培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化課件.ppt

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1、 培 養(yǎng) 液 中 酵 母 菌 種 群 數(shù) 量 的 變 化 探 究 ： 培 養(yǎng) 液 中 酵 母 菌 種 群 數(shù) 量 的 變 化目 的 要 求1、 學 習 利 用 血 球 計 數(shù) 板 進 行 微 生 物 計 數(shù) 的 方 法2、 實 驗 探 究 培 養(yǎng) 液 中 酵 母 菌 種 群 數(shù) 量 的 變 化3、 注 意 樣 方 法 的 應 用4、 體 會 影 響 種 群 數(shù) 量 變 化 的 因 素 1、 酵 母 菌 的 繁 殖 方 式 主 要 是 :2、 酵 母 菌 的 呼 吸 方 式 是 :兼 性 厭 氧 (可 進 行 有 氧 呼 吸 和 無 氧 呼 吸 )回 顧 思 考 : 出 芽 生 殖3、 酵 母

2、菌 的 培 養(yǎng) 條 件 要 注 意 那 些 問 題 ?比 如 要 用 適 宜 的 溫 度 培 養(yǎng) ,調(diào) 節(jié) 好 PH值 ,溶 氧量 的 控 制 等 。 一 、 血 球 計 數(shù) 板 1、 血 球 計 數(shù) 板 的 結(jié) 構(gòu) 血 球 計 數(shù) 板 是 一 種 專 門 用 于 計 算 較 大單 細 胞 微 生 物 數(shù) 量 的 儀 器 ， 由 一 塊 比 普通 載 玻 片 厚 的 特 制 玻 片 制 成 的 玻 片 中 有四 條 下 凹 的 槽 ， 構(gòu) 成 三 個 平 臺 。 中 間 的平 臺 較 寬 ， 其 中 間 又 被 一 短 橫 槽 隔 為 兩半 ， 每 半 邊 上 面 刻 有 一 個 方 格 網(wǎng)

3、。 大 方 格 中方格小方格 方 格 網(wǎng) 上 刻 有 9個大 方 格 ， 其 中 只 有中 間 的 一 個 大 方 格為 計 數(shù) 室 ， 供 微 生物 計 數(shù) 用 。 大 方 格 的 長 和 寬 各 為 1mm， 深 度為 0.1mm， 即 1mm 1mm 0.1mm，其 容 積 為 0.1mm 3； 大 方 格 的 長 和 寬 各 為 2mm， 深 度 為0.1mm， 即 2mm 2mm 0.1mm， 其容 積 為 0.4mm3 計 數(shù) 室 通 常 也 有 兩 種 規(guī) 格16 25型 ： 即 大 方 格 內(nèi) 分 為16中 格 ， 每 一 中 格又 分 為 25小 格25 16型 ： 即 大

4、方 格 內(nèi) 分 為25中 格 ， 每 一 中 格又 分 為 16小 格 。 不 管 計 數(shù) 室 是 哪 一 種 構(gòu) 造 ， 其 每 一 大 方 格 都 是 由16 25=25 16=400個 小 方 格 組 成 。 2、 計 數(shù) 16 25型 ： 一 般 取 四 角 的四 個 中 方 格 （ 100個 小 方 格 ） 計 數(shù)25 16型 ： 一 般 計 數(shù) 四 個 角和 中 央 的 五 個 中 方格 （ 80個 小 方 格 ）的 細 胞 數(shù) 。 3、 計 算 以 1mm 1mm 0.1mm型 為 例 計 數(shù) 室 容 積 為 0.1mm3， 則 每 個 小 方 格 的 容 積為 1/4000 m

5、m3 。100個 小 方 格 細 胞 總 數(shù) / 100 400 10000 稀 釋 倍 數(shù) 酵 母 細 胞 個 數(shù) 1mL =80個 小 方 格 細 胞 總 數(shù) / 80 400 10000 稀 釋 倍 數(shù) 例 1 通 常 用 血 球 計 數(shù) 板 對 培 養(yǎng) 液 中 酵 母菌 進 行 計 數(shù) ， 若 計 數(shù) 室 為1mm 1mm 0.1mm方 格 ， 由 400個 小 方格 組 成 。 若 多 次 重 復 計 數(shù) 后 ， 算 得 每 個 小方 格 中 平 均 有 5個 酵 母 菌 ， 則 10mL該 培 養(yǎng)液 中 酵 母 菌 總 數(shù) 有 個 。2 108 例2 檢測員將1 mL水樣稀釋10倍

6、后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用濾紙吸去多余液體。已知每個計數(shù)室由2516400個小格組成，容納液體的總體積為01 mm3。 現(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e 5個中格80個小格內(nèi)共有藍藻n個，則上述水樣中約有藍藻 個mL。 5n 105 4、 血 球 計 數(shù) 板 的 使 用 方 法 步 驟 計 數(shù) ： 稍 待 片 刻 （ 約 5min） ， 待 酵 母 菌 細 胞 全 部 沉 降到 計 數(shù) 室 底 部 后 ， 將 計 數(shù) 板 放 在 載 物 臺 的 中 央 ， 先 在低 倍 鏡 下 找 到 計 數(shù) 室 所

