柱具有細(xì)胞膜和膜外由細(xì)胞壁和粘液層構(gòu)成的外鞘 軸絲加在細(xì)胞膜與外鞘之間 螺旋體可以運動 但無鞭毛 軸絲的收縮和舒張使其運動 二 運動方式 螺旋體的運動有3種方式 沿長軸旋轉(zhuǎn) 快速前進 細(xì)胞屈曲伸縮前進 類似蚯蚓 螺旋狀或蛇狀前進 目前螺旋體分為6個屬 與畜禽致病性有關(guān)的 疏 密 蛇形 細(xì)螺旋體屬 三 分類 本屬成員細(xì)胞呈螺旋狀 每個菌體有3 10個不規(guī)則的疏松螺旋 每端有15 20根軸絲纏繞原生質(zhì)柱 并在細(xì)胞中部重疊 以螺旋狀方式運動 高度適應(yīng)蜱 虱傳播 對人和動物致病的主要為伯氏疏螺旋體 回歸熱螺旋體等 第一節(jié)疏螺旋體屬 為萊姆病的病原 硬蜱為其傳播媒介 主要感染人和犬 馬 牛亦可感染 引起關(guān)節(jié)炎等多種疾病 病人被叮咬后出現(xiàn)圓環(huán)狀疹塊 伯氏螺旋體 ThepresentationoferythemamigransinStage1 萊姆病 菌體細(xì)長 有4 20個大而疏松的螺旋 一 形態(tài)特征 二 微生物學(xué)檢查 1 病原學(xué)檢查用暗視野顯微鏡或吉姆薩染色后觀察 2 血清學(xué)檢查ELISA最為常用 本章小結(jié) 螺旋體的基本結(jié)構(gòu)與細(xì)菌相似 具有軸絲而能活潑運動 用暗視野顯微鏡或相差顯微鏡可觀察其形態(tài) 多數(shù)需要厭氧培養(yǎng) 具有致病性的有疏螺旋體 短螺旋體 密螺旋體及鉤端螺旋體屬 引致萊姆病的伯氏螺旋體 其傳播媒介為硬蜱 嚙齒動物為貯藏宿主 它的外膜脂蛋白在致病 檢測及免疫方面均值得重視 本章復(fù)習(xí)參考題 1 螺旋體有哪些主要生物學(xué)特性 目前分類狀況如何 2 疏螺旋體有哪些特性 伯氏螺旋體引致何病 如何診斷 又稱為霉形體 是一類無細(xì)胞壁的細(xì)菌 細(xì)胞柔軟呈多形性 能通過細(xì)菌濾器 能在人工培養(yǎng)基中生長繁殖 含有DNA和RNA 二分裂或芽生繁殖 為柔膜體綱 有8個屬 獸醫(yī)學(xué)的主要對象為霉形體屬及脲原體屬的成員 第十七章支原體 霉形體因無細(xì)胞壁 因此具多形性 可濾過性 濾過性 常呈球狀 環(huán)狀 桿狀 偶見分枝絲狀 G 但不易著色 通常著色不良 姬姆薩或瑞氏染色良好 呈淡紫色 一 形態(tài)結(jié)構(gòu) 二 培養(yǎng)特性 霉形體的核質(zhì)是一個環(huán)形雙股DNA 但分子量較小 生物合成能力較弱 營養(yǎng)要求高 培養(yǎng)時除基礎(chǔ)營養(yǎng)外 還需要牛心浸出液 酵母膏 輔酶 膽固醇 氨基酸 動物血清等 為抑制細(xì)菌生長 常加入青霉素 醋酸鉈 疊氮鈉等藥物 培養(yǎng)時要供給5 CO2 霉形體生長較慢 一般培養(yǎng)2 6天后出現(xiàn)微小菌落 菌落呈 煎荷包蛋 狀 中心深入培養(yǎng)基中 致密色暗 周圍長在培養(yǎng)基表面 較透明 此為霉形體的典型菌落 豬肺炎霉形體和肺霉形體等的菌落不典型 無中心生長點 圓形透明 露滴樣 直徑10 600 m 需要使用放大鏡或低倍顯微鏡才可見 二 培養(yǎng)特性 人型支原體在固體培養(yǎng)基上的典型油煎蛋狀菌落 在液體培養(yǎng)基中 生長數(shù)目較少 培養(yǎng)時 不使培養(yǎng)基變混濁 霉形體在雞胚卵黃囊和絨毛尿囊膜上生長 也可在細(xì)胞上生長 不一定出現(xiàn)細(xì)胞病變 但干擾病毒的增殖 二 培養(yǎng)特性 根據(jù)對糖類分解能力 分為兩群 