芒果葉中芒果苷含量的測定 高效液相色譜法
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ICS 65.020.01 ICS 65020.30 B43 GB 中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T XXX-XXX I GB/XX XX—XXXX 芒果葉中芒果苷含量的測定 高效液相色譜法 Determination of mangiferin in mango (Mangifera indica L.) leaves – high-performance liquid chromatorgraphy XXX-XX-XX發(fā)布 XXX-XX-XX實(shí)施 中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì) 發(fā) 布 前??言 本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1-2009給出的規(guī)則起草。 本標(biāo)準(zhǔn)由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院分析測試中心,中國標(biāo)準(zhǔn)化研究院。 本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:陽辛鳳,蘭韜,席興軍,韓丙軍,趙方方,張?jiān)?,郭曉杰,王? 1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用高效液相色譜-質(zhì)譜法測定芒果葉中芒果苷含量的原理、材料、儀器與設(shè)備、測定步驟、結(jié)果計(jì)算與表示、精密度和回收率、檢驗(yàn)報(bào)告。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于芒果葉中芒果苷含量的測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。 GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法 GB/T 8855 水果和蔬菜 取樣方法 3 原理 樣品經(jīng)提取后,將提取液過濾,經(jīng)反向高效液相色譜分離測定,在258nm下檢測,根據(jù)保留時(shí)間定性,外標(biāo)峰面積定量。 4 試劑與材料 4.1 試劑 4.1.1 甲醇(CH3OH):色譜純。 4.1.2 乙腈(CH3CN):色譜純。 4.1.3 甲酸(HCOOH):色譜純。 4.1.4 甲醇溶液(70%):甲醇與超純水按照7:3體積比混合。 4.1.5 甲酸溶液(0.1%):1 L超純水中加入1 mL甲酸。 4.1.6 芒果苷(mangiferin,C19H18O11,CAS : 4773-96-0)對(duì)照品:純度≥98%。 4.1.8 流動(dòng)相:乙腈(4.2):甲酸溶液(4.5)=15:85(體積比)。 4.1.9 芒果苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(200 μg/mL):稱取10 mg(精確至0.10mg)芒果苷對(duì)照品,置于50 mL容量瓶中,加甲醇(4.1)超聲溶解并定容至刻度線,混勻,配制成200 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,–18℃冰箱避光保存,有效期3個(gè)月。 4.1.10 芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確移取0.5mL芒果苷標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液于10mL容量瓶中,用甲醇溶液(4.1)稀釋至定容刻度線,搖勻,得到芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液(質(zhì)量濃度10 μg/mL)。–18℃冰箱避光保存,有效期1個(gè)月。 4.1.11 芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作液:分別準(zhǔn)確移取0.1mL、0.2mL、0.5mL、1mL、2mL芒果苷中間濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液于不同的10mL容量瓶中,用70%甲醇溶液(4.4)稀釋、定容刻度線,搖勻,得到芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(質(zhì)量濃度分別為0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)。2~8C保存,有效期2周。 4.1.12 除另外有規(guī)定外,所用試劑均為分析純,水應(yīng)復(fù)合GB/T6682中一級(jí)水的要求。 4.2.材料 4.2.1 離心管:100 mL(螺旋蓋)。 4.2.2 三角瓶:250 mL(磨口塞)。 4.2.3 容量瓶:10 mL,50 mL,100 mL,250 mL。 4.2.4 刻度玻璃移液管:1m mL 4.2.5針式微孔濾器:孔徑0.22 μm,直徑13 mm的聚四氟乙烯(PTFE)濾膜或者相當(dāng)者。 5 儀器和設(shè)備 5.1 液相色譜儀:配紫外(UV)檢測器或PDA、DAD檢測器。 5.2分析天平:感量0.1 mg。 5.3電子天平:感量0.01 g。 5.4超聲波振蕩器:功率不低于250 W,或相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。 5.5組織搗碎機(jī) 5.6高速組織勻漿機(jī) 5.7渦旋振蕩器 6 測定步驟 6.1 試樣制備、保存 按照GB/T 8855 水果和蔬菜取樣方法。新鮮芒果葉片充分打碎(5.5)、混勻,置于潔凈容器中,密封并做好標(biāo)記,于–18℃冰箱避光保存。 6.2 提取 芒果葉試樣(6.1)解凍,稱取芒果葉試樣1.00g (精確至0.01g) ,置于100 mL離心管(4.2.1)中,加入提取溶劑70%甲醇溶液(4.1.4)50mL,18 000 rpm高速勻漿1 min(5.6),將樣品轉(zhuǎn)移到250 mL具塞磨口三角瓶(4.2.2)中。分別用40mL、30mL提取溶劑洗滌離心管和刀頭共2次,溶液均合并至三角瓶中。將三角瓶瓶塞蓋上,放入超聲清洗儀(5.4)中,室溫下超聲提取30 min。取出,靜置20min,使分層。將上清轉(zhuǎn)入250 mL容量瓶中(4.2.3),樣品碎渣保留在三角瓶中。三角瓶中加入70%甲醇溶液(4.1.4)100mL,超聲30 min,進(jìn)行二次提取。