恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的測(cè)定—高效液相色譜法

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ICS 11.220B 41DB 37山 東 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB 37/T XXXXX—XXXX恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的測(cè)定—高效液相色譜法Determination of sulfonamides in enrofloxacin injection by high performance liquid chromatographyXXXX - XX - XX 發(fā)布 XXXX - XX - XX 實(shí)施山 東 省 市 場(chǎng) 監(jiān) 督 管 理 局 發(fā) 布DB37/ XXXXX—XXXXI目 次前言 II1 范圍 .12 規(guī)范性引用文件 .13 原理 .14 試劑或材料 .15 儀器設(shè)備 .16 測(cè)定步驟 .26.1 供試品溶液的制備 .26.2 對(duì)照品溶液的制備 .26.3 儀器參考條件 .26.4 定性定量測(cè)定 .27 數(shù)據(jù)處理 .38 精密度 .3附 錄 A （資料性附錄） 恩諾沙星注射液中磺胺類藥物分辨率圖 4附 錄 B （資料性附錄） 恩諾沙星及各磺胺類藥物光譜圖 5DB37/ XXXXX—XXXXII前 言本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T 1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并監(jiān)督實(shí)施。本標(biāo)準(zhǔn)由山東省畜牧業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：山東省獸藥質(zhì)量檢驗(yàn)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：馮濤、李有志、劉道中、薄永恒、章安源、徐紅瑋。DB37/ XXXXX—XXXX1恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的測(cè)定—高效液相色譜法1 范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了恩諾沙星注射液中磺胺類藥物的高效液相色譜測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于恩諾沙星注射液中磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺氯吡嗪鈉的測(cè)定。本方法檢出限磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺喹噁啉為1 μg/mL；磺胺二甲嘧啶、磺胺對(duì)甲氧嘧啶為2 μg/mL；磺胺甲噁唑?yàn)? μg/mL；磺胺間甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪鈉為5 μg/mL。2 規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3 原理恩諾沙星注射液中添加的磺胺類藥物經(jīng)稀釋后用HPLC分離，二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)，保留時(shí)間和紫外光譜對(duì)照定性，外標(biāo)法定量。4 試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純；水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。4.1 乙腈（C 2H3N）：色譜純。4.2 三乙胺（C 6H15N）：分析純。4.3 磷酸（H 3PO4）：含量≥85 %。4.4 0.025 mol/L 磷酸溶液：稱取磷酸溶液（4.3）2.88 g（準(zhǔn)確至 0.01 g），置 1 000 mL 容量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，用三乙胺調(diào)節(jié) pH 值至 3.0，過(guò) 0.45 μm 微孔濾膜備用。4.5 稀釋液：乙腈+0.025 mol/L 磷酸溶液=17+83。