2019-2020年高考生物總復(fù)習(xí)——單元十 現(xiàn)代生物科技專題.doc

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2019-2020年高考生物總復(fù)習(xí)——單元十 現(xiàn)代生物科技專題 1. (xx全國課標(biāo)卷Ⅰ，40)某一質(zhì)粒載體如圖所示，外源DNA插入到Ampr或Tetr中會導(dǎo)致相應(yīng)的基因失活(Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，Tetr表示四環(huán)素抗性基因)。有人將此質(zhì)粒載體用BamHⅠ酶切后，與用BamHⅠ酶切獲得的目的基因混合，加入DNA連接酶進(jìn)行連接反應(yīng)，用得到的混合物直接轉(zhuǎn)化大腸桿菌，結(jié)果大腸桿菌有的未被轉(zhuǎn)化，有的被轉(zhuǎn)化。被轉(zhuǎn)化的大腸桿菌有三種，分別是含有環(huán)狀目的基因、含有質(zhì)粒載體、含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌?；卮鹣铝袉栴}： (1)質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有________(答出兩點(diǎn)即可)，而作為基因表達(dá)載體，除滿足上述基本條件外，還需具有啟動子和終止子。 (2)如果用含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，在上述四種大腸桿菌細(xì)胞中，未被轉(zhuǎn)化的和僅含環(huán)狀目的基因的細(xì)胞是不能區(qū)分的，其原因是__________________； 并且________和________的細(xì)胞也是不能區(qū)分的，其原因是________________。 在上述篩選的基礎(chǔ)上，若要篩選含有插入了目的基因的重組質(zhì)粒的大腸桿菌的單菌落，還需使用含有________的固體培養(yǎng)基。 (3)基因工程中，某些噬菌體經(jīng)改造后可以作為載體，其DNA復(fù)制所需的原料來自于_________________________________________________________________。 2.(xx課標(biāo)Ⅱ，40)植物甲具有極強(qiáng)的耐旱性，其耐旱性與某個基因有關(guān)。若從該植物中獲得該耐旱基因，并將其轉(zhuǎn)移到耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。 回答下列問題： (1)理論上，基因組文庫含有生物的________基因；而cDNA文庫中含有生物的________基因。 (2)若要從植物甲中獲得耐旱基因，可首先建立該植物的基因組文庫，再從中________出所需的耐旱基因。 (3)將耐旱基因?qū)朕r(nóng)桿菌，并通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將其導(dǎo)入植物________的體細(xì)胞中，經(jīng)過一系列的過程得到再生植株。要確認(rèn)該耐旱基因是否在再生植株中正確表達(dá)，應(yīng)檢測此再生植株中該基因的________，如果檢測結(jié)果呈陽性，再在田間試驗(yàn)中檢測植株的______________是否得到提高。 (4)假如用得到的二倍體轉(zhuǎn)基因耐旱植株自交，子代中耐旱與不耐旱植株的數(shù)量比為3∶1時，則可推測該耐旱基因整合到了__________________(填“同源染色體的一條上”或“同源染色體的兩條上”)。 3.(xx北京卷，5)在應(yīng)用農(nóng)桿菌侵染植物葉片獲得轉(zhuǎn)基因植株的常規(guī)實(shí)驗(yàn)步驟中，不需要的是(　　) A.用攜帶目的基因的農(nóng)桿菌侵染植物細(xì)胞 B.用選擇培養(yǎng)基篩選導(dǎo)入目的基因的細(xì)胞 C.用聚乙二醇誘導(dǎo)轉(zhuǎn)基因細(xì)胞的原生質(zhì)體融臺 D.用適當(dāng)比例的生長素和細(xì)胞分裂素誘導(dǎo)愈傷組織生芽 4.(xx重慶理綜，6)下列有關(guān)人胰島素基因表達(dá)載體的敘述，正確的是(　　) A.表達(dá)載體中的胰島素基因可通過人肝細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄獲得 B.表達(dá)載體的復(fù)制和胰島素基因的表達(dá)均啟動于復(fù)制原(起)點(diǎn) C.借助抗生素抗性基因可將含胰島素基因的受體細(xì)胞篩選出來 D.啟動子和終止密碼子均在胰島素基因的轉(zhuǎn)錄中起作用 5.(xx高考江蘇卷，T23)下列關(guān)于基因工程技術(shù)的敘述，正確的是(　　) A.切割質(zhì)粒的限制性核酸內(nèi)切酶均特異性地識別6 個核苷酸序列 B.PCR 反應(yīng)中溫度的周期性改變是為了DNA 聚合酶催化不同的反應(yīng) C.載體質(zhì)粒通常采用抗生素合成基因作為篩選標(biāo)記基因 D.抗蟲基因即使成功地插入到植物細(xì)胞染色體上也未必能正常表達(dá) 6.(xx天津卷，7)人血清白蛋白(HSA)具有重要的醫(yī)用價值，只能從血漿中制備。下圖是以基因工程技術(shù)獲取重組HSA(rHSA)的兩條途徑。 (1)為獲取HSA基因，首先需采集人的血液，提取________合成總cDNA，然后以cDNA為模板，采用PCR技術(shù)擴(kuò)增HSA基因。下圖中箭頭表示一條引物結(jié)合模板的位置及擴(kuò)增方向，請用箭頭在方框內(nèi)標(biāo)出另一條引物的位置及擴(kuò)增方向。 (2)啟動子通常具有物種及組織特異性，構(gòu)建在水稻胚乳細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)rHSA的載體，需要選擇的啟動子是________(填寫字母，單選)。 A.人血細(xì)胞啟動子 B.水稻胚乳細(xì)胞啟動子 C.大腸桿菌啟動子 D.農(nóng)桿菌啟動子 (3)利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻受體細(xì)胞的過程中，需添加酚類物質(zhì)，其目的是_____________________________________________________________________。 (4)人體合成的初始HSA多肽，需要經(jīng)過膜系統(tǒng)加工形成正確的空間結(jié)構(gòu)才能有活性。與途徑Ⅱ相比，選擇途徑Ⅰ獲取rHSA的優(yōu)勢是_____________________。 (5)為證明rHSA具有醫(yī)用價值，須確認(rèn)rHSA與________的生物學(xué)功能一致。 7.(xx江蘇卷，33)下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點(diǎn)，圖1、圖2中標(biāo)注了相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)，其中切割位點(diǎn)相同的酶不重復(fù)標(biāo)注。請回答下列問題： (1)用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過________酶作用后獲得重組質(zhì)粒。為了擴(kuò)增重組質(zhì)粒，需將其轉(zhuǎn)入處于________態(tài)的大腸桿菌。 (2)為了篩選出轉(zhuǎn)入了重組質(zhì)粒的大腸桿菌，應(yīng)在篩選平板培養(yǎng)基中添加________，平板上長出的菌落，常用PCR鑒定，所用的引物組成為圖2中________。 (3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為________，對于該部位，這兩種酶________(填“都能”、“都不能”或“只有一種能”)切開。 (4)若用Sau3AⅠ切圖1質(zhì)粒最多可能獲得________種大小不同的DNA片段。 8.(xx福建卷，33)GDNF是一種神經(jīng)營養(yǎng)因子，對損傷的神經(jīng)細(xì)胞具有營養(yǎng)和保護(hù)作用。研究人員構(gòu)建了含GDNF基因的表達(dá)載體(如圖1所示)，并導(dǎo)入到大鼠神經(jīng)干細(xì)胞中，用于干細(xì)胞基因治療的研究。請回答： (1)在分離和培養(yǎng)大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的過程中，使用胰蛋白酶的目的是__________。 (2)構(gòu)建含GDNF基因的表達(dá)載體時，需選擇圖1中的________限制酶進(jìn)行酶切。 (3)經(jīng)酶切后的載體和GDNF基因進(jìn)行連接，連接產(chǎn)物經(jīng)篩選得到的載體主要有3種：單個載體自連、GDNF基因與載體正向連接、GDNF基因與載體反向連接(如圖1所示)。為鑒定這3種連接方式，選擇HpaⅠ酶和BamHⅠ酶對篩選得到的載體進(jìn)行雙酶切，并對酶切后的DNA片段進(jìn)行電泳分析，結(jié)果如圖2所示。圖中第________泳道顯示所鑒定的載體是正向連接的。 (4)將正向連接的表達(dá)載體導(dǎo)入神經(jīng)干細(xì)胞后，為了檢測GDNF基因是否成功表達(dá)，可用相應(yīng)的________與提取的蛋白質(zhì)雜交。當(dāng)培養(yǎng)的神經(jīng)干細(xì)胞達(dá)到一定密度時，需進(jìn)行________培養(yǎng)以得到更多數(shù)量的細(xì)胞，用于神經(jīng)干細(xì)胞移植治療實(shí)驗(yàn)。 9.(xx天津卷，8)嗜熱土壤芽孢桿菌產(chǎn)生的β葡萄糖苷酶(BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其在工業(yè)生產(chǎn)中更好地應(yīng)用，開展了以下試驗(yàn)： Ⅰ.利用大腸桿菌表達(dá)BglB酶 (1)PCR擴(kuò)增bglB基因時，選用________基因組DNA作模板。 (2)下圖為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。bglB基因不含圖中限制酶識別序列。為使PCR擴(kuò)增的bglB基因重組進(jìn)入該質(zhì)粒，擴(kuò)增的bglB基因兩端需分別引入________和________不同限制酶的識別序列。 注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同。 (3)大腸桿菌不能降解纖維素，但轉(zhuǎn)入上述建構(gòu)好的表達(dá)載體后則獲得了降解纖維素的能力，這是因?yàn)開____________________________________________________ ______________________________________________________________________。 1.(xx深圳調(diào)研)葉綠體轉(zhuǎn)基因技術(shù)是將外源基因整合到葉綠體基因組中，該技術(shù)能有效改良植物的品質(zhì)。請回答： (1)轉(zhuǎn)基因技術(shù)的核心步驟是________________，完成該步驟所需要的酶有________________。 (2)將植物體細(xì)胞處理得到原生質(zhì)體，再通過________或________法，將目的基因?qū)朐|(zhì)體，使原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁之后，通過________技術(shù)培養(yǎng)可得到相應(yīng)的轉(zhuǎn)基因幼苗。 (3)來自原核生物中有重要價值的外源基因，無需改造和修飾就可在葉綠體中高效表達(dá)，就此分析，原因是_________________________________________________ ______________________________________________________________________。 (4)對大多數(shù)高等植物而言，與傳統(tǒng)的細(xì)胞核轉(zhuǎn)基因相比，葉綠體轉(zhuǎn)基因更穩(wěn)定，其遺傳方式________(答“遵循”或“不遵循”)分離定律，不會隨________(“花粉”或“卵細(xì)胞”)傳給后代，從而保持了________(“父本”或“母本”)的遺傳特性。 2.(xx南平質(zhì)檢)下圖1顯示了某DNA片段的部分堿基序列和長度(bp表示堿基對)以及其中含有的目的基因D。圖2表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列?，F(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ共4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG。 (1)圖1的一條多核苷酸鏈中，位于相鄰兩個堿基之間的是________。 A.氫鍵 B.磷酸、脫氧核糖 C.脫氧核糖 D.脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖 (2)若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1的DNA片段，產(chǎn)生的末端是________末端，其產(chǎn)物長度為________。 (3)若圖1中虛線方框內(nèi)的堿基對被T－A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛騞。從雜合子中分離出圖1及其對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有________種不同長度的DNA片段。 (4)若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后，再用________進(jìn)行處理，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是________。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌，為了篩選出含重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要用添加________的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌。經(jīng)檢測，部分含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌菌株中目的基因D不能正確表達(dá)，其最可能的原因是____________________________________________________。 3.(xx襄陽市調(diào)研)下圖為培育轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的技術(shù)流程。請據(jù)圖回答： (1)進(jìn)行過程①，先要運(yùn)用的酶是__________________________________________。 (2)基因工程核心步驟的名稱是___________________________________________。 (3)在培育成功的轉(zhuǎn)基因抗蟲棉的傳種接代過程中，抗蟲基因和標(biāo)記基因是否遵循基因的自由組合定律________。