一群能分解多種糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣 稱發(fā)酵型 另一群不能分解糖 稱為非發(fā)酵型 但能利用精氨酸作為碳素和能量來源 某些菌株在含血液的培養(yǎng)基中其菌落周圍可形成 型或 型溶血 二 生理生化特性 禽敗血霉形體 肺炎霉形體的菌落能吸附禽類紅細(xì)胞 二 生理生化特性 病原性支原體常定居于多動物的呼吸道 泌尿生殖道 消化道粘膜表面 乳腺 眼等 而且對胸腺 腹膜 關(guān)節(jié)滑液囊膜的間質(zhì)細(xì)胞以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)的親和力較強 主要寄生 部分腐生生活 單獨感染癥狀輕微或無癥狀 當(dāng)動物受到應(yīng)激或與細(xì)菌 病毒合并感染時 引起疾病 其特點 潛伏期長 慢性經(jīng)過 地方流行 具種的特征 豬 羊 禽 此病均易得 一般不引起實驗動物病變 致豬肺炎支原體3種 雞3種 牛支原體8種 羊支原體7種 同學(xué)們有興趣自己看書 三 致病性 呈慢性經(jīng)過 表現(xiàn)為漿液或粘液性鼻液 使鼻孔堵塞妨礙呼吸 頻頻搖頭 噴嚏 咳嗽 眼瞼腫脹 當(dāng)炎癥蔓延下部呼吸道時 則喘氣和咳嗽更為顯著 并有呼吸道羅音 喘氣病豬呼吸困難 喘氣病豬肺臟實質(zhì) 三 致病性 病雞張口呼吸 病雞氣囊渾濁 有泡沫狀物 腹腔大量泡沫 病雞氣囊渾濁 有黃色干酪樣物 肝周炎 心包炎 滑液囊炎 霉形體形態(tài)多樣 直接鏡檢意義不大 應(yīng)取病料進行分離培養(yǎng)和形態(tài)學(xué) 生理生化及血清學(xué)鑒定 四 微生物學(xué)診斷 本章小結(jié) 支原體是一類沒有細(xì)胞壁的細(xì)菌 具有多形性 可通過細(xì)菌濾器 支原體對營養(yǎng)及培養(yǎng)條件要求較高 常常污染細(xì)胞培養(yǎng) 其分離鑒定除了要測定其生理生化特性外 還要用血清學(xué)及分子生物學(xué)方法 豬肺炎支原體引致地方流行性肺炎 雞支原體引致及和火雞的慢性呼吸道疾病 均較常見 后者主要依靠血清學(xué)方法做出診斷 本章參考復(fù)習(xí)題 1 支原體的生物學(xué)特性有哪些 2 支原體與其他微生物比較有何特點 3 雞支原體引起何種疾病 如何診斷 是一類依賴宿主細(xì)胞和專性細(xì)胞內(nèi)寄生的小型G 原核單細(xì)胞微生物 其形態(tài)結(jié)構(gòu)與繁殖方式等特性與細(xì)菌相似 生長要求與病毒相似 是一類介于細(xì)菌和病毒之間的微生物 立克次氏體是人類斑疹傷寒病的病原 此微生物的名字是以發(fā)現(xiàn)者的名字命名的 因發(fā)現(xiàn)者因此而死亡 第十八章立克次氏體和衣原體 第一節(jié)立克次氏體 具有多形性 呈球形 球桿形 桿形 啞鈴形或絲狀 大小介于細(xì)菌與病毒之間 但均不能通過細(xì)菌濾器 G 專性活細(xì)胞寄生 常用接種動物 雞胚卵黃囊以及細(xì)胞培養(yǎng)法培養(yǎng)立克次氏體 對理化因素抵抗力不強 對熱敏感 56 30min即可滅活 對一些廣譜抗生素敏感 如 氯霉素 金霉素等 但磺胺類藥物有促其生長的特點 因此不可用其進行治療 致人畜疾病的的立克次氏體 多寄生于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng) 血管內(nèi)皮細(xì)胞 紅細(xì)胞 并常寄生在虱 蚤 螨等節(jié)肢動物 或為寄主或貯主 或為媒介 寄生在節(jié)肢動物的腸壁上皮細(xì)胞中 兼能進入他們的唾液腺或生殖道內(nèi) 