4.6 磺胺類藥物對(duì)照品：磺胺嘧啶對(duì)照品（C 10H10N4O2S），含量 99.5 %；磺胺間甲氧嘧啶對(duì)照品（C 11H12N4O3S），含量 99.4 %；磺胺二甲嘧啶對(duì)照品（C 12H14N4O2S），含量 99.2 %；磺胺氯吡嗪鈉對(duì)照品（C 10H9ClN4O2S），含量 100.0 %；磺胺喹噁啉對(duì)照品（C 14H11N4O2S），含量 99.6 %；磺胺甲噁唑?qū)φ掌罚– 10H11N3O3S），含量 99.8 %；磺胺對(duì)甲氧嘧啶對(duì)照品（C 11H12N4O3S），含量 100.0 %；恩諾沙星對(duì)照品（C 19H22FN3O3），含量 99.5 %；磺胺噻唑?qū)φ掌罚– 9H9N3O2S2），含量 100.0 %。4.7 有機(jī)微孔濾膜：0.45 μm。5 儀器設(shè)備DB37/ XXXXX—XXXX25.1 高效液相色譜儀：配二極管陣列檢測(cè)器。5.2 分析天平：感量 0.000 01 g、0.01 g。6 測(cè)定步驟6.1 供試品溶液的制備精密量取恩諾沙星注射液適量（約相當(dāng)于恩諾沙星100 mg），置100 mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，精密量取上述溶液5 mL，置100 mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，待上機(jī)。6.2 對(duì)照品溶液的制備稱取磺胺類藥物對(duì)照品各100 mg（精確至0.000 01 g），置100 mL容量瓶?jī)?nèi)，用稀釋液溶解并定容至刻度，搖勻；精密量取5 mL，置100 mL容量瓶中，用稀釋液（4.6）定容至刻度，搖勻，待上機(jī)。6.3 儀器參考條件6.3.1 液相色譜條件色譜柱：C 18色譜柱，4.6 mm×250 mm，3.5 μm，或性能相當(dāng)者。流動(dòng)相：A乙腈、B 0.025 mol/L磷酸溶液，梯度洗脫，梯度洗脫程序見表1。流速：1.0 mL/min。進(jìn)樣量：10 μL。柱溫：30 ℃。表 1 液相色譜梯度洗脫程序時(shí)間（min） 流動(dòng)相 A(%) 流動(dòng)相 B(%)0 8 9215 20 8022 35 6523 8 9228 8 926.3.2 二極管陣列檢測(cè)器參考條件定性采集波長(zhǎng)范圍：200 nm～400 nm。定量波長(zhǎng)：270 nm。6.4 定性定量測(cè)定6.4.1 定性測(cè)定通過(guò)樣品溶液色譜圖的保留時(shí)間與相應(yīng)對(duì)照品溶液的保留時(shí)間以及色譜峰的紫外光譜相對(duì)照定性。樣品溶液與對(duì)照品溶液保留時(shí)間的相對(duì)偏差不大于2.5 %，且為單一物質(zhì)峰（純度角小于純度閾值）；樣品溶液色譜峰的紫外光譜與對(duì)照溶液色譜峰的紫外光譜一致（匹配角小于匹配閾值），且最大吸收波長(zhǎng)一致（差異不大于±2 nm）則可判斷樣品中存在該磺胺類藥物。DB37/ XXXXX—XXXX36.4.2 定量測(cè)定取供試品溶液和對(duì)照品溶液各10 μl注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，記錄270 nm波長(zhǎng)處的色譜圖，外標(biāo)法定量。7 數(shù)據(jù)處理試樣中各磺胺類藥物的含量以質(zhì)量濃度C X計(jì)，數(shù)值以微克每毫升（μg/mL）表示，按公式(1)計(jì)算：.(1)=SXCA?式中：CX ──供試品溶液中磺胺類藥物濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；CS ──對(duì)照品溶液中磺胺類藥物濃度，單位為微克每毫升(μg/mL)；AX ──供試品溶液中磺胺類藥物峰面積；AS ──對(duì)照品溶液中磺胺類藥物峰面積。測(cè)定結(jié)果用平行測(cè)定的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8 精密度本方法回收率在90 %～110 %之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤5 %。DB37/ XXXXX—XXXX4A A附 錄 A（資料性附錄）恩諾沙星注射液中磺胺類藥物分辨率圖圖 A.1 陽(yáng)性添加色譜圖DB37/ XXXXX—XXXX5B B附 錄 B（資料性附錄）恩諾沙星及各磺胺類藥物光譜圖圖 B.1 磺胺嘧啶光譜圖圖 B.2 磺胺噻唑光譜圖圖 B.3 磺胺二甲嘧啶光譜圖圖 B.4 磺胺對(duì)甲氧嘧啶光譜圖DB37/ XXXXX—XXXX6圖 B.5 磺胺間甲氧嘧啶光譜圖 圖 B.6 磺胺甲噁唑光譜圖圖 B.7 磺胺氯吡嗪鈉光譜圖圖 B.8 磺胺喹噁啉鈉光譜圖圖 B.9 恩諾沙星光譜圖_________________________________