為什么？__________________________________。 (4)過程②采用最多的方法是________。在實(shí)驗(yàn)室中，檢測抗蟲基因是否整合到棉花細(xì)胞的DNA分子上的方法是________。 (5)經(jīng)過③過程形成愈傷組織的細(xì)胞分裂方式是________。 (6)過程④所表達(dá)的兩個重要的生理現(xiàn)象是________。 4.(xx福建省三明市?？? 絞股藍(lán)細(xì)胞中含有抗煙草花葉病毒(TMV)基因，可以合成一種抗TMV蛋白，葉片對TMV具有抗感染性。煙草是重要的經(jīng)濟(jì)作物，由于TMV的感染會導(dǎo)致大幅度減產(chǎn)。研究人員利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出了抗TMV的煙草，主要流程如下圖所示。 (1)科學(xué)家首先從絞股藍(lán)細(xì)胞中提取抗TMV基因轉(zhuǎn)錄的RNA，然后合成目的基因。圖中①過程表示________。 (2)由圖分析，在過程③構(gòu)建的重組Ti質(zhì)粒上應(yīng)該含有的標(biāo)記基因是________基因，重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入煙草體細(xì)胞的方法是________。 (3)在過程⑤培養(yǎng)基中除含有卡那霉素及植物必需的各種營養(yǎng)成分外，還必須添加________，以保證受體細(xì)胞能培養(yǎng)成再生植株。 (4)過程⑥可采取________的方法，檢測植株是否合成了抗TMV蛋白。在個體水平的鑒定過程中，可通過________的方法來確定植株是否具有抗性。 5.(xx寶雞九校聯(lián)考)科學(xué)家將魚抗凍蛋白基因轉(zhuǎn)入番茄，使番茄的耐寒能力大大提高。下圖一是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程的示意圖，圖二為質(zhì)粒限制酶酶切圖譜。魚的抗凍蛋白基因不含圖中限制酶識別序列，Ampr為抗氨芐青霉素基因，其中①～④是轉(zhuǎn)基因抗凍番茄培育過程中的相關(guān)步驟，Ⅰ、Ⅱ表示相關(guān)結(jié)構(gòu)或細(xì)胞。請據(jù)圖作答： (1)獲取魚的抗凍蛋白基因途徑主要有____________。為了在番茄中獲得抗凍蛋白必須將抗凍蛋白基因連接在質(zhì)粒中的________之后。圖中③、④依次表示組織培養(yǎng)過程中番茄組織細(xì)胞的______________過程。 (2)在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，可用一種或者多種限制酶進(jìn)行切割。該酶的特點(diǎn)______________________________________________________________________。 在此實(shí)例中，應(yīng)該選用限制酶________切割。 (3)要利用培養(yǎng)基篩選出已導(dǎo)入含魚的抗凍蛋白基因的番茄細(xì)胞，應(yīng)使基因表達(dá)載體Ⅰ中含有________作為標(biāo)記基因。 (4)研究人員通常采用________法將魚抗凍蛋白基因?qū)敕鸭?xì)胞內(nèi)。通常采用________技術(shù)，在分子水平檢測目的基因是否翻譯形成了相應(yīng)的蛋白質(zhì)。 6.(xx福州質(zhì)檢)我們?nèi)粘３缘拇竺字需F含量極低，科研人員通過基因工程等技術(shù)，培育出了鐵含量比普通大米高60%的轉(zhuǎn)基因水稻，改良了稻米的營養(yǎng)品質(zhì)。下圖為培育轉(zhuǎn)基因水稻過程示意圖，請分析回答。 (1)鐵結(jié)合蛋白基因來自菜豆，可通過________擴(kuò)增獲取，如果該基因脫氧核苷酸序列已知且比較小，還可用________方法直接人工合成。 (2)構(gòu)建重組Ti質(zhì)粒時，通常先要用________分別切割________。將重組Ti質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌時，可以用________處理農(nóng)桿菌，使重組Ti質(zhì)粒易于導(dǎo)入。 (3)將含有重組Ti質(zhì)粒的農(nóng)桿菌與水稻愈傷組織共同培養(yǎng)時，通過培養(yǎng)基2的篩選培養(yǎng)，可以獲得________；培養(yǎng)基3與培養(yǎng)基2的區(qū)別是________。檢測培育轉(zhuǎn)基因水稻的目的是否達(dá)到，需要檢測轉(zhuǎn)基因稻米________。 (4)為研究外源基因的遺傳方式，將T0代植株上收獲的種子種植成T1代株系，檢測各單株的潮霉素抗性。在檢測的多數(shù)T1代株系內(nèi)，抗潮霉素植株與潮霉素敏感植株的比例為3∶1，此結(jié)果說明外源基因的遺傳符合________。有少數(shù)T1代株系的所有植株都表現(xiàn)為對潮霉素敏感，但其體內(nèi)能檢測到鐵結(jié)合蛋白基因，造成這一結(jié)果最可能的原因是________________。 7.(xx天津六校第一次聯(lián)考)在培育轉(zhuǎn)基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因(kan)常作為標(biāo)記基因，只有含卡那霉素抗性基因的細(xì)胞才能在卡那霉素培養(yǎng)基上生長。下圖為獲得抗蟲棉的技術(shù)流程。請據(jù)圖回答： (1)A過程需要的酶有__________________________________________________。 (2)要把重組質(zhì)粒導(dǎo)入土壤農(nóng)桿菌，首先必須用________處理土壤農(nóng)桿菌，使土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)變?yōu)開_______態(tài)；然后將____________________在緩沖液中混合培養(yǎng)完成轉(zhuǎn)化過程。 (3)含有重組質(zhì)粒的土壤農(nóng)桿菌侵染離體棉花葉片組織后，將離體棉花葉片組織培養(yǎng)成再生植株要經(jīng)過[D]________和[E]________。如要確保再生植株中含有抗蟲基因，可在D過程的培養(yǎng)基中加入________。 (4)如想利用分子雜交技術(shù)檢測再生植株中的抗蟲基因是否轉(zhuǎn)錄，應(yīng)該用放射性同位素標(biāo)記的目的基因作為探針與________雜交。 8.(xx泉州質(zhì)檢)R－7是家蠶體內(nèi)的一種小分子非編碼RNA，可與某些mRNA尾端的一段非編碼序列(3′－UTR)結(jié)合，進(jìn)而影響基因的表達(dá)。為研究R－7是否影響家蠶基因B(調(diào)控家蠶眼睛發(fā)育)的表達(dá)，科研人員將基因B中對應(yīng)3′－UTR的DNA片段與熒光素酶基因(R－7不影響熒光素酶基因的表達(dá))重組后導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞觀察其表達(dá)結(jié)果。請回答： (1)利用PCR技術(shù)擴(kuò)增基因B對應(yīng)3′－UTR的DNA片段，應(yīng)先依據(jù)該基因的一段核苷酸序列合成________。 (2)利用________酶可將上述DNA片段插入熒光素酶基因表達(dá)載體(如圖)上的位點(diǎn)________，構(gòu)建重組載體。 (3)將重組載體與R－7共同導(dǎo)入家蠶胚胎細(xì)胞，同時應(yīng)設(shè)置兩個對照組，即將__________________、__________________分別導(dǎo)入兩組家蠶胚胎細(xì)胞。 (4)科研人員分別從實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞中提取________，經(jīng)處理檢測后獲得相對熒光值(在適宜條件下，熒光素酶可催化熒光素發(fā)生氧化反應(yīng)并發(fā)出熒光)，其結(jié)果如圖。 (5)依據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推斷，R－7影響基因B的表達(dá)，即通過遵循________原則，R－7與基因B所轉(zhuǎn)錄的mRNA的3′－uTR結(jié)合，進(jìn)而________(填“促進(jìn)”或“抑制”)基因B的表達(dá)。 課時考點(diǎn)41　基因工程的應(yīng)用及蛋白質(zhì)工程 1.(xx課標(biāo)卷Ⅰ，40)HIV屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒，是艾滋病的病原體?；卮鹣铝袉栴}： (1)用基因工程方法制備HIV的某蛋白(目的蛋白)時，可先提取HIV中的________，以其作為模板，在________的作用下合成________，獲取該目的蛋白的基因，構(gòu)建重組表達(dá)載體，隨后導(dǎo)入受體細(xì)胞。 (2)從受體細(xì)胞中分離純化出目的蛋白，該蛋白作為抗原注入機(jī)體后，刺激機(jī)體產(chǎn)生的可與此蛋白結(jié)合的相應(yīng)分泌蛋白是________，該分泌蛋白可用于檢測受試者血清中的HIV，檢測的原理是________。 (3)已知某種菌導(dǎo)致的肺炎在健康人群中罕見，但是在艾滋病患者中卻多發(fā)。引起這種現(xiàn)象的根本原因是HIV主要感染和破壞了患者的部分________細(xì)胞，降低了患者免疫系統(tǒng)的防衛(wèi)功能。 (4)人的免疫系統(tǒng)有________癌細(xì)胞的功能。艾滋病患者由于免疫功能缺陷，易發(fā)生惡性腫瘤。 2.(xx全國卷Ⅱ，40)已知生物體內(nèi)有一種蛋白質(zhì)(P)，該蛋白質(zhì)是一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，由305個氨基酸組成。如果將P分子中158位的絲氨酸變成亮氨酸，240位的谷氨酰胺變成苯丙氨酸，改變后的蛋白質(zhì)(P1)不但保留P的功能，而且具有了酶的催化活性?；卮鹣铝袉栴}： (1)從上述資料可知，若要改變蛋白質(zhì)的功能，可以考慮對蛋白質(zhì)的________________進(jìn)行改造。 (2)以P基因序列為基礎(chǔ)，獲得P1基因的途徑有修飾________________________ 基因或合成________基因，所獲得的基因表達(dá)時是遵循中心法則的，中心法則的全部內(nèi)容包括__________________________________________________________ ______________________________________________________________________ 的復(fù)制，以及遺傳信息在不同分子之間的流動，即：__________________________ ______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________。 (3)蛋白質(zhì)工程也被稱為第二代基因工程，其基本途徑是從預(yù)期蛋白質(zhì)功能出發(fā)，通過_________________________________________________________________ 和____________________________，進(jìn)而確定相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列，據(jù)此獲得基因，再經(jīng)表達(dá)、純化獲得蛋白質(zhì)，之后還需要對合成蛋白質(zhì)的生物____________進(jìn)行鑒定。 3.(xx廣東卷，25)(雙選)下圖為培育轉(zhuǎn)基因山羊生產(chǎn)人β酪蛋白的流程圖。 下列敘述正確的是(　　) A.過程①所用的人β酪蛋白基因可從人cDNA文庫中獲得 B.過程②可選用囊胚期或原腸胚期的胚胎進(jìn)行移植 C.過程③可使用胚胎分割技術(shù)擴(kuò)大轉(zhuǎn)基因山羊群體 D.過程④人β酪蛋白基因在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯 4.(xx高考重慶卷，T4)下圖是利用基因工程培育抗蟲植物的示意圖。以下相關(guān)敘述，正確的是(　　) A.②的構(gòu)建需要限制性核酸內(nèi)切酶和DNA聚合酶參與 B.③侵染植物細(xì)胞后，重組Ti質(zhì)粒整合到④的染色體上 C.④的染色體上若含抗蟲基因，則⑤就表現(xiàn)出抗蟲性狀 D.⑤只要表現(xiàn)出抗蟲性狀就表明植株發(fā)生了可遺傳變異 5.(xx重慶卷，2)生物技術(shù)安全性和倫理問題是社會關(guān)注的熱點(diǎn)。下列敘述，錯誤的是(　　) A.應(yīng)嚴(yán)格選擇轉(zhuǎn)基因植物的目的基因，避免產(chǎn)生對人類有害的物質(zhì) B.當(dāng)今社會的普遍觀點(diǎn)是禁止克隆人的實(shí)驗(yàn)，但不反對治療性克隆 C.反對設(shè)計試管嬰兒的原因之一是有人濫用此技術(shù)選擇性設(shè)計嬰兒 D.生物武器是用微生物、毒素、干擾素及重組致病菌等來形成殺傷力 6.(xx江蘇，15)下列關(guān)于轉(zhuǎn)基因生物安全性的敘述中，錯誤的是(　　) A.我國已經(jīng)對轉(zhuǎn)基因食品和轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品強(qiáng)制實(shí)施了產(chǎn)品標(biāo)識制度 B.國際上大多數(shù)國家都在轉(zhuǎn)基因食品標(biāo)簽上警示性注明可能的危害 C.開展風(fēng)險評估、預(yù)警跟蹤和風(fēng)險管理是保障轉(zhuǎn)基因生物安全的前提 D.目前對轉(zhuǎn)基因生物安全性的爭論主要集中在食用安全性和環(huán)境安全性上 7.(xx江蘇卷，32)胰島素A、B鏈分別表達(dá)法是生產(chǎn)胰島素的方法之一。圖1是該方法所用的基因表達(dá)載體，圖2表示利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素的基本流程(融合蛋白A、B分別表示β半乳糖苷酶與胰島素A、B鏈融合的蛋白)。請回答下列問題： (1)圖1基因表達(dá)載體中沒有標(biāo)注出來的基本結(jié)構(gòu)是________。 (2)圖1中啟動子是________酶識別和結(jié)合的部位，有了它才能啟動目的基因的表達(dá)；氨芐青霉素抗性基因的作用是________________________。 (3)構(gòu)建基因表達(dá)載體時必需的工具酶有____________________。 (4)β半乳糖苷酶與胰島素A鏈或B鏈融合表達(dá)，可將胰島素肽鏈上蛋白酶的切割位點(diǎn)隱藏在內(nèi)部，其意義在于 ____________________________________________________________________________________________________________________________________________。 (5)溴化氰能切斷肽鏈中甲硫氨酸羧基端的肽鍵，用溴化氰處理相應(yīng)的融合蛋白能獲得完整的A鏈或B鏈，且β半乳糖苷酶被切成多個肽段，這是因?yàn)? ______________________________________________________________________。 (6)根據(jù)圖2中胰島素的結(jié)構(gòu)，請推測每個胰島素分子中所含游離氨基的數(shù)量。你的推測結(jié)果是________，理由是__________________________________________ ______________________________________________________________________。 8.(xx山東卷，36)[現(xiàn)代生物科技專題]人組織纖溶酶原激活物(htPA)是一種重要的藥用蛋白，可在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中獲得。流程如下： (1)htPA基因與載體用________________切割后，通過DNA連接酶連接，以構(gòu)建重組表達(dá)載體。檢測目的基因是否已插入受體細(xì)胞DNA，可采用________技術(shù)。 (2)為獲取更多的卵(母)細(xì)胞，要對供體母羊注射促性腺激素，使其________。采集的精子需要經(jīng)過__________，才具備受精能力。 (3)將重組表達(dá)載體導(dǎo)入受精卵常用的方法是________。為了獲得母羊，移植前需對已成功轉(zhuǎn)入目的基因的胚胎進(jìn)行________。利用胚胎分割和胚胎移植技術(shù)可獲得多個轉(zhuǎn)基因個體，這體現(xiàn)了早期胚胎細(xì)胞的________。 (4)若在轉(zhuǎn)htPA基因母羊的羊乳中檢測到________，說明目的基因成功表達(dá)。 1.(xx南昌一模)下圖為某生物的一種多肽酶的基因內(nèi)部和周圍的DNA組成情況。其中標(biāo)出了轉(zhuǎn)錄的起始部位(ini)和終止部位(ter)，翻譯的起始密碼子對應(yīng)序列(sta)的第一個堿基的位置，終止密碼子對應(yīng)序列(sto)的第一個堿基的位置，以及基因中內(nèi)含子的界限(↓)(距離以kb表示，但未按比例畫出)。 (1)轉(zhuǎn)錄的起始部位稱為________，是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶________的部位。 (2)該基因來自________(填“基因組文庫”或“cDNA文庫”)，該文庫包括該生物的________(填“全部”或“部分”)基因。 (3)翻譯時與密碼子發(fā)生堿基互補(bǔ)配對的是________上的反密碼子，該物質(zhì)的主要功能是________。 (4)基因工程在原則上只能產(chǎn)生________的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)工程是以蛋白質(zhì)分子的________及其與生物功能的關(guān)系作為基礎(chǔ)。 2.(xx沈陽質(zhì)監(jiān))歐洲哥廷根小型豬因其器官大小、結(jié)構(gòu)和生理特點(diǎn)等方面與人的器官極為相似，已經(jīng)成為國際上理想的異種器官移植研究材料。目前，歐洲哥廷根小型豬作為糖尿病、心臟病、帕金森氏癥等重大人類疾病及新藥研究的動物模型，也得到了全世界醫(yī)藥管理機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。 (1)異種器官移植到人體內(nèi)會發(fā)生________，從而使外源器官難以存活。為解決這一難題，必須設(shè)法除去醫(yī)用小型豬的________基因，或抑制該基因的________。 (2)向小型豬轉(zhuǎn)入外源基因時.其受體細(xì)胞通常是________，導(dǎo)入方法是________。 (3)要對轉(zhuǎn)基因成功的醫(yī)用小型豬進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，可采用的技術(shù)手段是________。 (4)利用基因工程技術(shù)，可以獲得乳汁中含有藥用蛋白的動物，這種動物叫做________。為了獲得該動物，需將________基因與________基因的啟動子等調(diào)控組件重組在一起，構(gòu)建基因表達(dá)載體。 3.(xx許昌三市聯(lián)考)人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型常用于致病機(jī)理的探討及治療藥物的篩選。利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠的流程如圖所示(注：基因B為高血壓相關(guān)基因)。 (1)進(jìn)行①過程之前，需對人工采集的精子進(jìn)行________處理。完成②過程常采用的方法是________，④過程中，為了防止污染，通常還要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的________。 (2)從人體細(xì)胞中獲取基因B時用到的工具酶是________，在構(gòu)建的基因表達(dá)載體中，高血壓相關(guān)基因的首端必須有________，它是RNA聚合酶的識別和結(jié)合部位。 (3)圖示中甲為________(時期)的去核卵母細(xì)胞，⑤過程操作技術(shù)叫做________。 (4)要在分子水平上檢測成功導(dǎo)入的B基因在大鼠中是否成功表達(dá)，可采用________方法，如果高血壓相關(guān)基因已在大鼠體內(nèi)成功表達(dá)，可用其建立高血壓轉(zhuǎn)基因動物模型。 4.(xx濟(jì)寧模擬)圖示方案為人們獲得生物新品種的過程，請回答下列問題： 方案Ⅰ.抗凍蛋白基因煙草細(xì)胞→抗凍煙草 方案Ⅱ.A基因全免疫過的B細(xì)胞→體外培養(yǎng)→單克隆抗體 方案Ⅲ.人的生長激素基因牛的受精卵→早期胚胎受體母牛→轉(zhuǎn)基因牛 (1)基因工程的核心步驟是________。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中，根據(jù)農(nóng)桿菌的特點(diǎn)，如果將抗凍蛋白基因插入到________上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以使目的基因進(jìn)入植物細(xì)胞，并將其插入到植物細(xì)胞中________上。 (2)推測方案Ⅱ中A基因所起的作用是________，請寫出該方案獲得的細(xì)胞中遺傳信息傳遞時所遵循的法則____________________________________。 (3)方案Ⅲ中的轉(zhuǎn)基因牛可以通過分泌乳汁來生產(chǎn)人的生長激素。這需要將人的生長激素基因與________的啟動子等調(diào)控組件重組在一起。該方案中的早期胚胎在移植入受體母牛子宮之前，必須對胚胎進(jìn)行性別鑒定一般是取處于________時期的________細(xì)胞進(jìn)行檢測。 5.(xx黑龍江哈爾濱一中期中考試)胰島素是治療糖尿病的常用藥物之一，現(xiàn)在一般都通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)用微生物生產(chǎn)。下面是有關(guān)轉(zhuǎn)基因技術(shù)生產(chǎn)胰島素的相關(guān)內(nèi)容，請根據(jù)所學(xué)知識回答各題。 如圖為一個作為載體的質(zhì)粒，其中P段為啟動子之一，T段為終止子之一，tctR基因?yàn)樗沫h(huán)素抗性基因，ampR基因?yàn)榘逼S青霉素抗性基因，ori為復(fù)制原點(diǎn)。箭頭所示為兩種限制酶的酶切位點(diǎn)。 (1)獲取胰島素基因時除了從供體細(xì)胞中或基因文庫中直接獲取以外，還可以通過PCR擴(kuò)增或者_(dá)_______________，后者要求目的基因長度較________而且________________。 (2)用如圖質(zhì)粒作為載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作時同時使用EcoRⅠ和BamⅠ型兩種限制酶切割質(zhì)粒和目的基因所在DNA的兩端，其目的是防止目的基因和質(zhì)粒反向連接或出現(xiàn)________________的現(xiàn)象。 (3)將胰島素基因和質(zhì)粒通過________________酶作用連接后，需要用________________處理大腸桿菌才能導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中。 (4)經(jīng)過導(dǎo)入的大腸桿菌進(jìn)行初步培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中除了水分和大腸桿菌生長所必需的各種營養(yǎng)成分之外還需要加入一定量的________________以保證獲得的菌株都是成功導(dǎo)入目的基因的。 (5)從細(xì)胞結(jié)構(gòu)角度分析，最終獲得的轉(zhuǎn)基因大腸桿菌生產(chǎn)的胰島素是否與人體胰島素具有相同生物活性？________，原因是________________________________ ______________________________________________________________________。 6.(xx河南鄭州二模)普通番茄細(xì)胞中含有多聚半乳糖醛酸酶(簡稱PG)基因，控制細(xì)胞產(chǎn)生PG，該酶能破壞細(xì)胞壁，使番茄軟化，不耐貯藏?？茖W(xué)家將抗PG基因?qū)敕鸭?xì)胞，培育出了抗軟化、保鮮時間長的轉(zhuǎn)基因番茄。請運(yùn)用所學(xué)知識回答下列問題： (1)該實(shí)驗(yàn)中的目的基因是________________。若實(shí)驗(yàn)操作中所用的目的基因既含有內(nèi)含子也含有啟動子，則該基因取自________文庫。基因工程操作的核心步驟是____________________________________________________________________。 (2)將含有目的基因的番茄細(xì)胞培養(yǎng)為番茄植株需借助________技術(shù)，由細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程稱為________。 (3)抗PG基因是PG基因的反義基因，推測轉(zhuǎn)基因番茄抗軟化、保鮮時間長的原因?yàn)椋嚎筆G基因產(chǎn)生的mRNA與PG基因產(chǎn)生的________互補(bǔ)，形成了________，阻斷了基因表達(dá)的________過程，因此番茄細(xì)胞就不能產(chǎn)生________。 (4)運(yùn)載體Ti質(zhì)粒中含有________序列，可以將目的基因整合到宿主細(xì)胞的染色體上。若將得到的二倍體轉(zhuǎn)基因番茄植株自交，F(xiàn)1中抗軟化與不抗軟化的植株數(shù)量比為3∶1，則可推測目的基因整合到了________。 A.一對同源染色體的一條上 B.一對同源染色體的兩條上 C.兩條非同源染色體上 D.線粒體中的DNA上 7.(xx荊州市模擬)為探究SHH基因與角化囊腫發(fā)生的相關(guān)性，科研人員利用SHH基因的非模板鏈轉(zhuǎn)錄合成RNA作為探針，進(jìn)行分子雜交實(shí)驗(yàn)，以檢測SHH基因在角化囊腫中的表達(dá)情況，其基本流程如圖(Amp表示氨芐青霉素抗性基因；LacZ基因被SHH基因插入后不表達(dá))，請回答： (1)基因工程成功實(shí)施的理論基礎(chǔ)有_______________________________________ ______________________________________________________________________。 (2)重組載體中SHH基因轉(zhuǎn)錄合成RNA探針時，________(填“需要”或“不需要”)啟動子。 (3)步驟②中，用Ca2＋處理大腸桿菌，使之成為________細(xì)胞，然后導(dǎo)入重組載體。實(shí)驗(yàn)中，用添加氨芐青霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌，未導(dǎo)入質(zhì)粒的細(xì)菌將會死亡，原因是這種細(xì)菌不含有________基因。 (4)能表達(dá)LacZ基因的大腸桿菌在含有IPTG和X－gal的培養(yǎng)基上會形成藍(lán)色菌落，易于識別，根據(jù)上述原理可以初步判斷________(填“藍(lán)色”或“白色”)菌落中的大腸桿菌為重組菌。 (5)將制備的探針加入角化囊腫切片中，探針將與________形成雜交帶，進(jìn)而判斷SHH基因的轉(zhuǎn)錄情況，此過程用到的相關(guān)檢測方法(技術(shù))是________。 8.(xx湖南株洲質(zhì)檢)人類在預(yù)防與診療傳染性疾病過程中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病的病原體為RNA病毒，該病毒表面的A蛋白為主要抗原，且疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖： (1)過程①代表的過程是________。 (2)過程③構(gòu)建出的表達(dá)載體必須要含有__________________和目的基因等結(jié)構(gòu)。 (3)生產(chǎn)藥物時可用微生物做受體細(xì)胞，則④應(yīng)采用________處理，使受體細(xì)胞處于________，從而將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞；藥物生產(chǎn)也可用乳腺生物反應(yīng)器，那么④應(yīng)采用________的方法，從而將表達(dá)載體導(dǎo)入受體細(xì)胞。 (4)過程⑦的實(shí)驗(yàn)技術(shù)名稱是________，誘導(dǎo)該過程的化學(xué)試劑是________。 (5)對健康人進(jìn)行該傳染病免疫預(yù)防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的________作疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，可以從疑似患者體內(nèi)分離出病毒，與已知病毒進(jìn)行________比較；或用圖中的________進(jìn)行特異性結(jié)合檢測。 課時考點(diǎn)42　細(xì)胞工程 1.(xx全國理綜，2)關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)的敘述，錯誤的是(　　) A.動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)所用培養(yǎng)基不同 B.動物細(xì)胞培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)過程中都要用到胰蛋白酶 C.煙草葉片離體培養(yǎng)能產(chǎn)生新個體，小鼠雜交瘤細(xì)胞可離體培養(yǎng)增殖 D.動物細(xì)胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質(zhì)，莖尖培養(yǎng)可用于植物脫除病毒 2.(xx課標(biāo)卷Ⅰ，40)某研究者用抗原(A)分別免疫3只同種小鼠(X、Y和Z)，每只小鼠免疫5次，每次免疫一周后測定各小鼠血清抗體的效價(能檢測出抗原抗體反應(yīng)的血清最大稀釋倍數(shù))，結(jié)果如下圖所示。 