并通過叮咬感染人畜 故立克次氏體為蟲媒病原 人動物感染后 可引起特異性免疫反應(yīng) 三 立克次氏體特點 立克次氏體 是一類具有濾過性 嚴(yán)格細(xì)胞內(nèi)寄生 并經(jīng)獨特發(fā)育周期 以二分裂繁殖和形成包涵體的G 原核細(xì)胞型微生物 第二節(jié)衣原體 G 圓形或橢圓形 含有DNA及RNA2種核酸及核糖體 具有細(xì)胞壁 結(jié)構(gòu)類似G 菌 專性細(xì)胞內(nèi)寄生 不能在細(xì)胞外人工培養(yǎng)基上生長 有獨特的發(fā)育周期 并以二分裂方式繁殖 對某些抗生素敏感 一 衣原體主要特點 衣原體在宿主細(xì)胞內(nèi)生長繁殖時 具有獨特的發(fā)育周期 不同發(fā)育階段的衣原體 在形態(tài) 大小和染色性質(zhì)上各異 在宿主細(xì)胞內(nèi)以2種形式存在 個體形式 原體與網(wǎng)狀體群體形式 包涵體 二 形態(tài)染色與發(fā)育周期 1 原體又稱為原生小體或元體 呈球形 橢圓形或梨形 小而致密 為成熟的衣原體 存在于細(xì)胞之外 對人和動物具有高度的傳染性 但無繁殖能力 姬姆薩染色為紫色 衣原體的感染即由元體引起 當(dāng)元體吸附于宿主細(xì)胞的細(xì)胞表面后 經(jīng)細(xì)胞吞飲進入細(xì)胞內(nèi) 宿主細(xì)胞的胞漿膜圍于元體外面形成空泡 元體即在空泡內(nèi)逐漸增大 形成網(wǎng)狀體 衣原體 2 網(wǎng)狀體又稱為始體 形體較大 圓形或橢圓形 無細(xì)胞壁 在細(xì)胞空泡內(nèi)以二分裂方式繁殖 直至整個空泡內(nèi)充滿許多中間體 由中間體成熟后變小即為子代元體 成熟的子代元體從破裂的感染細(xì)胞中釋出 再感染新的宿主細(xì)胞 開始新的發(fā)育周期 網(wǎng)狀體僅是衣原體在細(xì)胞內(nèi)發(fā)育周期中的一種繁殖型個體形態(tài) 無感染性 衣原體 3 包涵體衣原體在細(xì)胞空泡內(nèi)的繁殖過程中形成的群體形態(tài) 即為包涵體 其內(nèi)含有無數(shù)子代元體和正在分裂繁殖的網(wǎng)狀體 衣原體 衣原體發(fā)育周期 對衣原體的培養(yǎng) 目前只能用雞胚 細(xì)胞培養(yǎng) 或動物接種3種方法 雞胚采用5 7日齡卵黃囊接種 細(xì)胞可用Vero Hela BHK21等 三 培養(yǎng)特性 較重要的衣原體主要有4種 沙眼衣原體 是出名的性傳播致病菌 鸚鵡熱衣原體 畜禽肺炎 流產(chǎn) 關(guān)節(jié)炎牛羊親衣原體 引起牛羊的多發(fā)性關(guān)節(jié)炎 腦脊髓炎和腹瀉肺炎衣原體 人的急性呼吸道疾病 四 分類及致病性 衣原體 衣原體科 衣原體屬 3個種 親衣原體屬 8個種 副衣原體科 只1個屬1個種 西氏衣原體科 只1個屬1個種 根據(jù)所致的不同疾病 選擇采取肺 關(guān)節(jié)液 腦脊髓 胎盤等病料 分別接種雞胚后 鑒定病原 5 7日齡雞胚卵黃囊接種 取死胚卵黃囊膜鏡檢 可見元體 網(wǎng)狀體及包涵體顆粒 五 微生物學(xué)診斷 本章小結(jié) 立克次氏體和衣原體都是專性細(xì)胞內(nèi)寄生的原核微生物 結(jié)構(gòu)及繁殖方式與細(xì)菌相似 生長要求類似病毒 立克次氏體主要寄生于節(jié)肢動物 并以其為傳播媒介 衣原體具有獨特的發(fā)育周期 是最早用雞胚分離成功的微生物 本章參考復(fù)習(xí)題 立克次氏體有何特點 立克次氏體和衣原體的形態(tài)及培養(yǎng)特點是什么 衣原體在體內(nèi)增值 有其獨特的發(fā)育周期 試述各時期的特點和功能