恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測(cè)定－高效液相色譜法（定稿）

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ICS 11.220B 41DB 37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB 37/T XXXXX—XXXX恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測(cè)定－高效液相色譜法Determination maquindox and salicylic acid in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatographyXXXX - XX - XX 發(fā)布 XXXX - XX - XX 實(shí)施山 東 省 市 場(chǎng) 監(jiān) 督 管 理 局 發(fā) 布DB37/ XXXXX—XXXXI目 次前言 II1 范圍 .12 規(guī)范性引用文件 .13 原理 .14 試劑或材料 .15 儀器設(shè)備 .16 測(cè)定步驟 .16.1 供試品溶液的制備 .26.2 對(duì)照品溶液的制備 .26.3 儀器參考條件 .26.4 測(cè)定 .27 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理 .28 檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度 .39 圖譜 .3DB37/ XXXXX—XXXXII前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并監(jiān)督實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：李有志、薄永恒、馮濤、陳玲、徐紅瑋、張琦、劉霄飛、劉道中。DB37/ XXXXX—XXXX1恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測(cè)定－高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸的測(cè)定。本方法乙酰甲喹檢出限為0.25 mg/mL、水楊酸檢出限為0.5 mg/mL。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理恩諾沙星注射液中乙酰甲喹、水楊酸經(jīng)稀釋后用高效液相色譜分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，保留時(shí)間和紫外光譜對(duì)照定性，外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。4.1 乙腈（C 2H3N）：色譜純。4.2 三乙胺（C 6H15N）：優(yōu)級(jí)純。4.3 甲醇（CH 3OH）：色譜純。4.4 磷酸（H 3PO4）：含量≥85 %。4.5 乙酰甲喹（C 11H10N2O3）、水楊酸（C 7H6O3）對(duì)照品：純度≥98 %。4.6 0.025 mol/L 磷酸溶液：量取磷酸溶液（4.4）1.70 mL（準(zhǔn)確至 0.01 mL），置 1 000 mL 容量瓶中，加水 900 mL，用三乙胺調(diào)節(jié) pH 值至 3.0，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻。4.7 流動(dòng)相（0.025 mol/L 磷酸溶液+乙腈=85+15）：取 0.025 moL/L 磷酸溶液 850 mL（4.6）加入乙腈（4.1）150 mL，搖勻，過(guò) 0.22 μm 有機(jī)微孔濾膜?，F(xiàn)用現(xiàn)配。4.8 有機(jī)微孔濾膜：0.22 μm。5 儀器設(shè)備5.1 高效液相色譜儀，配二極管陣列檢測(cè)器。5.2 分析天平：感量 0.000 01 g。6 測(cè)定步驟DB37/ XXXXX—XXXX26.1 供試品溶液的制備量取恩諾沙星注射液1.0 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇（4.3）稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL置50 mL容量瓶中，用流動(dòng)相（4.7）稀釋至刻度，搖勻，即得。6.2 對(duì)照品溶液的制備稱乙酰甲喹、水楊酸對(duì)照品（4.5）50 mg（準(zhǔn)確至0.01 mg），置50 mL容量瓶中，加甲醇（4.3）稀釋至刻度，搖勻，精密量取1 mL置100 mL容量瓶中，用流動(dòng)相（4.7）稀釋至刻度，搖勻，即得，4 ℃保存。 6.3 儀器參考條件6.3.1 高效液相色譜參考條件色譜柱：C 18色譜柱，4.6 mm×250 mm，5 μm，或性能相當(dāng)者；流動(dòng)相：0.025 mol/L磷酸溶液+乙腈=85+15（4.7）；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：25 ℃。6.3.2 二極管陣列檢測(cè)器參考條件定性采集波長(zhǎng)范圍：200 nm～400 nm；定量波長(zhǎng)：232 nm。6.4 測(cè)定6.4.1 定性測(cè)定通過(guò)樣品溶液色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品溶液的保留時(shí)間以及色譜峰的紫外光譜相對(duì)照定性。樣品溶液與對(duì)照品溶液保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2.5 %；樣品溶液色譜峰的紫外光譜與對(duì)照溶液色譜峰的紫外光譜一致，則可判斷樣品中存在乙酰甲喹、水楊酸。6.4.2 定量測(cè)定取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μL注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，記錄232 nm波長(zhǎng)處的色譜圖，外標(biāo)法定量。7 試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度按（1）進(jìn)行計(jì)算：.(1)=SXXCA?式中：CX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；CS ──對(duì)照品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；AX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸峰面積；AS ──對(duì)照品溶液中乙酰甲喹或水楊酸面積。DB37/ XXXXX—XXXX3試樣中乙酰甲喹或水楊酸的含量按（2）進(jìn)行計(jì)算：.(2)50=1XCV?式中：X ──試樣中乙酰甲喹或水楊酸的含量，單位為毫克每毫升（mg/mL）；CX ──供試品溶液中乙酰甲喹或水楊酸濃度，單位為微克每毫升（μg/mL）；V ──供試品取樣量，單位為毫升（mL）。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度本方法乙酰甲喹檢出限為0.25 mg/mL、水楊酸檢出限為0.5 mg/mL，回收率在95 %～105 %之間，在重復(fù)性條件下兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的5 %。9 圖譜恩諾沙星注射液中添加乙酰甲喹（20 μg/mL）、水楊酸（10 μg/mL）的液相色譜圖見(jiàn)圖1。 乙 -7.3568. 乙 -16.37AU0.1.203.450.67 乙.501.2.503.40.5.06.570.8.509.10.51.02.5130.41.50.160.571.08.5190.2圖 1 恩諾沙星注射液中添加乙酰甲喹（20 μg/mL）、水楊酸（10 μg/mL）的液相色譜圖恩諾沙星注射液空白色譜圖見(jiàn)圖2。 8.73AU0.1.203.450.67 乙.501.2.503.40.5.06.570.8.509.10.51.02.5130.41.50.160.571.08.5190.2圖 2 恩諾沙星注射液空白色譜圖_________________________________