7、在 位 置 后 ， 再 轉(zhuǎn) 換 高 倍 鏡 觀 察 、 計 數(shù) 并 記 錄 。 鏡 檢 計 數(shù) 室 ： 在 加 樣 前 ， 先 對 計 數(shù) 板 的 計 數(shù) 室 進 行 鏡 檢 。 若有 污 物 ， 則 需 清 洗 ， 吹 干 后 才 能 進 行 計 數(shù) 。 加 樣 品 ： 將 清 潔 干 燥 的 血 球 計 數(shù) 板 的 計 數(shù) 室 上 加 蓋 專 用 的 蓋 玻 片 ，用 吸 管 吸 取 稀 釋 后 的 酵 母 菌 懸 液 ， 滴 于 蓋 玻 片 邊 緣 ， 讓 培養(yǎng) 液 自 行 緩 緩 滲 入 ， 一 次 性 充 滿 計 數(shù) 室 ， 防 止 產(chǎn) 生 氣 泡 ，充 入 細 胞 懸 液 的 量

8、以 不 超 過 計 數(shù) 室 臺 面 與 蓋 玻 片 之 間 的 矩形 邊 緣 為 宜 。 多 余 培 養(yǎng) 液 可 用 濾 紙 吸 去 。 5、 血 球 計 數(shù) 板 的 使 用 注 意 事 項 從 試 管 中 吸 出 培 養(yǎng) 液 進 行 計 數(shù) 之 前 ， 要 將 試 管輕 輕 震 蕩 幾 下 ， 這 樣 使 酵 母 菌 分 布 均 勻 ， 防 止 酵母 凝 聚 沉 淀 ， 提 高 計 數(shù) 的 代 表 性 和 準 確 性 ， 求 得的 培 養(yǎng) 液 中 的 酵 母 菌 數(shù) 量 誤 差 小 。 如 果 一 個 小 方 格 內(nèi) 酵 母 菌 過 多 ， 難 以 數(shù) 清 ， 應 當 對 培養(yǎng) 液 進 行

9、稀 釋 以 便 于 酵 母 菌 的 計 數(shù) 。 具 體 方 法 是 ： 搖 勻試 管 ， 取 1mL酵 母 菌 培 養(yǎng) 液 ， 加 入 成 倍 的 無 菌 水 稀 釋 ，稀 釋 n倍 后 ， 再 用 血 球 計 數(shù) 板 計 數(shù) ， 所 得 數(shù) 值 乘 以 稀 釋倍 數(shù) 。 以 每 小 方 格 內(nèi) 含 有 4 5個 酵 母 細 胞 為 宜 。 特 別 是在 培 養(yǎng) 后 期 的 樣 液 需 要 稀 釋 后 計 數(shù) 。 對 于 壓 在 方 格 界 線 上 的 酵 母 菌 應 當 計 數(shù) 同 側(cè) 相 鄰 兩 邊上 的 菌 體 數(shù) ， 一 般 可 采 取 “ 數(shù) 上 線 不 數(shù) 下 線 ， 數(shù) 左 線

10、不數(shù) 右 線 ” 的 原 則 處 理 ， 另 兩 邊 不 計 數(shù) 。 對 每 個 樣 品 可 計 數(shù) 三 次 ， 再 取 其 平 均 值 。 計 數(shù) 時 應 不 時 調(diào) 節(jié) 焦 距 ， 才 能 觀 察 到 不 同 深 度 的 菌 體 。 血 球 計 數(shù) 板 使 用 后 ， 用 自 來 水 沖 洗 ， 切勿 用 硬 物 洗 刷 ， 以 免 損 壞 網(wǎng) 格 。 1、 研 究 過 程 測 定定 期 取 樣測 細 胞 數(shù) 目2、 測 定 方 法測 重 量 濕 重干 重（ 一 ） 研 究 方 法二 、 微 生 物 的 種 群 數(shù) 量 變 化在 恒 定 容 積 液 體培 養(yǎng) 基 中 培 養(yǎng) 細菌數(shù)目的對數(shù)

11、時間0 1 2 3 4細 菌 的 生 長 曲 線（ 二 ） 種 群 數(shù) 量 變 化 規(guī) 律1： 調(diào) 整 期2： 對 數(shù) 期 3： 穩(wěn) 定 期4： 衰 亡 期 細菌數(shù)目的對數(shù)時間01 2 3 4細菌的生長速率時間0 1 2 3 4細菌生長曲線細菌生長速率曲線該怎樣畫呢？ 目 的 ： 使 微 生 物 的 生 長 較 長 時 間 的 維 持 在 穩(wěn) 定 期 。 優(yōu) 點 ： 縮 短 了 培 養(yǎng) 周 期 ,提 高 設(shè) 備 利 用 率 ,便 于 自 動化 管 理 。 連 續(xù) 培 養(yǎng) 例 2 （ 08江 蘇 卷 ） 為 研 究 酵 母 菌 種 群 密 度 的 動 態(tài) 變 化 ，某 同 學 按 下 表 所 列