若要制備雜交瘤細(xì)胞，需取免疫后小鼠的B淋巴細(xì)胞(染色體數(shù)目40條)，并將該細(xì)胞與體外培養(yǎng)的小鼠骨髓瘤細(xì)胞(染色體數(shù)目60條)按一定比例加入試管中，再加入聚乙二醇誘導(dǎo)細(xì)胞融合，經(jīng)篩選培養(yǎng)及抗體檢測，得到不斷分泌抗A抗體的雜交瘤細(xì)胞。 回答下列問題。 (1)制備融合所需的B淋巴細(xì)胞時，所用免疫小鼠的血清抗體效價需達(dá)到16 000以上，則小鼠最少需要經(jīng)過________次免疫后才能有符合要求的。達(dá)到要求后的X、Y、Z這3只免疫小鼠中，最適合用于制備B淋巴細(xì)胞的是________小鼠，理由是_________________________________________________________________。 (2)細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)完成后，融合體系中除含有未融合的細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞外，可能還有__________________________________________，體系中出現(xiàn)多種類型細(xì)胞的原因是______________________________________________________________ ______________________________________________________________________。 (3)雜交瘤細(xì)胞中有________個細(xì)胞核，染色體數(shù)目最多是________條。 (4)未融合的B淋巴細(xì)胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是________________。 3.(xx課標(biāo)全國理綜Ⅱ，40)甲、乙是染色體數(shù)目相同的兩種二倍體藥用植物，甲含有效成分A，乙含有效成分B。某研究小組擬培育同時含有A和B的新型藥用植物。 回答下列問題： (1)為了培育該新型藥用植物，可取甲和乙的葉片，先用________酶和________酶去除細(xì)胞壁，獲得具有活力的________，再用化學(xué)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)二者融合，形成的融合細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)形成________組織，然后經(jīng)過________形成完整的雜種植株。這種培育技術(shù)稱為__________________________。 (2)上述雜種植株屬于多倍體，多倍體是指__________________________________ ______________________________________________________________________， 假設(shè)甲與乙有性雜交的后代是不育的，而上述雜種植株是可育的，造成這種差異的原因是___________________________________________________________。 (3)這種雜種植株可通過制作人工種子的方法來大量繁殖。經(jīng)植物組織培養(yǎng)得到的________________________等材料用人工薄膜包裝后可得到人工種子。 4.(xx江蘇卷，9)下列有關(guān)細(xì)胞工程的敘述，正確的是(　　) A.PEG是促細(xì)胞融合劑，可直接誘導(dǎo)植物細(xì)胞融合 B.用原生質(zhì)體制備人工種子，要防止細(xì)胞破裂 C.骨髓瘤細(xì)胞經(jīng)免疫處理，可直接獲得單克隆抗體 D.核移植克隆的動物，其線粒體DNA來自供卵母體 5.(xx江蘇卷，10)定量分析是科學(xué)研究的重要方法。下列能用血細(xì)胞計數(shù)板直接計數(shù)的是(　　) A.海拉細(xì)胞懸液 B.濃縮培養(yǎng)的噬菌體 C.自來水中大腸桿菌 D.蛙卵 6.(xx高考安徽卷，31－Ⅱ)科研人員采用轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因綿羊，以便通過乳腺生物反應(yīng)器生產(chǎn)人凝血因子IX醫(yī)用蛋白，其技術(shù)路線如圖。 (1)由過程①獲得的A為________。 (2)在核移植之前，必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核，目的是____________________________。受體應(yīng)選用________期卵母細(xì)胞。 (3)進(jìn)行胚胎移植時，代孕母羊?qū)σ迫胱訉m的重組胚胎基本上不發(fā)生________，這為重組胚胎在代孕母羊體內(nèi)的存活提供了可能。 (4)采用胎兒成纖維細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞克隆，理論上可獲得無限個轉(zhuǎn)基因綿羊，這是因?yàn)開____________________________________________________________。 7.(xx天津卷，7)DHA對腦神經(jīng)發(fā)育至關(guān)重要。以A、B兩種單細(xì)胞真核藻為親本，利用細(xì)胞融合技術(shù)選育高產(chǎn)DHA融合藻。兩種藻特性如下表。 親本藻 優(yōu)勢代 謝類型 固體培養(yǎng)基 上藻落直徑 A藻 自養(yǎng) 0.06 小 0.7 B藻 異養(yǎng) 0.14 大 無 據(jù)表回答： (1)選育的融合藻應(yīng)具有A藻________與B藻________的優(yōu)點(diǎn)。 (2)誘導(dǎo)融合前需用纖維素酶處理兩種藻，其目的是獲得 __________________。 (3)通過以下三步篩選融合藻，步驟________可淘汰B藻，步驟________可淘汰生長速率較慢的藻落，再通過步驟________生產(chǎn)所需的融合藻。 步驟a：觀察藻落的大小 步驟b：用不含有機(jī)碳源(碳源——生物生長的碳素來源)的培養(yǎng)基進(jìn)行光照培養(yǎng) 步驟c：測定DHA含量 (4)以獲得的融合藻為材料進(jìn)行甲、乙、丙三組試驗(yàn)，結(jié)果如下圖。 ①甲組條件下，融合藻產(chǎn)生[H]的細(xì)胞器是________；丙組條件下產(chǎn)生ATP的細(xì)胞器是________。 ②與甲、丙兩組相比，乙組融合藻生長速率較快，原因是在該培養(yǎng)條件下______________________________________________________________________。 甲、乙兩組DHA產(chǎn)量均較高，但實(shí)際生產(chǎn)中往往采用甲組的培養(yǎng)條件，其原因是___________________________________________________________________。 8.(xx福建卷，33)[生物—現(xiàn)代生物科技專題]Rag2基因缺失小鼠不能產(chǎn)生成熟的淋巴細(xì)胞。科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對Rag2基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療。其技術(shù)流程如圖： (1)步驟①中，在核移植前應(yīng)去除卵母細(xì)胞的__________________。 (2)步驟②中，重組胚胎培養(yǎng)到________期時，可從其內(nèi)細(xì)胞團(tuán)分離出ES細(xì)胞。 (3)步驟③中，需要構(gòu)建含有基因Rag2的表達(dá)載體。