容量瓶上放置漏斗,放入脫脂棉,將提取液過濾,濾液合并至250mL容量瓶,用少量70%甲醇溶液(4.1.4)洗滌三角瓶內(nèi)壁與漏斗內(nèi)壁共3次,洗滌液均合并至250mL容量瓶,靜置,樣品溫度冷卻至室溫后,用70%甲醇溶液(4.1.4)定容至250mL,搖勻,得到芒果葉樣品提取液。 以1.0 mL刻度玻璃移液管(4.2.4)吸取樣品提取液1.0mL,放入100mL容量瓶中,用70%甲醇溶液(4.1.4)定容,搖勻。用一次性注射器吸取適量體積樣品溶液,0.22 μm 濾膜過濾(4.2.5),濾液待上機(jī)分析。 6.3 樣品測定 6.3.1高效液相色譜參考條件 -液相色譜柱:C18色譜柱,柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或具有同等性能的色譜柱。 -流動(dòng)相:0.1%甲酸溶液(4.5)+乙腈=85+15(體積比)。 -流速:1 mL/min。 -檢測波長:258 nm。 -進(jìn)樣體積:10 μL。 -柱溫:25℃。 6.3.2 液相色譜測定 分別取適量的芒果苷系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液(4.1.11)及待上機(jī)試樣溶液,按照6.3.1列出的條件進(jìn)行液相色譜分析測定。由保留時(shí)間進(jìn)行定性,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及芒果苷響應(yīng)信號(hào),建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。工作曲線線性相關(guān)系數(shù)R2≥0.999。 待測樣液中芒果苷的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍內(nèi),超過線性范圍則應(yīng)稀釋后再進(jìn)行分析。分析過程中,每20次樣品測定后應(yīng)加入一個(gè)與樣品峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作液,如果測得的值與原值相對(duì)平均偏差超過5%,則應(yīng)重新進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。標(biāo)注曲線及典型樣品色譜圖參見附錄A。 7空白試驗(yàn) 除不加試樣外,均按上述步驟進(jìn)行。 8 結(jié)果計(jì)算與表示 8.1 結(jié)果計(jì)算 試樣中目標(biāo)物的含量按式(1)計(jì)算,計(jì)算結(jié)果需扣除空白值: (ρ﹣ρ0 )V n m 1 0001 000 X = 100 …………………………………………(1) 式中: X ——試樣中芒果苷的含量,單位為克每百克(mg/100mg); ρ ——樣液中芒果苷的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL); ρ0 ——空白中芒果苷的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL); V——樣液定容體積,單位為毫升(mL); n——稀釋倍數(shù); m——試樣的質(zhì)量,單位為克(g); 1000———換算系數(shù); 100 ———換算系數(shù)。 8.2 結(jié)果表示 測定結(jié)果以平均測定的算術(shù)平均值表示,計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。兩次平行測定結(jié)果的相對(duì)平均偏差不應(yīng)超過5%。 9精密度和回收率 本方法的精密度和回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果參見附錄B。 10檢出限 當(dāng)稱樣量為1g時(shí),芒果苷檢出限為 0.08 mg/g,定量限為 0.25 mg/g。 11檢驗(yàn)報(bào)告 檢驗(yàn)報(bào)告應(yīng)包括以下內(nèi)容: —識(shí)別被測試樣需要的所有信息; —依據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)方法(本標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)); —芒果苷的測定結(jié)果; —實(shí)驗(yàn)日期; —測定人員。 此外,還需說明使用的方法,還應(yīng)包括本標(biāo)準(zhǔn)未規(guī)定的或選擇頂?shù)臈l件,以及可能影響結(jié)果的其他條件。測試報(bào)告應(yīng)包括試樣的唯一性資料。 附 錄 A 色 譜 圖 芒果苷標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的紫外檢測色譜圖見圖 A.1。 a 圖 A.1 芒果苷對(duì)照品紫外檢測色譜圖(1μg/mL) 附錄B 方法的精密度和回收率 表1 方法的精密度和回收率 樣品 添加水平(mg/g) 重復(fù) 測定值(mg/g) 平均值(mg/g) 回收率 (%) 平均回收率(%) 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD(%) 溶劑空白 - - 0.00 0.00 - - - 芒果葉 基質(zhì) (本底) 1 20.48 20.80 - - - 2 20.63 - 3 20.60 - 4 20.98 - 5 21.13 - 6 20.63 - 7 20.75 - 8 20.63 - 9 21.18 - 10 21.05 - 芒果葉 2.50 1 22.88 23.25 83.00 98.10 9.74 2 23.23 97.00 3 23.35 102.00 4 23.23 97.00 5 23.00 88.00 6 23.40 104.00 7 23.45 106.00 8 23.18 95.00 9 23.45 106.00 10 23.38 103.00 芒果葉 5.00 1 25.08 25.06 85.50 85.10 7.31 2 25.25 89.00 3 25.15 87.00 4 25.38 91.50 5 24.48 73.50 6 24.78 79.50 7 25.43 92.50 8 24.93 82.50 9 24.78 79.50 10 25.33 90.50 芒果葉 7.50 1 27.30 27.35 86.67 96.35 7.37 2 26.83 80.33 3 27.85 94.00 4 27.88 94.33 5 27.60 90.67 6 26.83 80.33 7 27.40 88.00 8 28.20 98.67 9 27.00 82.67 10 26.60 77.33- 1.請(qǐng)仔細(xì)閱讀文檔,確保文檔完整性,對(duì)于不預(yù)覽、不比對(duì)內(nèi)容而直接下載帶來的問題本站不予受理。
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