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1、理發(fā)用具微生物檢測(cè)方法
金黃色葡萄球菌測(cè)定 GB /T 18204.7-2000
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了理發(fā)用具金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于公共理發(fā)用具的金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)，美容用具金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)可參照使用。
2 定義
金黃色葡萄球菌：指在Baurd Parker培養(yǎng)基或血平板培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，分解甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶陽性的革蘭氏陽性葡萄狀球菌。
3 儀器
3.1 顯微鏡。
3.2 培養(yǎng)箱
3.3 離心機(jī)
3.4 滅菌吸管
3.5 滅菌試管
3.6 載玻片
3.7 酒精燈
3.8 革蘭氏染色用有關(guān)器材
4 培養(yǎng)基和試劑
4.1胰酪胨大豆肉
2、湯
成分：胰酪胨(或胰蛋白胨) 17g
植物蛋白胨(或大豆蛋白胨) 3 g
氯化鈉 100g
磷酸氫二鉀 2.5g
葡萄糖 2.5g
蒸餾水 10 00m L
制法：將上述成分混合后，加熱溶解，調(diào)pH為7.2-7.3 ，分裝,121℃20m in高壓滅菌。
4.2 7.5%的氯化鈉肉湯
成分：蛋白胨 10g
牛肉膏 3 g
氯化鈉 75g
蒸餾
3、水 1000m L
制法：將 上述成分加熱溶解，調(diào)pH為7.4，分裝，121℃15m in高壓滅菌。
4.3 Baird Parker平板
成分：胰蛋白胨 10g
牛肉膏 5 g
酵母浸膏 1 g
丙酮酸鈉 10g
甘氨酸 12g
氯化鋰 (LiCl6H20) 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 950m L
pH 7 .0 士 0 .2
增菌劑的配制：30%卵黃鹽水50m L與除菌過濾的1%亞蹄酸鉀
4、溶液10m L混合，保存于冰箱內(nèi)。
制法：將 各成分加到蒸餾水中，加熱煮沸完全溶解，冷至25℃校正pH。分每瓶95m L,121℃高壓滅菌15 min,臨用時(shí)加熱熔化瓊脂，每95 mL加入預(yù)熱至50℃的卵黃亞砧酸鉀增菌劑5 mL，搖勻后傾注平板。培養(yǎng)基應(yīng)是致密不透明的。使用前在冰箱儲(chǔ)存，不得超過48 h；
4.4 血瓊脂培養(yǎng)基
成分：營養(yǎng)瓊脂100m L
脫纖維羊血(或兔血） 10m L
制法：將 營養(yǎng)瓊脂加熱溶化，待冷至50℃左右以無菌方法加人脫纖維羊血，搖勻，制成平板，置冰箱內(nèi)備用
4.5 甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基
成分： 蛋白胨10g
氯化鈉 5 g
5、 甘露醇 10g
牛肉膏 5 g
0.2% 磨香草酚藍(lán)溶液 12m l.
蒸餾水 1000m L
制法：將 蛋白胨、氯化鈉、牛肉膏加到蒸餾水中，加熱溶解，調(diào)pH7.4 ，加人甘露醇和指示劑，混勻后分裝試管中，115℃20 min高壓滅菌備用。
4.6 兔(人)血漿制備
取3. 8 % 檸檬酸鈉溶液，121℃3 0 min高壓滅菌,1份加兔(人)全血4份，混勻靜置，2 000-3 000 r/min離心3-5 min，血球下沉，取上面血漿。
4.7革蘭氏染色液
見GB/T 18204. 3-2000中第4章第4節(jié)。
5 操作
6、步驟
5.1 采樣方法同GB/T 18204. 6-2000.將大腸菌群檢測(cè)后剩余的5 mL待檢樣品，放入45 mL7.5%的氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基中，36℃士1℃培養(yǎng)24 h。
5.2 從培養(yǎng)液中取1-2接種環(huán)，劃線接種在Baird Pairker氏培養(yǎng)基(或用血平皿)，于36℃士1℃培養(yǎng)24 h。在Baird Parker氏培養(yǎng)基上菌落為圓形，光滑，凸起濕潤(rùn)，顏色呈黑灰色，邊緣整齊、周圍混濁，外層有一透明帶，在血平板上菌落呈圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周圍有溶血圈。
5.3 挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，為革蘭氏陽性，成葡萄狀排列。
5.4 甘露醇發(fā)酵試驗(yàn):取上述分純菌落
7、接種到甘露醇發(fā)酵培養(yǎng)基中，置36℃士1℃培養(yǎng)24 h，金黃色葡萄球菌應(yīng)能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸。
5.5 血漿凝固酶試驗(yàn)
5.5.1 玻片法:取清潔干燥玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴血漿，用接種環(huán)挑取待檢菌落，分別在生理鹽水及血漿中充分研磨混合。血漿與菌苔混懸液在5 min內(nèi)出現(xiàn)團(tuán)塊或顆粒狀凝塊時(shí)，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固現(xiàn)象者為陽性，如兩者均無凝固現(xiàn)象則為陰性。凡玻片試驗(yàn)呈陰性反應(yīng)或鹽水滴與血漿均有凝固現(xiàn)象，再進(jìn)行試管凝固試驗(yàn)。
5.5.2 試管法:吸取1:4新鮮血漿0.5 mL放人滅菌小試管中，再加人待檢菌24 h肉湯培養(yǎng)物0.5 mL?；靹?，放36℃士1℃ 溫箱或水浴中，每30m in觀察一次，24h 之內(nèi)如呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時(shí)以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物及肉湯培養(yǎng)基各0.5 mL，分別加人滅菌小試管內(nèi)與0.5 mLl：4血漿混勻，做為對(duì)照。
6 結(jié)果報(bào)告
凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽性，可報(bào)告檢出金黃色葡萄球菌。
理發(fā)用具微生物檢測(cè)方法金黃色葡萄球菌測(cè)定
