高中生物《第三章 第二節(jié) 月季的花藥培養(yǎng)》課件5 新人教版選修1

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1、種子種子有有果皮包果皮包被著，被著，（胚珠胚珠有有子房子房壁包被壁包被著著）被子植物被子植物 裸子植物裸子植物種子種子無無果皮包果皮包被著，被著，（胚珠胚珠無無子房子房壁包被壁包被著著）種子種子花的結(jié)構(gòu)花的結(jié)構(gòu)被子植物的被子植物的有性生殖有性生殖是在是在花里花里進行進行的，的，雌蕊雌蕊和和雄蕊雄蕊是進行有性生殖的是進行有性生殖的主要部分主要部分。雌雌蕊蕊雄雄蕊蕊雌蕊雌蕊的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)花粉粒花粉?；ǚ酃芑ǚ酃芫泳?2(2個個) )卵細胞卵細胞極核極核（一）、（一）、被子植物的花粉發(fā)育被子植物的花粉發(fā)育花絲花絲花藥：花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉粒雄蕊：雄蕊：一、一、基礎(chǔ)知

2、識基礎(chǔ)知識藥隔藥隔：由薄壁細胞構(gòu)成，內(nèi)有維管束由薄壁細胞構(gòu)成，內(nèi)有維管束花藥花藥花粉囊花粉囊（4 4或或2 2）囊壁囊壁花粉粒花粉粒藥隔藥隔藥隔藥隔花花粉粉囊囊囊壁囊壁花粉花粉是是小孢子母細胞小孢子母細胞經(jīng)過經(jīng)過減數(shù)分裂減數(shù)分裂而形成而形成的，因此，花粉是的，因此，花粉是單倍體單倍體的的生殖細胞生殖細胞花粉粒的形成花粉粒的形成經(jīng)歷時期：經(jīng)歷時期：四分體時期、單核期、雙核期四分體時期、單核期、雙核期四分體時期四分體時期( (小孢子小孢子) )有絲有絲分裂分裂單核靠邊期單核靠邊期( (小孢子小孢子) )單核居中期單核居中期( (小孢子小孢子) )花粉母細胞花粉母細胞（小孢子母細胞）（小孢子母細胞）

3、減數(shù)分裂減數(shù)分裂精子精子精子精子有絲有絲分裂分裂花粉管細胞核花粉管細胞核生殖細胞核生殖細胞核生殖細胞生殖細胞營養(yǎng)細胞營養(yǎng)細胞雙核期雙核期兩個精子和一個營養(yǎng)細胞的基因型相同兩個精子和一個營養(yǎng)細胞的基因型相同1 1個個花粉花粉母細母細胞胞4 4個個小孢小孢子子減分減分有分有分4 4個花粉管細胞核個花粉管細胞核4 4個生殖細胞核個生殖細胞核有分有分8 8個精子個精子( (二二) )、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑、產(chǎn)生花粉植株的兩條途徑（三）、影響花藥培養(yǎng)的因素（三）、影響花藥培養(yǎng)的因素1 1、材料的選擇、材料的選擇時期初花期時期初花期選擇合適的選擇合適的花粉發(fā)育時期花粉發(fā)育時期是是 提高誘導(dǎo)成功率的重要因

4、素提高誘導(dǎo)成功率的重要因素 只有某一個時期對離體刺激敏感。只有某一個時期對離體刺激敏感。 最適合花藥培養(yǎng)的小孢最適合花藥培養(yǎng)的小孢子發(fā)育時期為子發(fā)育時期為單核靠邊期單核靠邊期措施？措施？2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成 花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基因花藥培養(yǎng)所采用的培養(yǎng)基因植物的不同而有所變化植物的不同而有所變化3 3、其他因素、其他因素 親本植株的生長條件、材料的親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種的密度等對誘低溫預(yù)處理以及接種的密度等對誘導(dǎo)成功都有一定的影響導(dǎo)成功都有一定的影響六、實驗操作六、實驗操作（一）材料的選取（一）材料的選取某些植物的花粉細胞核不易著色，某些植物的花粉細胞核不易

5、著色，需采用需采用焙花青焙花青- -鉻礬法，鉻礬法，這種方法能這種方法能將將花粉細胞核染成藍黑色。花粉細胞核染成藍黑色。最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋紅法醋酸洋紅法1 1、方法、方法醋酸洋紅法染色機理醋酸洋紅法染色機理 醋酸洋紅為醋酸洋紅為堿性染色劑堿性染色劑，而花粉細，而花粉細胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是胞內(nèi)有染色體，染色體主要成分是DNADNA和蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì), ,易被堿性染料著色易被堿性染料著色染成紅色染成紅色 。醋酸洋紅的配置醋酸洋紅的配置2 2、醋酸洋紅法、醋酸洋紅法將體積分數(shù)將體積分數(shù)4545的醋酸的醋酸100ml100ml煮沸，緩緩加入煮沸，緩緩加入1g1g洋洋紅，在加熱回