可以根據(jù)Rag2基因的________設(shè)計引物，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在片段兩側(cè)進(jìn)行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達(dá)載體，所選擇的表達(dá)載體上應(yīng)具有________________酶的酶切位點(diǎn)。 (4)為檢測Rag2基因的表達(dá)情況，可提取治療后小鼠骨髓細(xì)胞的________，用抗Rag2蛋白的抗體進(jìn)行雜交實(shí)驗(yàn)。 9.(xx廣東卷，29)鐵皮石斛是我國名貴中藥，生物堿是其有效成分之一。應(yīng)用組織培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)鐵皮石斛擬原球莖(簡稱PLBs，類似愈傷組織)生產(chǎn)生物堿的實(shí)驗(yàn)流程如下： 在固體培養(yǎng)基上，PLBs的重量、生物堿含量隨增殖培養(yǎng)時間的變化如圖所示，請回答下列問題。 (1)選用新生營養(yǎng)芽為外植體的原因是_____________________________________ ______________________________________________________________________， 誘導(dǎo)外植體形成PLBs的過程稱________。 (2)與黑暗條件下相比，PLBs在光照條件下生長的優(yōu)勢體現(xiàn)在________，________，________。 (3)脫落酸(ABA)能提高生物堿含量，但會抑制PLBs的生長。若采用液體培養(yǎng)，推測添加適量的ABA可提高生物堿產(chǎn)量。同學(xué)們擬開展探究實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該推測，在設(shè)計實(shí)驗(yàn)方案是探討了以下問題： ①ABA的濃度梯度設(shè)置和添加方式：設(shè)4個ABA處理組，1個空白對照組，3次重復(fù)。因ABA受熱易分解，故一定濃度的無菌ABA母液應(yīng)在各組液體培養(yǎng)基________后按比例加入。 ②實(shí)驗(yàn)進(jìn)程和取樣：實(shí)驗(yàn)50天完成，每10天取樣，將樣品(PLBs)稱重(g/瓶)后再測定生物堿含量。如初始(第0天)數(shù)據(jù)已知，實(shí)驗(yàn)過程中還需測定的樣品數(shù)為________。 ③依所測定數(shù)據(jù)確定適宜的ABA濃度和培養(yǎng)時間：當(dāng)某3個樣品(重復(fù)樣)的________時，其對應(yīng)的ABA濃度為適宜濃度，對應(yīng)的培養(yǎng)時間是適宜培養(yǎng)時間。  1.(xx石家莊質(zhì)檢)細(xì)胞工程技術(shù)研究，特別是不對稱細(xì)胞雜交等技術(shù)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。請回答下列有關(guān)問題： (1)植物組織培養(yǎng)的原理是________________。將離體的器官或組織，首先經(jīng)過脫分化培養(yǎng)形成________，然后再分化最終形成完整植株。 (2)細(xì)胞的不對稱雜交是指將不對等的細(xì)胞進(jìn)行融合，如將二倍體甘藍(lán)體細(xì)胞與其配子細(xì)胞進(jìn)行的融合：首先經(jīng)________酶的作用去除細(xì)胞壁，形成________，再經(jīng)物理或化學(xué)方法，促使二者融合，其中常用的化學(xué)誘導(dǎo)劑為________，融合后符合育種條件的植物細(xì)胞中有________個染色體組。 (3)動物細(xì)胞培養(yǎng)液為合成培養(yǎng)基，但該培養(yǎng)基中往往要加入一些________等天然成分。動物細(xì)胞培養(yǎng)所需氣體主要有O2和CO2，CO2的主要作用是______________________________________________________________________ ______________________________________________________________________。 2.(xx河北三市二聯(lián))胚胎干細(xì)胞簡稱ES或EK細(xì)胞，是一種全能性干細(xì)胞，具有自我更新和多向分化的潛能，在臨床移植醫(yī)學(xué)、細(xì)胞治療、細(xì)胞工程、生物學(xué)基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域具有重要的科學(xué)意義和巨大的應(yīng)用前景。請回答下列問題。 (1)ES細(xì)胞從________和________獲取，對它可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。 (2)人類在根治糖尿病時，可通過ES細(xì)胞定向分化出________(填寫細(xì)胞名稱)再進(jìn)行移植。此過程中，若定向誘導(dǎo)培育出相應(yīng)的器官進(jìn)行移植除能解決目前臨床上存在的供體器官不足的問題外，還有一大優(yōu)點(diǎn)是________________。 (3)若將ES細(xì)胞體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)基中通常需加入________等一些天然成分，還需要提供5%的CO2，其作用是________。 (4)用ES細(xì)胞進(jìn)行核移植，所選擇的卵母細(xì)胞必須發(fā)育到________(時期)才能作受體細(xì)胞，與體細(xì)胞核移植相比更容易發(fā)育成克隆動物，原因在于ES細(xì)胞的分化程度________，全能性高。 3.(xx濰坊統(tǒng)考)鼠源單克隆抗體用于疾病的治療時，易發(fā)生不良反應(yīng)，科學(xué)家通過對鼠和人控制抗體產(chǎn)生的基因進(jìn)行拼接，實(shí)現(xiàn)了對鼠源單克隆抗體的改造，生產(chǎn)出對人體不良反應(yīng)小、效果更好的單克隆抗體。請回答： (1)鼠源單克隆抗體是將經(jīng)過免疫的小鼠________細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，然后篩選出________的雜交瘤細(xì)胞，并通過體內(nèi)或體外培養(yǎng)生產(chǎn)的抗體。 (2)動物細(xì)胞融合常用________誘導(dǎo)，細(xì)胞融合體現(xiàn)了細(xì)胞膜的________。在體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞時，培養(yǎng)液中通常加入________等天然成分，將其置于95%空氣加5%CO2的氣體環(huán)境中，CO2的作用是________________。 (3)基因拼接用到的工具有________和________。 (4)單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)是________。 4.(xx安康二調(diào))埃博拉病毒(EBOV)是一種能引起人類和靈長類動物發(fā)生埃博拉出血熱(EBHF)的烈性病毒，其遺傳物質(zhì)為RNA，利用相應(yīng)的生物學(xué)技術(shù)制備出抗EBOV的單克隆抗體，可快速檢測EBOV。請回答下列問題： (1)途徑一：在制備抗EBOV的單克隆抗體的過程中，先給小鼠注射一種純化的EBOV蛋白，一段時間后，從小鼠的脾臟中獲取________細(xì)胞，將獲得的細(xì)胞與小鼠的________細(xì)胞融合，再經(jīng)過篩選、檢測，最終可獲得所需的雜交瘤細(xì)胞，在細(xì)