12、 條 件 進 行 了 A、 B、 C和 D 共 4組 實 驗 ，用 1 000mL錐 形 瓶 作 為 培 養(yǎng) 器 皿 ， 棉 塞 封 口 ， 在 25 下 靜置 培 養(yǎng) ， 其 他 實 驗 條 件 均 相 同 ， 定 時 用 血 球 計 數(shù) 板 計 數(shù) 。根 據(jù) 實 驗 結(jié) 果 繪 出 的 酵 母 菌 種 群 密 度 變 化 曲 線 圖 如 下 ，請 分 析 回 答 以 下 問 題 。1） 圖 中 曲 線 、 和 分 別 是 _組 、_組 和 _組 的 結(jié) 果 。D BA2） B組 和 A組 的 實 驗 結(jié) 果 不 同 的 原 因是 B組 _ _。培 養(yǎng) 液 較 多 ， 與 空 氣 接 觸 面

13、 積 較 小 ， 故 供 氧 較 少 3） D組 和 B組 的 實 驗 結(jié) 果 不 同 的 原 因 是 D組 _ _。葡 萄 糖 濃 度 較 低 ， 故 營 養(yǎng) 物 供 應 較 少 4） 在 整 個 實 驗 過 程 中 ， 直 接 從 靜 置 的 培 養(yǎng) 瓶 中 取 培 養(yǎng) 原液 計 數(shù) 的 做 法 是 錯 誤 的 ， 正 確 的 方 法 是 和 。搖 勻 培 養(yǎng) 液 后 再 取 樣 培 養(yǎng) 后 期 的 樣 液 稀 釋 后 再 計 數(shù) 5） 實 驗 結(jié) 束 后 ， 用 試 管 刷 蘸 洗 滌 劑 擦 洗 血 球 計 數(shù) 板的 做 法 是 錯 誤 的 ， 正 確 的 方 法 是 浸 泡 和 沖

14、洗 細 菌 細 胞 數(shù) 目 的 測 定待 測 樣 品 等 量 的 已 知 含量 的 紅 細 胞 混 勻涂 抹 紅 細 胞細 菌測 定 ： 紅 細 胞 數(shù) 目細 菌 數(shù) 目計 算 單 位 體 積內(nèi) 的 細 菌 數(shù) 目 細 菌 重 量 的 測 定取 樣 ： 取 一 定 體 積 的 培 養(yǎng) 液離 心 分 離 、 反 復 洗 滌稱 濕 重 烘 干 稱 干 重 1、 調(diào) 整 期采 用 對 數(shù) 期 的 菌 體 作 為 菌 種 、增 加 接 種 量 、代 謝 活 躍 ； 體 積 增 大 ； 分 裂 遲 緩 。適 應 新 環(huán) 境1） 主 要 特 征 ：2） 原 因 ：3） 人 工 控 制 （ 縮 短 調(diào) 整

15、期 ） ： 個 體 ： 代 謝 旺 盛 ； 分 裂 最 快 ； 個 體 形 態(tài) 和 生 理 特 征 穩(wěn) 定 。群 體 ： 繁 殖 死 亡1） 主 要 特 征 ：2） 應 用 ：作 生 產(chǎn) 菌 種 ， 科 研 材 料 。2、 對 數(shù) 期 3、 穩(wěn) 定 期個 體 ： 積 累 有 害 代 謝 產(chǎn) 物 ； 有 些 出 現(xiàn) 芽 孢 。群 體 ： 活 菌 數(shù) 量 最 多 ； 繁 殖 死 亡1） 主 要 特 征 ：2） 原 因 ：生 存 條 件 相 對 惡 化 ： 營 養(yǎng) 物 質(zhì) 消 耗 ； 有 害代 謝 產(chǎn) 物 積 累 ； PH改 變種 內(nèi) 斗 爭 最 激 烈 。 個 體 ： 細 胞 形 態(tài) 多 樣群 體 ： 活 菌 數(shù) 急 劇 下 降 ； 繁 殖 死 亡1） 主 要 特 征 ：2） 原 因 ：生 存 環(huán) 境 極 度 惡 化（ 營 養(yǎng) 物 質(zhì) 消 耗 、 有 害 代 謝 產(chǎn) 物 積 累 、PH改 變 ）生 存 斗 爭 最 為 劇 烈 。4、 衰 亡 期 液 體 培 養(yǎng) 基 馬 鈴 薯 培 養(yǎng) 液 在 計 數(shù) 前 ， 還 應 有 哪 些 步 驟 ？ 需 注 意 些 什 么 ？計 數(shù)培 養(yǎng) 液 配 制滅 菌接 種培 養(yǎng) 需 進 行 滅 菌 ， 防 止 雜 菌 干 擾 ，造 成 試 驗 數(shù) 據(jù) 錯 誤如 何 計 數(shù) ？隨 機 取 樣 ， 多 次 計 數(shù) ， 取 平 均 值