6、流紅，在加熱回流8h8h，冷卻至，冷卻至5050，過濾即可。，過濾即可。 將花藥放在載玻片上，加一滴將花藥放在載玻片上，加一滴質(zhì)量分數(shù)質(zhì)量分數(shù)1 1的醋酸洋紅，用鑷柄的醋酸洋紅，用鑷柄將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡將花藥搗碎，蓋上蓋玻片在顯微鏡下檢查。下檢查。染色操作染色操作3 3、焙花青、焙花青鉻釩法鉻釩法 將無水酒精與冰醋酸按體積將無水酒精與冰醋酸按體積比為比為3 3 ：1 1的比例混勻的比例混勻卡諾氏固定液的配制方法卡諾氏固定液的配制方法 將將5g5g鉻明礬鉻明礬KK2 2SOSO4 4CrCr2 2(SO(SO4 4)24H)24H2 2OO加入加入90ml90ml蒸餾水中，溶解后加入

7、蒸餾水中，溶解后加入0.1g0.1g焙焙花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸花青，混勻并加熱至沸騰，煮沸5 5分鐘后分鐘后冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至冷卻至室溫，過濾，加蒸餾水定容至100ml100ml。焙花青焙花青鉻釩溶液的配制方法鉻釩溶液的配制方法 花藥應(yīng)該在花藥應(yīng)該在卡諾氏固定液中卡諾氏固定液中固定固定20min20min，然后取出放在載玻片上，然后取出放在載玻片上，加加焙花青焙花青鉻釩溶液染色，鉻釩溶液染色，蓋上蓋玻片蓋上蓋玻片后在顯微鏡下檢查。后在顯微鏡下檢查。染色操作染色操作（二）材料的消毒（二）材料的消毒1 1、酒精處理、酒精處理花蕾用體積分數(shù)花蕾用體積分數(shù)為為70%70%的酒精的酒

8、精浸泡浸泡3030秒，立即取出。秒，立即取出。無菌水清洗無菌水清洗無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分2 2、消毒液處理、消毒液處理 放入放入質(zhì)量分數(shù)為質(zhì)量分數(shù)為0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液溶液中中2424分鐘（也可質(zhì)量分數(shù)分鐘（也可質(zhì)量分數(shù)為為1%1%的次的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液） 無菌水沖洗無菌水沖洗3535次次 用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，用于培養(yǎng)花藥，實際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個花蕾或幼穗消毒即可。蕾

9、或幼穗消毒即可。（三）接種和培養(yǎng)（三）接種和培養(yǎng)在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出在無菌條件下除去萼片和花瓣用鑷子取出花藥花藥要徹底去除花絲，要徹底去除花絲，因為與花絲相連的因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成1 1、剝?nèi)』ㄋ?、剝?nèi)』ㄋ幬饟p傷花藥，以免誘導(dǎo)出勿損傷花藥，以免誘導(dǎo)出非花粉愈傷組織非花粉愈傷組織注意：注意：立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，立即將花藥接種于培養(yǎng)基上，通常每瓶通常每瓶接種花藥接種花藥7-107-10個個。2 2、接種、接種培養(yǎng)條件：溫度控制在培養(yǎng)條件：溫度控制在2525左右，不左右，不需要光照。需要光照。幼小植株形成后才需要光照。

10、幼小植株形成后才需要光照。 3 3、培養(yǎng)、培養(yǎng)培養(yǎng)：一般經(jīng)過培養(yǎng)：一般經(jīng)過20-3020-30天培養(yǎng)后，會發(fā)天培養(yǎng)后，會發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀現(xiàn)花藥開裂，長出愈傷組織或釋放出胚狀體體 長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移長出愈傷組織則將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生到分化培養(yǎng)基上，以便進一步分化出再生植株植株注意：如果花藥開裂釋放出胚注意：如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，量幼小植株，必須在花藥開裂后必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，盡快將幼小植株分開，分別移植分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株到新的培

11、養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。將很難分開。 在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍形成的花粉植株，常常會出現(xiàn)染色體倍性的變化（主要原因是性的變化（主要原因是營養(yǎng)核和生殖核營養(yǎng)核和生殖核融合融合造成的）造成的）4 4、鑒定和篩選、鑒定和篩選5 5、植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點：、植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點：項目項目相同點相同點不同點不同點植物組織植物組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)技術(shù)離體的植物組離體的植物組織經(jīng)脫分化形織經(jīng)脫分化形成愈傷組織，成愈傷組織，再分化成叢芽，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出根，然誘導(dǎo)出根，然后進行移栽。后進行移栽。外植體為體細胞，染色外植體為體細胞，染色體數(shù)無需加倍。體數(shù)無需加倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)花藥培養(yǎng)技術(shù)技術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)的為取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，植株弱小，單倍體幼苗，植株弱小，高度不育，必須用秋水高度不育，必須用秋水仙素處理，使染色體加仙素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植株的染倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而且為純種。色體數(shù)，而且為純種。